高效液相色譜法測定鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液中枸櫞酸鈉含量

彭 力，肖中元，程永剛，唐佳麗，郭 偉，王永紅

（西南藥業股份有限公司，重慶 400038）

鹽酸莫西沙星為廣譜、高效、低毒性的第4 代氟喹諾酮類抗菌藥物，通過抑制細菌的DNA 螺旋酶A 亞單位和拓撲異構酶Ⅳ的活性，阻斷DNA 的復制，發揮殺菌作用，對社區獲得性肺炎、慢性支氣管炎的急性發作、急性鼻竇炎、泌尿系統感染、皮膚及軟組織感染均有較好療效［1-4］。其上市產品有片劑、滴眼液、氯化鈉注射液等，在研劑型有泡騰片、栓劑、微囊等［5-8］。目前，其大容量注射液僅有鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液上市銷售，該產品在低溫條件下易結晶析出。為解決低溫析出問題，前期試驗中進行了鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液的研究。通過處方優化在樣品中加入一定比例的枸櫞酸鈉作為穩定劑，有效解決了主藥低溫結晶析出問題。穩定劑枸櫞酸鈉的含量超標會影響產品質量，其含量測定方法包括滴定法、離子交換色譜法、高效液相色譜（HPLC）法、液相色譜質譜聯用法、紫外-可見分光光度法等［9-15］，但尚未查詢到鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液中枸櫞酸鈉的含量測定方法。為此，本研究中建立了測定其中枸櫞酸鈉含量的HPLC 法。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Arium 611UF型超純水制備儀（德國Sartorius公司）；WATERS2695-2996型高效液相色譜儀（配有Millenium32液相色譜數據工作站）。PL203型電子天平（精度為千分之一），XS205 型電子分析天平（精度為十萬分之一），S210型pH計，均購自瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 試藥

枸櫞酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100396-200301，含量為100%）；鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液（西南藥業股份有限公司，批號分別為20110901，20110902，20110903）；磷酸二氫鉀、磷酸（重慶川東化工<集團>有限公司）；甲醇（色譜純，賽默飛世爾科技公司）；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：安捷倫Zorbax-SB C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：A 為甲醇，B 為 50 mmol/L 磷酸二氫鉀水溶液（用磷酸調pH至2.2），梯度洗脫［12］（洗脫程序見表1）；流速：0.9 mL/ min；檢測波長：210 nm；進樣量：20μL。

表1 流動相梯度洗脫程序（%）Tab.1 Procedure of gradient elution of mobile phase（%）

2.2 溶液制備

直接取鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液樣品作為供試品溶液。取枸櫞酸對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋成每1 mL 含0.64 mg 的對照品貯備液。精密量取對照品貯備液適量，加水定量稀釋成每1 mL 含枸櫞酸0.07 mg 的對照品溶液。按處方工藝配制不含枸櫞酸鈉的溶液，作為空白溶液。

2.3 方法學考察

破壞性試驗：取2.2 項下供試品溶液適量，分別用強酸、強堿、高溫、強光、強氧極端條件破壞。取破壞后的和未破壞的供試品溶液及空白溶液各適量，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果供試品溶液在高溫和強堿條件下會被破壞而產生雜質，枸櫞酸鈉含量波動在2%～3%范圍內，其他條件下較穩定。各破壞條件下枸櫞酸主峰與其他物質峰的基線分離較好，空白溶液無干擾，表明方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

線性關系考察：分別精密量取2.2項下對照品貯備液適量，加水稀釋成6 個濃度梯度，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以進樣質量濃度為橫坐標（X，mg/mL）、峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，得回歸方程Y=8.47 × 105X+379.91（r=0.998，n=6）。結果表明，枸櫞酸鈉質量濃度在0.078 34～0.141 98 mg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

中間精密度試驗：由2個操作員在不同時間各取供試品溶液6 份，分別按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果12 份供試品溶液的平均質量濃度為0.102 mg/mL，RSD為1.59%（n=12），表明儀器中間精密度良好。

重復性試驗：取2.2 項下供試品溶液6 份，分別按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果6份供試品溶液的平均質量濃度為0.103 mg/ mL，RSD為1.71%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取2.2 項下供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，6，8，12，24 h時按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果的RSD為1.18%（n= 7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：取2.2項下對照品貯備液和空白溶液各適量，混勻，配制成高、中、低濃度的溶液，平行3份，按2.1項下色譜條件進樣測定，按外標法以峰面積計算回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n=9）Tab.2 Results of the recovery test（n=9）

2.3.4 樣品含量測定

取3批（批號分別為20110901，20110902，20110903）樣品，依法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定3次，以峰面積按外標法計算得枸櫞酸鈉的含量分別為0.103，0.102，0.104 mg/mL（n=3）。

3 討論

3.1 檢測波長選擇

配制質量濃度為0.2 mg/ mL 的枸櫞酸對照品溶液，于190～400 nm 波長范圍內掃描，結果在210 nm 波長處有較大吸收，故選擇210 nm作為檢測波長。

3.2 洗脫程序選擇

參考文獻［12］，枸櫞酸峰與相鄰峰分離度小于1.5，且樣品中其他成分在低比例甲醇中不能完全洗脫，故對流動相比例、流速、pH等進行優化。在枸櫞酸測定完成后提高甲醇比例，采用梯度洗脫方法洗出其他成分，防止因長時間滯留色譜柱中與填料發生不可逆結合，保護色譜柱，提高其使用壽命。

3.3 含量計算

處方中以枸櫞酸鈉作為穩定劑。枸櫞酸鈉溶液解離的枸櫞酸根產生紫外吸收，鈉離子無紫外吸收，且枸櫞酸根在低pH 條件下會形成枸櫞酸。因此，通過測定溶液中枸櫞酸的含量，再通過枸櫞酸鈉與枸櫞酸分子量之比（1.53∶1）計算枸櫞酸鈉的含量。

3.4 方法評價

本研究中建立的方法操作簡便、結果準確、靈敏度高，可用于鹽酸莫西沙星葡萄糖注射液中枸櫞酸鈉的含量測定。