電針足三里對失血性休克海水浸泡損傷延遲靜脈復蘇大鼠生存率及臟器功能的影響

王莉莉，胡 森，張海湃，田雨沫，張慧蘋，關 玲

失血性休克(hemorrhagic shock,HS)合并海水浸泡是一種較為常見的海戰傷。由于海上及艦船空間狹窄、醫療資源有限、傷員后送相對困難，無法及時開展輸血輸液等常規抗休克治療。另外，海水浸泡后，機體合并存在低體溫，高滲等損傷，導致海戰傷休克較陸地休克具有更高的發病率及死亡率[1,2]。因此，研究簡便有效，易于操作的現場救治措施，為傷員后送轉移及后續治療爭取時間，具有重要意義。針刺是一種常用的傳統醫學急救治療手段。在中國醫學中，HS屬于“厥”“脫”證范疇，古代中醫很早就有針刺治療“厥”“脫”證的文獻記載[3]。現代多項研究證明，針刺“足三里”可以提高休克動物的平均動脈壓、保護臟器功能，具有抗休克作用[4-8]。本研究通過制作45%HS海水浸泡延遲靜脈復蘇大鼠模型，觀察電針足三里對HS海水浸泡損傷大鼠24 h生存率及臟器功能的影響，對海戰傷休克的救治提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與試劑 選取SPF級雄性SD大鼠100只，10周齡，體質量250～300 g，由斯貝福(北京)生物技術有限公司提供，合格證書號：SCXK(京2019-0010)。恒溫(24±2)℃，恒濕(50±5)%條件下適應性飼養7 d。術前12 h禁食，4 h禁飲。采用AU5800全自動生化分析儀(貝克曼庫爾特商貿中國有限公司)；長城KWD-808I脈沖電療儀(江蘇常州市武進長城醫療器械有限公司)。人工海水配方：采用國家海洋局第三研究所配方，pH 8.2，滲透壓(1250.00±11.52)mmol/L, Na+(630.00±5.33)mmol/L，K+(10.88±0.68)mmol/L，Cl-(658.80±5.25)mmol/L。本研究經解放軍總醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 動物分組與模型制作 按隨機數字表法將大鼠分為HS+海水浸泡組(對照組)和HS+海水浸泡+電針組(電針組)，每組50只。(1)手術置管：均經3%戊巴比妥鈉(30 mg/kg，0.1 ml/100 g)腹腔注射麻醉后，仰臥固定于手術臺上，依次切開右頸動脈置管用于抽血，頸外靜脈置管用于輸血和輸液，兩導管的血管外段由皮下穿出固定于體表。(2)HS：抽血時用注射器經頸動脈抽取45%全身血容量(TBV=體重×0.06+0.77)[9]造成HS，抽血經兩階段完成，首先在5 min內快速抽取35%TBV，間隔5 min后，在10 min內緩慢抽取10%TBV。0.1%肝素0.2 ml保持管道通暢，采用檸檬酸鈉抗凝無菌保存并標記抽取血液以備回輸。(3)海水浸泡：動物失血后立即將劍突下0.5 cm以下身體部位進行海水浸泡(23±1)℃，30 min。(4)延遲液體復蘇：失血和海水浸泡完成后2 h，經頸靜脈導管回輸抽取的全部失血(5 min完成)+2倍失血量的乳酸林格液(30 min完成)[10]。

1.3 干預處理 (1)電針組：將大鼠固定在手術臺上，電針雙側足三里穴，足三里穴位于膝關節后外下方，腓骨小頭下5 mm處[11]。在穴位中插入25 mm單極不銹鋼針電極，刺入深度7 mm，連接電針儀，以連續模式持續刺激25 min，電位差4 V，電流0.5 mA，脈沖寬度50 μs，頻率10 Hz。(2)對照組：浸泡后0.5 h，將大鼠固定在手術臺上，不進行針刺治療，時間25 min。

1.4 觀察指標 實驗分兩次完成，第一次兩組各取10只大鼠監測生存率，觀察至休克后24 h。第二次兩組每個時間點取8只大鼠，分別于失血前，浸泡后即刻，浸泡后2、5、24 h從頸動脈導管抽取血液5 ml，離心機離心并分離上層血漿，使用AU8500生化分析儀(美國Beckman公司)檢測肌酐(Cr)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)及二胺氧化酶(DAO)的水平。

2 結 果

2.1 生存率的變化 海水浸泡后24 h，電針組的生存率(9/10，90%)明顯高于對照組(5/10，50%)，差異有統計學意義(χ2=4.494,P=0.034)。

2.2 臟器功能的變化 浸泡后即刻，對照組和電針組動物的Cr，CK-MB及DAO均顯著高于失血前(P<0.05)。浸泡后2 h，電針組ALT較傷前無明顯變化，而對照組則顯著高于傷前。電針組浸泡后2 h的DAO水平較對照組明顯降低(P<0.01)。兩組的Cr和CK-MB均未見明顯差異。浸泡后5 h，電針組的Cr恢復至傷前水平，ALT較對照組明顯改善(P<0.01)，DAO較對照組明顯降低(P<0.05)，CK-MB顯著低于對照組(P<0.01)，恢復至傷前水平。

浸泡后24 h，電針組Cr顯著低于對照組(P<0.01)；電針組的ALT較對照組明顯改善(P<0.05)。浸泡后24 h，兩組大鼠的CK-MB均恢復至傷前水平，且電針組明顯低于對照組(P<0.05，表1)。

表2 電針足三里對45%失血性休克合并海水浸泡延遲靜脈復蘇大鼠臟器功能的影響

3 討 論

海戰傷休克是指大量失血合并海水浸泡所導致的休克，常伴隨低體溫及高滲脫水等癥狀，引發機體的微循環障礙和臟器功能損傷[12]，具有較高的致死率。此外，由于海上救治條件有限及后送困難，輸血輸液等治療無法及時開展，因此研究現場簡易有效的自救互救技術，延緩休克進展或加重，為后續靜脈抗休克治療爭取寶貴時間，具有重要意義。

多項研究證明，針刺具有確切的抗休克作用[13，14]。鐘毓賢等[6]發現，電針足三里可以提高60%HS延遲靜脈復蘇大鼠的平均動脈壓，改善腹腔臟器腎、肝及小腸黏膜血液灌流，增加組織供氧，保護臟器功能，提高休克大鼠生存率，提示電針足三里可以部分替代靜脈液體復蘇的治療而發揮抗休克作用。有學者研究發現，電針足三里可增強延遲補液對HS大鼠心肌組織的保護作用[4]。陸化梅等[14]應用電針足三里治療重度HS大鼠，發現電針可以抑制液體復蘇后肝臟ET-1及iNOS的合成，減少肝臟NF-κB活化、炎癥因子及氧自由基的產生,減輕肝臟再灌注損傷。本課題組前期未觀察電針足三里對HS合并海水浸泡動物模型的抗休克作用，本研究采用45%HS合并海水浸泡損傷大鼠動物模型，觀察電針足三里對HS合并海水浸泡大鼠的生存率及臟器功能的影響，旨在為臨床救治提供依據。

本研究結果表明，電針組在海水浸泡后24 h的生存率為90.0%，顯著高于對照組的50.0%，提示電針足三里能夠提高延遲靜脈補液的療效，延緩休克的進展，提高海戰傷休克大鼠的生存率。在臟器功能方面，海水浸泡后2 h和5 h，電針組DAO水平顯著低于對照組，表明電針足三里具有保護小腸黏膜的功能；海水浸泡后5 h，電針組大鼠的ALT及CK-MB顯著低于對照組，提示電針足三里可以減輕休克大鼠的肝臟、心臟的損傷。浸泡后24 h，兩組的Cr及CK-MB的水平仍有較大差異，且電針組較對照組明顯改善。以上結果提示，電針足三里可減輕海戰傷休克大鼠心、腎、肝及腸道黏膜的損傷，保護心臟及腹腔臟器功能，提高24 h的生存率，發揮抗休克作用。

當機體發生大量失血時，激活交感-腎上腺髓質系統，釋放大量兒茶酚胺類物質(尤其是去甲腎上腺素)，選擇性地作用于外周及內臟血管，重新分布血流，以保證心、腦等重要臟器的血液供應[15]。但持續性的收縮外周血管，會加重腹腔內臟組織的微循環障礙和細胞的缺血缺氧，導致急性肝、腎損害及腸道黏膜屏障的破壞，引發多臟器衰竭及凝血功能紊亂，促進休克的發展和惡化。此時，如果激活副交感神經，調整交感神經興奮性，減少縮血管物質的持續釋放，改善外周及腹腔內臟血液的灌流，保護內臟功能，可阻止休克進展。

國內外多項研究表明，電針足三里的抗休克作用與迷走神經有關[7.16]。Torres等[17]證實,電針足三里激活迷走神經，作用于腎上腺髓質，上調多巴脫羧酶的活性，而不影響多巴胺β-羥化酶的活性，導致腎上腺髓質多巴胺釋放增加，作用于DA1受體發揮抗炎作用。有學者進一步證實，電針足三里是通過刺激足三里穴區深層的PROKR2Cre神經元，激活迷走神經-腎上腺髓質，發揮抗炎作用，這也為電針足三里興奮迷走神經提供了解剖學基礎[18]。本課題組前期研究證實，電針足三里通過興奮迷走神經，引起多巴胺釋放增加，作用于DA1受體，增加小腸黏膜的血流量，保護腸黏膜屏障。因為小劑量多巴胺的釋放，可以作用于腦、腎、胃腸道血管和冠狀動脈的多巴胺DA1受體，擴張上述臟器的血管，增加血流量和尿量，保護臟器功能[19]。本研究發現，深部弱刺激減輕HS，與柳申濱等[18]采用膿毒癥模型研究電針抗炎作用的結果相似，推測深部弱刺激興奮迷走-腎上腺髓質通路，改善交感與副交感失衡，增強了多巴脫羧酶的活性，促進多巴胺生成，加強舒血管效應，增加內臟血流和尿量發揮抗休克作用。

綜上所述，本研究證明電針足三里能提高海戰傷HS合并海水浸泡大鼠的24 h生存率，降低DAO、ALT、CK-MB及Cr臟器功能指標，保護臟器功能，發揮抗休克作用。但本研究僅對電針足三里對海戰傷休克大鼠臟器功能的保護作用進行了觀察，后續將繼續觀察電針足三里對海戰傷休克交感與副交感神經的影響，闡明其作用機制。