胃癌組織TIP30、KAI-1蛋白表達與胃癌根治術后復發的關系分析

高 振,林劍鵬,王永鋒,陸歡華

復旦大學附屬中山醫院青浦分院普外科，上海 201700

胃癌是常見的惡性腫瘤，已成為世界范圍內癌癥防治的重點。我國胃癌發病人數和病死人數分別約占全球胃癌發病人數和病死人數的40%、50%，在我國該病的病死率僅次于肺癌和肝癌[1]。根治術是胃癌患者常用的治療方法，然而根治術后復發是其病死的重要因素[2]，因此了解胃癌根治術后復發的分子機制及影響因素十分必要。Tat作用蛋白30(TIP30)基因是新近發現的一種腫瘤抑制基因，在胃癌、肺癌、膀胱尿路上皮癌等惡性腫瘤組織中均呈低表達[3-5]，與多種惡性腫瘤的發生均有密切關系，且有研究顯示TIP30高表達可削弱胃癌細胞株SGC7901的侵襲、遷移活性[6]，推測與胃癌復發和轉移均有關。轉移抑制基因1(KAI-1)也是一種抑癌基因，主要通過影響惡性腫瘤細胞的黏附來抑制腫瘤轉移，在胃癌、乳腺癌組織中均呈低表達[7-8]。有研究證實KAI-1蛋白表達與胃癌體外生長、侵襲、遷移等均呈顯著相關(P<0.05)[9]，推測該蛋白低表達也可參與胃癌的發展。本研究選取119例接受胃癌根治術的患者為研究對象，分析胃癌組織中的TIP30、KAI-1蛋白表達與根治術后復發的關系，以期為胃癌根治術后復發的防治提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2019年1月至2020年7月收治的119例接受胃癌根治術的患者為研究對象。(1)納入標準：①經病理檢查證實為胃癌患者；②均為接受胃癌根治術或擴大根治術患者。(2)排除標準：①根治術前實施了抗腫瘤治療，可能會影響胃癌組織TIP30、KAI-1蛋白表達的患者，如新輔助放化療等；②復發性或轉移性胃癌患者；③合并其他類型重癥疾病患者，如急性心腦血管病、膿毒血癥等；④合并免疫缺陷疾病患者；⑤合并其他器官器質性疾病患者，如腎衰竭、肝硬化等；⑥有精神障礙患者；⑦依從性差或不方便跟蹤隨訪患者；⑧失訪患者；⑨隨訪期間非胃癌病因死亡患者。119例患者中男71例，女48例；年齡28～77歲，平均(59.75±7.14)歲；其中年齡≥65歲患者(老年患者)49例；臨床分期：Ⅰb期2例，Ⅱa期21例，Ⅱb期36例，Ⅲa期43例，Ⅲb期12例，Ⅳ期5例；102例Ⅰ～Ⅲa期、3例Ⅲb期患者均實施胃癌根治術，9例Ⅲb期和5例Ⅳ期患者均實施擴大根治術；有淋巴結轉移患者59例，術中均配合實施淋巴結清掃，無淋巴結轉移患者60例；腫瘤浸潤程度：漿膜層浸潤41例，未浸潤膜層78例；腫瘤分化程度：未分化2例，低分化72例，中分化31例，高分化14例。所有研究對象均自愿參與本研究，并簽署知情同意書，本研究經本院醫學倫理委員會審核通過。

1.2方法

1.2.1免疫組化法檢測 采用免疫組化法檢測手術切除組織中TIP30、KAI-1蛋白的表達。自手術切除組織中取胃癌組織和癌旁組織各1 cm×1 cm×1 cm，經0.1 mol/L甲醛溶液浸泡24 h固定。石蠟包埋后對組塊進行修整，梯度濃度乙醇脫水(70%乙醇溶液脫水6 h，80%乙醇溶液脫水6 h，95%乙醇溶液Ⅰ脫水12 h，95%乙醇溶液Ⅱ脫水12 h，100%乙醇Ⅰ脫水1.5 h，100%乙醇Ⅱ脫水1.5 h)。枸櫞酸0.10 g+枸櫞酸三鈉0.75 g+200.00 mL蒸餾水對組織塊進行抗原熱修復，連續切片(層厚4 μm)，65 ℃烤片24 h。二甲苯浸泡3次，每次15 min，乙醇水化，沖洗5 min，3%過氧化氫溶液孵育(室溫、15 min)。37 ℃封閉孵育0.5 h，滴加鼠抗人TIP30、KAI-1單抗(工作濃度：1∶200、1∶150)，沖洗3次，每次5 min，滴加生物素標記的兔抗鼠TIP30、KAI-1多抗(工作濃度：1∶2 000)，沖洗3次，每次5 min。二氨基聯苯胺顯色，蘇木精復染，樹膠封片。光學顯微鏡下觀察：TIP30、KAI-1均定位于細胞質，將不顯色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別記為0、1、2、3分，將陽性細胞率<10%、10%～<30%、30%～<60%、60%～100%(均不包含前者)分別記為0、1、2、3分，求二者之和，結果≥3分者記為對應蛋白陽性表達，否則記為對應蛋白陰性表達[10]。

1.2.2隨訪 所有患者術后均定期隨訪，通過復診和電話方式進行，為期1年，將手術殘端出現腫瘤或轉移，且經病理穿刺活檢證實復發者記為復發。

1.3觀察指標 比較胃癌組織與癌旁組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率；比較不同臨床、病理特征胃癌患者癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率；分析胃癌根治術后復發率及其影響因素。

1.4統計學處理 采用SPSS22.0統計軟件進行數據處理及統計分析。計數資料以例數或百分率表示，采用χ2檢驗進行比較；胃癌根治術后復發的影響因素采用多元Logistic回歸分析，將單因素分析結果差異有統計學意義的因素納入多元Logistic回歸分析模型并采用逐步向前法篩選影響因素。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1胃癌組織與癌旁組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率比較 胃癌患者有3例診療依從性差、2例失訪、1例因交通事故意外死亡，均剔除本研究。癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率分別為34.51%(39/113)、29.20%(33/113)，癌旁組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率分別為73.45%(83/113)、75.22%(85/113)。癌組織中TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率均低于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)。典型病例免疫組化結果見圖1、2。

注：A為胃癌組織TIP30陰性表達；B為癌旁組織TIP30陽性表達。

2.2不同特征胃癌患者癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率比較 不同性別、年齡胃癌患者癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，且臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤漿膜層、未/低分化患者癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率分別低于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、未浸潤漿膜層、中/高分化患者，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

注：A為胃癌組織KAI-1蛋白陰性表達；B為癌旁組織KAI-1蛋白陽性表達。

2.3不同特征患者在胃癌根治術后復發與不復發患者中所占比例比較 隨訪期間，胃癌根治術后共有26例復發，其中16例為局部復發(5例吻合口復發、5例吻合口復發伴區域淋巴結轉移、4例吻合口復發伴腹膜后淋巴結轉移、2例吻合口復發伴區域淋巴結及腹膜后淋巴結轉移)，7例為局部復發伴遠處轉移(4例吻合口復發伴腹膜轉移、2例吻合口復發伴腹膜后淋巴結轉移及肝轉移、1例吻合口復發伴腹膜后淋巴結和區域淋巴結轉移及骨轉移)、3例為單純遠處轉移(1例肝轉移、1例肝轉移伴骨轉移、1例左鎖骨上淋巴結轉移伴骨轉移)，復發率為23.01%(26/113)。胃癌根治術后復發患者中臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤漿膜層、未/低分化的患者比例均高于未復發患者，癌組織TIP30陽性表達率、癌組織KAI-1蛋白陽性表達率、術后規范治療的患者比例均低于未復發患者，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.4Logistic回歸分析胃癌根治術后復發的影響因素 經Logistic回歸分析，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤漿膜層、未/低分化均是胃癌根治術后復發的危險因素(OR=5.468、7.207、6.265、8.559，P<0.05)，癌組織TIP30陽性表達、癌組織KAI-1蛋白陽性表達、術后規范治療均是其保護因素(OR=0.591、0.480、0.560，P<0.05)。見表3。

表2 不同特征患者在胃癌根治術后復發與不復發患者中所占比例比較[n(%)]

續表2 不同特征患者在胃癌根治術后復發與不復發患者中所占比例比較[n(%)]

表3 Logistic回歸分析胃癌根治術后復發的影響因素

3 討 論

胃癌根治術后有復發風險，與腫瘤的惡性潛能有關，且在手術中容易造成癌細胞脫落、種植，再加上有微小腫瘤灶，手術難以徹底清除癌細胞，進而可導致術后復發或轉移，引起預后不良。本研究結果顯示，胃癌根治術后復發率為23.01%，低于唐羿等[11]報道的39.47%(15/38)、黃永剛[12]報道的35.98%(154/428)，本研究與上述報道數據不符，可能與所選患者的病情、治療方式、術后輔助治療方式和隨訪時間等差異有關。本研究與上述報道結果均提示胃癌患者根治術后復發風險高，也表明對其分子機制與影響因素進行探討十分必要。

TIP30和KAI-1蛋白低表達已被證實與胃癌的發生有關。本研究結果顯示，胃癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率分別為34.51%、29.20%，明顯低于癌旁組織的73.45%、75.22%，與既往李文熙[13]的報道基本相符，其研究顯示胃癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率分別為40.00%(18/45)、31.11%(14/45)，而正常胃黏膜組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率分別為88.00%(22/25)、80.00%(20/25)，說明胃癌組織中TIP30、KAI-1蛋白多呈現低表達。TIP30對腫瘤的抑制作用可能是通過促進細胞凋亡、抑制血管新生等實現的，且還可降低癌細胞侵襲、遷移活性。有研究證實癌組織TIP30陽性表達的患者腫瘤無進展生存期和總生存期均較癌組織TIP30陰性表達的患者延長，表明TIP30陽性表達可改善癌癥患者的預后[14]。KAI-1蛋白表達與惡性腫瘤浸潤、轉移均有關，有研究發現在漿液性卵巢癌組織中KAI-1蛋白表達下調甚至缺失，并且在有遠處轉移的患者中其下調表現更明顯[15]。本研究結果與上述相關報道及分析均一致，推測可將二者作為胃癌治療的新靶點以改善此類患者的預后。

本研究還發現，不同臨床分期、淋巴結轉移情況、腫瘤浸潤程度及腫瘤分化程度癌組織中TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率差異有統計學意義(P<0.05)，進一步提示二者可能參與胃癌病情進展；胃癌根治術后復發患者癌組織TIP30陽性表達率、癌組織KAI-1蛋白陽性表達率均低于未復發患者，且二者陽性表達均是根治術后復發的保護因素，提示癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達有助于降低胃癌根治術后的復發率。有研究表明，TIP30低表達可促進胃癌生長，增加腫瘤負荷[16]；也有研究證實上調TIP30表達有助于抑制胃癌細胞株增殖、促進其凋亡，并可通過此途徑促進腫瘤浸潤[17]。KAI-1蛋白表達下調則在胃癌早期已經出現，且與腫瘤惡性潛能相關，進而可影響腫瘤發展，甚至危及患者的生命。有報道指出，上調KAI-1蛋白表達不僅有助于抑制胃癌細胞的惡性行為，還可增強其對化療藥物的敏感性，可嘗試將其作為惡性腫瘤治療的靶點[18]。因此，胃癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達的患者根治術后復發風險相對較低。

此外，本研究結果還顯示，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤漿膜層、未/低分化均是胃癌根治術后復發的危險因素，而術后規范治療是其保護因素，與既往相關報道一致[19-20]，提示針對Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤漿膜層、未/低分化的胃癌患者應當加強抗腫瘤治療，在根治術后應配合其他抗腫瘤措施預防復發；另外臨床醫師還應當為患者提供規范治療，使其能夠堅定信心、堅持配合治療，以降低復發率。

綜上所述，胃癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率低于癌旁組織，且臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、浸潤漿膜層、未/低分化患者癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達率均更低；胃癌根治術后復發風險高，上述病理特征均可增加患者的復發風險，癌組織TIP30、KAI-1蛋白陽性表達與術后規范治療則是胃癌根治術后復發的保護因素。