HBV相關(guān)肝衰竭患者Th1/Th2型細(xì)胞因子變化及與預(yù)后的關(guān)系

劉艷麗，李 靜，于 彬，李 瑾，柴 梅，李滄友

(滄州市第三醫(yī)院 1.供應(yīng)室;2.肝病科,河北 滄州061000)

乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性流行，是目前世界范圍內(nèi)的主要公共衛(wèi)生問題之一[1]。全球約有3.5億慢性乙型肝炎病毒感染者，每年有100多萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝癌，嚴(yán)重危害大眾身心健康，對(duì)患者造成痛苦，也對(duì)醫(yī)療資源造成極大消耗[2-3]。慢性乙型肝炎(CHB)的發(fā)病與細(xì)胞因子關(guān)系密切，而輔助性T細(xì)胞(Th)是分泌產(chǎn)生細(xì)胞因子的主要細(xì)胞之一，分為Th1和Th2兩個(gè)亞群[4]。近年研究發(fā)現(xiàn)，Th1/Th2平衡是維持正常免疫功能所必需的，機(jī)體對(duì)HBV的免疫應(yīng)答失衡是CHB及其重癥化的重要發(fā)生機(jī)制之一，因而研究HBV感染時(shí)Th1/Th2狀態(tài)對(duì)認(rèn)識(shí)乙型肝炎重癥化發(fā)病、發(fā)展、預(yù)后評(píng)估中的作用逐漸引起重視[5-6]。本研究探討Th1/Th2細(xì)胞因子在預(yù)測(cè)HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者短期預(yù)后的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

采用回顧性分析法，病例納入時(shí)間為2021年1月至2021年12月，共有69例HBV-ACLF患者入組本研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：①診斷符合2018年《肝衰竭診治指南》[7]中ACLF診斷標(biāo)準(zhǔn)；CHB診斷參照2019年《慢性乙型肝炎防治指南》[8]，并通過 HBV 血清學(xué)檢查、HBV DNA 定量、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)等檢查確診；②年齡>18歲，有HBV感染史，首次發(fā)病；③意識(shí)、認(rèn)識(shí)及精神正常；④自愿配合并簽定知情同意書；⑤研究方案經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①依從性差，不能配合研究者；②惡性腫瘤、合并免疫系統(tǒng)疾病或其他嗜肝病毒感染者；③脂肪肝或藥物性肝炎；④嚴(yán)重肝、腎、心功能衰竭或其他嚴(yán)重原發(fā)性疾病者。HBV-ACLF組男41例，女28例，年齡26-65歲，平均年齡(48.14±6.35)歲；肝衰竭分型：早期36例，中期21例，晚期12例；既往病史：高血壓53例，2型糖尿病45例，冠心病29例。CHB組70例，男43例，女27例，年齡24-66歲，平均年齡(49.03±6.18)歲；既往病史：高血壓49例，2型糖尿病40例，冠心病24例。同期健康者70例，其中男40例，女30例，年齡24-65歲，平均年齡(49.11±6.22)歲。

1.2 HBV-ACLF組分期標(biāo)準(zhǔn)

早期：無頑固性的腹水，血肌酐水平正常，凝血酶原活動(dòng)度(PTA)31%-40%；中期：PTA 21%-30%，無頑固性的腹水，血肌酐上升<正常范圍的10%；晚期：PTA≤20%，有頑固性腹水、消化道出血，血肌酐>1.5 mg/dL。

1.3 HBV-ACLF組不同預(yù)后

根據(jù)患者 3 個(gè)月后的病情轉(zhuǎn)歸情況分組，其中病情好轉(zhuǎn)出院或者病情得到穩(wěn)定控制的患者分為生存組，病情惡化死亡的患者為死亡組。

1.4 方法

采集各組對(duì)象第2 d晨起空腹血樣本5 ml，凝聚2 h后，將血液樣本上離心機(jī)進(jìn)行離心處理，轉(zhuǎn)速為 3 500 r/min，時(shí)間15 min，完成后收集上層血清儲(chǔ)存于-80℃ 的冷凍箱中準(zhǔn)備檢測(cè)。應(yīng)用Roche cobas8000 原裝配套試劑檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(ALB)及總膽紅素(TBiL)水平。采用電化學(xué)發(fā)光法記錄乙肝表面抗原(HBeAg)陽(yáng)性情況，定量 PCR 法檢測(cè)血清 HBV DNA 定量水平；應(yīng)用ELISA法檢測(cè)Th1細(xì)胞因子[血清白細(xì)胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素-γ(IFN-γ)]、Th2細(xì)胞因子[IL-4、IL-6、IL-10]水平進(jìn)行比較，整個(gè)操作過程應(yīng)實(shí)施無菌操作，嚴(yán)重按照試劑盒(雅酶生物技術(shù)有限公司)說明書中方法操作，確保檢測(cè)質(zhì)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 三組對(duì)象血清Th1/Th2型細(xì)胞因子水平比較

HBV-ACLF組患者血清IL-2、INF-γ、TNF-α、IL-6高于對(duì)照組及CHB組，IL-4、IL-10低于對(duì)照組及CHB組(P<0.05)，見表1、表2。

表1 三組對(duì)象血清Th1細(xì)胞因子水平比較

表2 三組對(duì)象血清Th2細(xì)胞因子水平比較

2.2 不同病情程度HBV-ACLF患者血清Th1/Th2型細(xì)胞因子水平比較

隨著病情的加重，INF-γ、TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05)，IL-4、IL-10水平下降(P<0.05)，IL-2水平無顯著變化，見表3、表4。

表3 不同病情程度HBV-ACLF患者血清Th1型細(xì)胞因子水平比較

表4 不同病情程度HBV-ACLF患者血清Th2型細(xì)胞因子水平比較

2.3 不同預(yù)后HBV-ACLF患者血清Th1/Th2型細(xì)胞因子水平比較

生存組INF-γ、IL-6、TNF-α水平低于死亡組(P<0.05)，IL-4、IL-10水平高于死亡組(P<0.05)，IL-2水平無顯著變化，見表5、表6。

表5 不同預(yù)后HBV-ACLF患者血清Th1型細(xì)胞因子水平比較

表6 不同預(yù)后HBV-ACLF患者血清Th2型細(xì)胞因子水平比較

2.4 血清Th1/Th2型細(xì)胞因子和HBV-ACLF患者預(yù)后的Logistic回歸分析

將血清 INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10作為自變量，將是否死亡作為因變量，經(jīng)過 Logistic 回歸分析顯示，血清INF-、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平是影響HBV-ACLF患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表7。

表7 血清Th1/Th2型細(xì)胞因子和HBV-ACLF患者預(yù)后的Logistic回歸分析

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，亞洲國(guó)家中約 70%以的ACLF病人是由HBV感染所誘發(fā)，尋找一種有效評(píng)估ACLF病人病情與預(yù)后的可靠指標(biāo)在挽救患者生命，改善預(yù)后方面發(fā)揮極重要作用[9-10]。HBV-ACLF的誘發(fā)因素較多，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其中細(xì)胞因子參與ACLF的發(fā)生與發(fā)展。

近年來，Th1/Th2細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化在乙肝肝衰竭病情發(fā)展中的作用逐漸引起重視[11,12]。Th1細(xì)胞主要包括IFN-γ、TNF-α和IL-2等因子，主要參與機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)與遲發(fā)性超敏反應(yīng)。IFN-γ是可以有效反映Th1細(xì)胞功能的因子，其不僅參與病原體的清除，還可以募集下游的免疫活性細(xì)胞參與機(jī)體的免疫反應(yīng)。IFN-γ除了在CHB中可以促進(jìn)下游免疫效應(yīng)細(xì)胞的增殖，刺激細(xì)胞活化外，還在ACLF發(fā)病中發(fā)揮免疫擴(kuò)大效應(yīng)[13]。IL-2是重要的免疫增強(qiáng)因子，能夠激活T細(xì)胞，刺激 T細(xì)胞增殖，IL-2水平在一定程度上反映了細(xì)胞的免疫功能狀態(tài)[14]。TNF-α是典型的炎癥反應(yīng)因子，是誘導(dǎo)肝細(xì)胞壞死的最直接因子[15]。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-6、IL-10，能夠輔助B細(xì)胞分化為抗體分泌細(xì)胞，抑制Th1 型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，并介導(dǎo)體液免疫。Th2免疫占優(yōu)勢(shì)時(shí)，可以導(dǎo)致病毒感染的慢性化。

本研究顯示，HBV-ACLF組患者血清IL-2、INF-γ、TNF-α高于對(duì)照組及CHB組(P<0.05)，且隨著病情的加重，INF-γ、IL-6水平升高，IL-4、IL-10水平下降。同時(shí)生存組INF-γ、IL-6、TNF-α水平低于死亡組，IL-4、IL-10水平高于死亡組。且血清INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平是影響HBV-ACLF患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，顯示出Th1/Th2細(xì)胞因子動(dòng)態(tài)變化在HBV-ACLF患者的發(fā)生和發(fā)展過程中均具有重要作用，通過分析是由于有以下原因：和CHB與健康對(duì)照組對(duì)比，HBV-ACLF存在著肝臟損傷現(xiàn)象，肝細(xì)胞處在嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)與應(yīng)激反應(yīng)的狀態(tài)下，進(jìn)而細(xì)胞因子被大量釋放，肝細(xì)胞受損程度加重，阻斷肝細(xì)胞再生，形成惡性循環(huán)，且在病情較重及死亡的患者中，肝細(xì)胞損害程度和肝臟組織會(huì)發(fā)生重構(gòu)及纖維化，細(xì)胞核與線粒體的正常生理功能受到嚴(yán)重傷害，這一過程也進(jìn)一步刺激了細(xì)胞因子的表達(dá)[17-18]。這此本研究認(rèn)為，通過了解HBV-ACLF患者基線Th1/Th2細(xì)胞因子的水平有助于判斷ACLF病人的短期預(yù)后，在今后的臨床中，也可考慮動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)Th1/Th2細(xì)胞因子的表達(dá)來判斷預(yù)后，尤其是監(jiān)測(cè)血清INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平變化在指導(dǎo)臨床用藥上也具有積極意義。但本研究尚存在一定的不足，僅觀察了基線血清INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平的表達(dá)，未詳細(xì)探討其在對(duì) HBV-ACLF診斷中的應(yīng)用價(jià)值，且樣本量偏少，未來也需進(jìn)一步深入研究。