不同澄清劑對調臟舒秘合劑澄清度的影響*

范潤勇，徐 偉，蒲立立，張 明，鐘佰明，周 茜

（四川省南充市中醫醫院，四川 南充 637000）

合劑作為醫療機構中藥制劑常用劑型，臨床療效確切，使用人數多，服用方便，但合劑中常含有鞣質、淀粉、蛋白質等大分子物質，沉淀多、溶液渾濁，其澄清度不佳［1］，同時鞣質常與蛋白質、生物堿、多糖形成氫鍵生成不溶于水的沉淀，導致藥液渾濁［2］。據報道，殼聚糖［3-6］，101 果汁澄清劑、ZTC1 + 1 天然澄清劑及殼聚糖［7］，明膠和殼聚糖復配絮凝劑［8］，KBT - ZTC 澄清劑［9］均可作為合劑的澄清劑。調臟舒秘合劑為我院肛腸科范藝繽主任基于五臟同調法治療慢傳輸型便秘的臨床經驗方，臨床療效較好，由柏子仁、白術、白芍、肉蓯蓉、瓜蔞皮、瓜蔞子、枳實、當歸、甘草等藥味組方［10］。為改善調臟舒秘合劑的澄清度，提高產品質量，增強治療依從性，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測定調臟舒秘合劑中松果菊苷、芍藥苷和阿魏酸的含量，采用紫外-可見分光光度（UV-Vis）法測定透光率，以表示澄清度，以熵權法確定松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸、透光率和固體總量的權重，根據權重對上述指標進行綜合評分；查閱相關文獻，篩選調臟舒秘合劑最佳的澄清劑，比較吐溫80、海藻酸鈉、活性炭、明膠、殼聚糖、無水硫酸鈉、硅藻土、101 果汁澄清劑、ZTC1 + 1 天然澄清劑、瓊脂等澄清劑的澄清度，為解決醫療機構中藥制劑合劑澄清度問題提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Ultimate 3000型高效液相色譜儀（美國賽默飛世爾科技公司），配有WPS - 3000TSL 型進樣器，LPG -34000SDN 型四元泵，TCC - 3000SD 型柱溫箱，VWD -3100 型檢測器；AUW220D 型分析天平（日本島津公司，精度為十萬分之一）；FA2004 型分析天平（上海力辰科技儀器有限公司，精度為萬分之一）；TU-1901 型雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；G-100S型超聲波清洗器（深圳市歌能清洗設備有限公司，功率為500 W，頻率為40 kHz）；RE-1102 型旋轉蒸發儀（上海嘉鵬科技有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）型循環水真空泵（上海力辰科技儀器有限公司）；SYG-4型數顯恒溫水浴鍋（常州朗越儀器廠）；WGL-45B型電熱鼓風干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；LCK2000型煎藥機（天津三延精密機械有限公司）。

1.2 試藥

松果菊苷對照品（批號為111670-201907，純度為91.8%），芍藥苷對照品（批號為110736-202044，純度為96.8%），阿魏酸對照品（批號為110773-201915，純度為99.4%），均購自中國食品藥品檢定研究院；柏子仁（批號為200401），白術（批號為200501），白芍（批號為200501），枳實（批號為200101），瓜蔞子（批號為191201），瓜蔞皮（批號為200201），肉蓯蓉（批號為200201），當歸（批號為200501），甘草（批號為200401），均購自成都吉安康藥業有限公司，經南充市中醫醫院張德明中藥師鑒定均為正品；海藻酸鈉（上海埃彼化學試劑有限公司，批號為F20180515）；活性炭（批號為20210705），瓊脂粉（批號為20211027），均購自福晨（天津）化學試劑有限公司；明膠（天津市登峰化學試劑廠，批號為20211001）；無水硫酸鈉（批號為2015011201），硅藻土（批號為2016110801），均購自成都市科龍化工試劑廠；無水乙醇（成都市科隆化學品有限公司，批號為2021093002）；殼聚糖（恒鑫生物科技有限公司，批號為 20211112）；ZTC1 + 1 天 然 澄 清 劑（批 號 為20210820），101果汁澄清劑（批號為20210820），均購自四川世紀之星生物科技有限公司；乙腈為色譜純，水為怡寶純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 - 0.2%磷酸溶液（20∶80，V/V）；檢測波長：230 nm；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：5μL。理論板數按阿魏酸峰計應不低于5 000，分離度應不小于1.5，拖尾因子應在0.95～1.05 間，含量測定中靈敏度的信噪比應不低于43。

2.2 溶液制備

將調臟舒秘合劑每付處方加8 倍量水，提取2 次，每次1 h，最終將藥液濃縮至1 000 mL，精密量取調臟舒秘合劑樣品溶液1.0 mL，置5 mL容量瓶中，加水稀釋并定容，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

取松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸對照品各適量，精密稱定，加50%甲醇溶液超聲使溶解，分別制成每1 mL含496.1，105.6，100.2 μg的對照品溶液。

分別精密量取上述松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸對照品溶液，按 1∶10∶1（m/m/m）混合，即得混合對照品溶液。

按處方工藝稱取缺肉蓯蓉、白芍、當歸的調臟舒秘合劑，制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備缺肉蓯蓉、白芍、當歸的陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別取2.2 項下供試品溶液，松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸混合對照品溶液和陰性對照品溶液各5μL，按2.1 項下色譜條件進樣測定，供試品溶液色譜中相同保留時間處與混合對照品溶液有對應峰，且陰性對照無干擾，表明方法專屬性強。色譜圖見圖1。

圖1 專屬性試驗高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of the specific test

線性關系考察：分別精密量取系列質量濃度的松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，以峰面積積分值（Y）為縱坐標、進樣量（X，μg）為橫坐標進行線性回歸。結果見表1。

表1 線性關系考察結果Tab.1 Results of the linear relation test

精密度試驗：取2.2 項下混合對照品溶液，按2.1項下色譜條件連續進樣測定6 次。結果松果菊苷、芍藥苷和阿魏酸色譜峰峰面積的RSD分別為1.45%，1.01%，0.88%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，12，24 h 時按2.1 項下色譜條件進樣測定。結果松果菊苷、芍藥苷和阿魏酸色譜峰峰面積的RSD分別為2.56%，1.08%，0.57%（n=6），表明供試品溶液24 h 內穩定性良好。

重復性試驗：按處方稱取藥材，按供試品溶液制備方法平行制備供試品溶液6 份，按2.1 項下色譜條件進樣測定。結果松果菊苷、芍藥苷和阿魏酸色譜峰峰面積的RSD分別為3.00%，1.94%，2.91%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密量取已知含量的樣品6 份，每份1 mL，依法制備供試品溶液，精密加入混合對照品溶液1 mL，按2.1 項下色譜條件進樣測定，計算加樣回收率。結果松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸的平均加樣回收率分 別 為 97.56%，99.52%，101.30%，RSD分 別 為1.54%，2.03%，1.40%（n=6），表明方法準確度良好。

2.4 固體總量測定

按2020 年版《中國藥典（四部）》通則3101 固體總量測定法［11］測定調臟舒秘合劑的固體總量。

2.5 澄清方式選擇

根據前期預試驗，對比靜置、離心和加入澄清劑3種方式調臟舒秘合劑的澄清效果，以芍藥苷、固體總量和澄清度為指標。結果最佳澄清方式為加入澄清劑。

2.6 澄清度測定［12-13］

透光率表示光透過透明或半透明的光通量與其入射光通量的百分率。影響透光率的主要原因為溶液中溶質對光的吸收作用和溶液中懸浮顆粒對光的折射作用。當保證溶液中溶質濃度相同情況下，相同溫度的透光率反映溶液中懸浮顆粒的多少，透光率越低，懸浮顆粒越多，澄清度越低。因此，通過紫外可見分光光度計測定透光率可間接反映溶液的澄清度，本研究中于190～900 nm 全波長范圍掃描，最終確定透光率的檢測波長為850 nm。相對透光率計算公式見式（1）。

稀釋X倍后，相對透光率計算公式見式（2）。

式中，T相對表示相對透光率，T供試表示供試品溶液的透光率，T樣品對照表示供試品對照溶液（供試品溶液經澄清處理后）的透光率。

2.7 熵權法確定權重［14-22］

信息熵是系統不確定性和無序程度的度量，除度量數據包含的信息量，還可用于在多指標評價系統中確定各指標權重。將每個評價指標作為1 個隨機變量，計算該指標的熵權系數。取值變異程度越大越無序，提供的信息量越多，該指標越重要；反之則越不重要。計算步驟如下。

1）原始數據矩陣歸一化，建立原始評價指標矩陣

設m個評價指標、n個評價對象的原始數據矩陣為A=（aij）mn，對其歸一化后得到R=（Xij）mn，

對于大者為優的指標，按式（3）進行歸一化。

式中，Xij表示第i次試驗時在第j個評價指標的取值，i=1，2，3，…，m；j=1，2，3，…，n。

2）將原始數據矩陣（Xij）mn轉換為概率矩陣（Pij）mn

信息熵公式中，Pi為某個信息的概率，滿足0 ≤Pi≤ 1，必須先對矩陣（Xij）mn做歸一化處理，經處理后的矩陣可視為指標的概率矩陣。計算公式見式（4）。

式中，Pij表示第j次試驗在第i個評價指標下的概率。

松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸、固體總量、透光率的P矩陣如下。

3）計算信息熵（Hi）

按式（5）確定第i個評價指標的Hi，結果見表2。

表2 相關評價指標信息熵和熵權系數計算結果Tab.2 Results of information entropy and entropy-weight coefficient calculation of relevant evaluation indicators

4）計算熵權系數（Wj）

按式（6）計算Wj，結果見表2。

可知，當Hi越小，Wj越大，即當Xij相差越大，傳遞的信息量越多，作用越大，權重越大。

2.8 澄清工藝考察

將調臟舒秘合劑每付處方加8 倍量水，提取2 次，每次1 h，最終將藥液濃縮至1 000 mL。按調臟舒秘合劑煎煮方法，煎煮13 付，備用。澄清工藝考察方法有13種，考察結果見表3。可知，加入澄清劑后，不會影響藥液的有效成分含量，只是對澄清度有一定影響。采用熵權法確定了松果菊苷、芍藥苷、阿魏酸成分含量和固體總量、澄清度等5 個指標的權重，并進行綜合評分。ZTC1+1天然澄清劑澄清效果最佳，其次是海藻酸鈉和瓊脂。根據篩選出的最佳澄清劑，按ZTC1+1 天然澄清劑方法進行重復性試驗。結果ZTC1 + 1 天然澄清劑的效果較好，表明穩定性較好。

表3 澄清工藝考察結果（n=4）Tab.3 Results of investigation on the clarifying process（n=4）

3 討論

醫療機構中藥制劑合劑多采用煎煮方法進行提取，但藥液體積大、雜質多、沉淀多。隨著科學技術的發展，水提醇沉技術［23］、微濾［24］、超濾［25］、納濾、反滲透等膜分離技術［26-27］、高速離心技術、超臨界流體萃取技術、大孔樹脂吸附技術［28］等常用于中藥水提液的精制工藝中。但水提醇沉法成本高、乙醇回收難、耗醇量大、生產周期長，故不作為大批量生產除去沉淀的方法。同時，膜分離技術、高速離心技術、超臨界流體萃取技術、大孔樹脂吸附技術等耗材成本高或對設備要求高，不適宜用于醫療機構中藥制劑的純化。澄清劑改善醫療機構中藥制劑澄清度效果較好，成本較低，工藝簡單、穩定，且可工業化用于生產。

中藥提取液中加入吸附澄清劑，利用絮凝和凝聚的作用，除去中藥提取液中的雜質，使提取液變得澄清［29］。本研究中所用吸附澄清劑主要為有機絮凝劑和無機凝聚劑，常用于藥物與食品的澄清。參考文獻［30-34］，選用了吐溫80、海藻酸鈉、活性炭、明膠、殼聚糖、無水硫酸鈉（無機凝聚劑）、硅藻土（無機凝聚劑）、101 果汁澄清劑、ZTC1+1天然澄清劑、瓊脂10種澄清劑。由表3可知，加入天然澄清劑的澄清效果優于靜置法、離心法和水提醇沉法，有機絮凝劑的澄清效果總體比無機凝聚劑好，并篩選出調臟舒秘合劑的最佳澄清劑為ZTC1+1天然澄清劑。

本研究中采用HPLC 法、UV-Vis 法結合熵權法篩選ZTC1 + 1 天然澄清劑為調臟舒秘合劑的最佳澄清劑，不影響藥液有效成分含量，且操作簡單可重復，可作為解決醫療機構中藥制劑合劑澄清度的方法。采用單因素法對比了不同澄清劑對調臟舒秘合劑澄清度的影響，參考文獻確定澄清度的用量，后續試驗將考察ZTC1 + 1 天然澄清劑最佳加入濃度，或采用正交試驗法、響應面法對比多種澄清劑或每種澄清劑的使用濃度對澄清度的影響。