血清miR-214、miR-143在急性髓性白血病中的表達水平及與疾病復發的關系

羅婷，劉麗，饒琦，巫涵，沈愷

急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)是指髓系造血干細胞、祖細胞發生分化障礙，惡性克隆性增生導致的惡性腫瘤，具有高度異質性[1-2]。AML一旦發生，病情惡化可能引發患者出現嚴重感染、出血和器官浸潤等一系列癥狀，導致患者預后效果差，易出現復發等現象[3]。因此，探究AML復發的影響因素對提高患者預后生活質量具有重要的意義。研究發現，微小RNA(miRNA)調控機體約30%的基因表達，作為促癌基因或抑癌基因參與多種疾病的發生與發展過程[4]。大量研究表明，miR-214在多種惡性腫瘤中異常表達，如在乳腺癌、胃癌和胰腺癌等腫瘤中呈高表達，在宮頸癌和食管鱗癌等腫瘤中呈低表達[5-6]。miR-143在胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤中亦有異常表達，參與并調控細胞因子及相關通路表達[7]。目前，miR-214和miR-143在AML中的作用研究較少，因此，本研究檢測AML患者血清miR-214、miR-143的表達水平，并分析二者與AML治療后復發的關系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年1月—2021年4月四川大學華西醫院血液內科治療的AML患者94例作為研究對象(AML組)，男48例，女46例，年齡44～73(58.37±12.41)歲。按照AML患者治療后1年內是否復發分為AML緩解亞組60例和AML復發亞組34例，另選擇同期醫院體檢的健康者50例作為健康對照組，男28例，女22例，年齡45～78(59.18±12.59)歲。2組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經醫院倫理委員會批準(201811-21)，受試者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)診斷標準：復發診斷標準依據“復發難治性急性髓系白血病中國診療指南(2017年版)”中的相關標準[8]。(2)納入標準：①符合世界衛生組織關于AML的診斷標準[9]；②AML患者之前未接受過放療、化療和分子靶向治療；③患者均首次診斷為AML，且臨床資料和隨訪資料完整。(3)排除標準：①伴有嚴重感染者；②伴有嚴重肝腎功能不全等患者；③伴有嚴重心力衰竭或免疫缺陷患者；④伴有惡性腫瘤等相關疾病的患者。

1.3 觀測指標與方法

1.3.1 血清miR-214、miR-143表達水平檢測：健康對照組體檢時、AML患者入院時采集空腹肘靜脈血4～6 ml，離心留取血清置于-80℃保存備用。采用實時熒光定量PCR方法檢測血清中miR-214、miR-143相對表達量。使用RNA提取試劑盒(北京百泰克生物技術有限公司)提取各組血清中總RNA，然后將RNA反轉錄為cDNA，根據實時熒光定量PCR試劑盒(武漢默沙克生物科技有限公司)操作說明進行操作。引物序列見表1，以U6作為內參基因，采用2-△△Ct值表示相對表達水平。

表1 miR-214、miR-143 PCR反應引物序列

1.3.2 實驗室相關指標檢測：采用BC-5000全自動血液細胞分析儀(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司)，檢測AML患者入院時白細胞計數(WBC)、血紅蛋白(Hb)和血小板計數(PLT)。采用BS-830型全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司)，檢測AML患者入院時總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)表達水平，檢測試劑盒均購自美康生物科技股份有限公司。

2 結 果

2.1 2組血清miR-214、miR-143表達水平比較 AML組患者血清miR-214表達水平高于健康對照組，miR-143表達水平低于健康對照組，差異均有統計學意義(P<0.01)，見表2。

表2 健康對照組與AML組血清miR-214、miR-143表達水平比較

2.2 2亞組血清miR-214、miR-143表達水平比較 復發亞組AML患者血清miR-214表達水平高于緩解亞組，miR-143表達水平低于緩解亞組，差異均有統計學意義(P<0.01)，見表3。

表3 AML緩解亞組和復發亞組血清miR-214、miR-143表達水平比較

2.3 緩解亞組和復發亞組AML患者臨床資料比較 復發亞組AML患者WBC高于緩解亞組，Hb、PLT水平低于緩解亞組，差異均有統計學意義(P<0.05)，2亞組患者性別、年齡、體質量、病程、吸煙史、飲酒史、家族遺傳史、基礎病、疾病分型、脾腫大、TC、TG、HDL-C和LDL-C等指標比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表4。

2.4 血清miR-214、miR-143水平與AML患者復發的關系分析 Spearman等級相關分析顯示，AML患者復發與血清miR-214表達呈正相關，與血清miR-143表達呈負相關(r/P=0.584/<0.001,-0.428/<0.001)。

2.5 多因素Logistic回歸分析AML患者治療復發的影響因素 以AML患者復發為因變量(復發=1，緩解=0)，以上述單因素分析中具有顯著性差異的指標為自變量，WBC、Hb、PLT、miR-214和miR-143水平均為連續變量。多因素Logistic回歸分析顯示，WBC高、miR-214高為AML患者復發的危險因素(P<0.05)，而Hb高、PLT高、miR-143高為其保護因素(P<0.05)，見表5。

表5 多因素Logistic回歸分析AML患者復發的影響因素

2.6 血清miR-214、miR-143水平預測AML復發的價值 ROC曲線分析結果顯示，血清miR-214、miR-143及二者聯合預測AML復發的曲線下面積為0.765、0.886、0.938，二者聯合預測AML復發的效能優于血清miR-214、miR-143單獨預測(Z/P=3.318/0.002, 2.342/0.019)，見表6、圖1。

表6 血清miR-214、miR-143水平預測AML復發的價值比較

圖1 血清miR-214和miR-143水平對AML患者復發的預測效能

3 討 論

AML是最為常見的急性白血病之一，據統計，成年人患急性白血病類型中80%～90%為AML[10]。AML發病機制復雜、發病急、病情進展快且易復發，嚴重影響患者預后生活質量[11]。AML主要發病特點是患者造血干細胞功能出現障礙，臨床癥狀主要表現為乏力、貧血、細菌感染和發熱等，嚴重者還會出現肝、脾和淋巴結腫大[12]。目前，AML患者主要采用化療和干細胞移植的手段進行治療，但大約有70%的患者在治療后會出現復發現象，隨著病情惡化發展為難治性白血病，威脅患者生命健康[13]。因此，尋找AML復發的影響因素進行及時干預治療對改善患者預后生活質量具有重要的意義。沈宏宇等[14]研究顯示，AML復發患者血清WBC水平顯著高于緩解患者，Hb、PLT水平顯著低于緩解患者。本研究顯示，與緩解亞組比較，AML復發亞組患者WBC水平更高，Hb、PLT水平更低，與上述研究結果一致。

miRNA是一類內源性非編碼的小分子單鏈RNA，在機體內廣泛且穩定存在，具有高度保守性、表達階段特異性和組織特異性等特點[15-17]。miRNA在體內的主要作用方式是其與靶基因mRNA的3'-UTR互補配對，降解mRNA或抑制翻譯過程，另一方面，miRNA可以與5'-UTR、編碼序列及基因啟動子的mRNA序列相互作用[18-20]。正常情況下，miRNA穩定存在于機體各個組織部位，調節蛋白質編碼基因的表達，當機體出現炎性反應、腫瘤、心腦血管疾病等各類疾病時，相應的miRNA就會出現異常表達，可作為相關疾病診斷治療的臨床生物性指標[21]。近年來研究發現，miRNA的異常表達參與并影響AML的發生與發展，AML屬于遺傳學高度異質性疾病，體內約有200種染色體異常，miRNA的異常表達與染色體異常密切相關[22]。miR-214在多種腫瘤組織中異常表達，可能參與腫瘤疾病的發展，miR-214在不同類型疾病中存在異質性，既可作為致癌基因發揮作用，也可作為抑癌基因緩解疾病的發展[23]。miR-214在機體內可調控細胞的凋亡過程，影響細胞增殖并對細胞的耐藥性產生影響[24]。王中平等[25]研究發現，食管鱗癌(ESCC)患者血漿miR-214水平較健康者明顯上調，其水平變化與ESCC分期密切相關，ROC曲線分析顯示其可作為ESCC診斷的分子標志物。本研究顯示，與健康人群比較，AML患者血清miR-214表達明顯上調，其變化趨勢與ESCC疾病中miR-214表達變化一致，此外研究還發現，miR-214表達與AML患者復發呈正相關，與緩解亞組比較，復發亞組miR-214表達明顯上升，提示miR-214水平變化與AML患者治療后復發情況密切相關。

miR-143位于5q33染色體上，具有莖環結構的前體，在多種腫瘤組織中呈低表達狀態，如直腸癌、乳腺癌和卵巢癌等[26]。miR-143通過參與細胞增殖、分化和凋亡等過程發揮作用，影響多種疾病的發生發展[27]。姚金曉等[28]研究顯示，AML患者血漿和細胞系中miR-143表達水平顯著降低(P<0.05)，miR-143過表達可顯著抑制人髓性白血病細胞HL60細胞的遷移和侵襲能力。本研究顯示，與健康人群比較，AML患者血清miR-143表達水平明顯下調，與既往研究結果一致。此外研究還發現，miR-143表達與AML患者復發呈負相關，與緩解亞組比較，復發亞組miR-143表達明顯下調，提示miR-143可能作為抑癌因子參與AML的發生與發展，其水平變化與AML患者復發情況密切相關。

綜上所述，AML患者血清miR-214水平上調，miR-143水平下調，兩者均與AML患者復發有關，二者聯合檢測可提高對AML患者復發的預測價值，有利于臨床判斷AML患者預后情況。但本研究未深入探討兩者影響AML復發的作用機制，后續需進一步設計試驗進行研究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

羅婷：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；劉麗、沈愷：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改;饒琦：提出研究思路，論文審核;巫涵：分析試驗數據，進行統計學處理