血清人附睪蛋白 4對(duì)非小細(xì)胞肺癌的診斷價(jià)值△

王子搏暢，陳婷婷，連亨寧，汪璐，田德興，胡繩，曲遠(yuǎn)清，黃小露，馬李杰#，肖貞良

西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院1呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，3檢驗(yàn)科，成都 610083

2武裝警察部隊(duì)工程大學(xué)基礎(chǔ)部，西安 710086

國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（International Agency for Research on Cancer，IARC）的數(shù)據(jù)顯示，肺癌的發(fā)病率及病死率均逐年攀升，死亡人數(shù)已占全球腫瘤的18.4%，居腫瘤性疾病首位[1]。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌的80%以上，并且約75%的NSCLC患者在診斷時(shí)已是晚期。因此，提高NSCLC的早期診斷能力具有重大的臨床意義[2-3]。現(xiàn)階段主要采用影像學(xué)檢查及血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)作為肺癌復(fù)查的主要方法，單一血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)NSCLC的復(fù)查能力有限，臨床采用多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)行篩查[4-7]。有研究顯示，人附睪蛋白4（human eididymis 4，HE4）在NSCLC患者血清中表達(dá)增高，且聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)NSCLC的早期診斷具有一定的價(jià)值[8-10]。本研究探討HE4在NSCLC患者血清中的表達(dá)及其對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018年6月至2020年1月于西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院首次確診的97例NSCLC患者作為肺癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②首次經(jīng)病理活檢確診為肺癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心、肺、肝、腎功能不全；②合并急慢性感染；③合并急慢性顱內(nèi)出血；④合并影響凝血功能的因素；⑤既往經(jīng)過化療、放療或手術(shù)治療。97例NSCLC患者中，男性55例，女性42例；平均年齡（60.89±9.89）歲；腺癌78例，鱗狀細(xì)胞癌17例，未明確分型2例；臨床分期：Ⅰ期41例，Ⅱ期7例，Ⅲ期18例，Ⅳ期31例。另選取同期在西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院體檢中心進(jìn)行體檢的47例健康者作為對(duì)照組，其中，男性37例，女性10例；平均年齡（50.98±5.33）歲。兩組研究對(duì)象性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意。

1.2 標(biāo)本采集

呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科醫(yī)師根據(jù)入院患者胸部CT影像、血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果及臨床癥狀等臨床資料，篩選初步診斷為NSCLC的患者，由檢驗(yàn)科醫(yī)師留取上述患者臨床檢測(cè)后擬廢棄的血清，置于-80℃冰箱用于本研究。血清制備按照檢驗(yàn)科相關(guān)操作流程進(jìn)行，具體為靜脈血4 ml在3 h內(nèi)以4000 r/min離心10 min分離血清。此法既未增加患者生理痛苦，也未產(chǎn)生額外費(fèi)用。對(duì)照組（健康體檢人員）采用同樣的方法收集血清。

1.3 檢測(cè)方法

采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)肺癌組和對(duì)照組研究對(duì)象血清中癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、糖類抗原 125（carbohydrate antigen 125，CA125）、糖類抗原 19-9（carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）水平，全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀為貝克曼公司的DXI800，測(cè)定試劑為對(duì)應(yīng)原裝試劑，操作步驟及檢測(cè)過程均嚴(yán)格按照試劑盒說明書及儀器操作指南進(jìn)行。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)肺癌組和對(duì)照組研究對(duì)象血清中HE4水平，經(jīng)洗滌后加入含有HE4抗原的待測(cè)血清樣品，如待檢樣品中有HE4抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標(biāo)記的特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色進(jìn)行測(cè)定，底物降解的量即為HE4抗原的量，具體實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；服從正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；不服從正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（P25，P75）]表示，組間比較采用雙樣本Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)或獨(dú)立樣本Kruskal-WallisH檢驗(yàn)；采用受試者工作特征（receiver operator characteristic，ROC）曲線分析不同腫瘤標(biāo)志物對(duì)肺癌的診斷效能；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組與對(duì)照組腫瘤標(biāo)志物水平的比較

肺癌組患者血清 HE4、CEA、CA19-9、CA125水平均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 肺癌組與對(duì)照組研究對(duì)象各腫瘤標(biāo)志物水平的比較[M（ P25， P75）]

2.2 不同臨床分期NSCLC患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較

Ⅰ～Ⅳ期NSCLC患者血清中HE4、CEA、CA19-9、CA125的表達(dá)水平隨著臨床分期的升高而升高（P＜0.01），其中，Ⅲ期患者血清中HE4、CA19-9表達(dá)水平低于Ⅱ期患者，可能與樣本量少有關(guān)。（表2）

表2 不同臨床分期NSCLC患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較[M（ P25， P75）]

2.3 不同性別NSCLC患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較

男性NSCLC患者血清HE4表達(dá)水平高于女性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.030）。不同性別NSCLC患者CEA、CA19-9、CA125水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表3）

表3 男性和女性NSCLC患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較[M（ P25， P75）]

2.4 有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移NSCLC患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較

本研究入組的NSCLC患者中，67例無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（M0期），30例有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（M1期）。有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的NSCLC患者血清HE4、CEA、CA19-9、CA125水平均明顯高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表4）

表4 有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移NSCLC患者血清腫瘤標(biāo)志物水平的比較[M（ P25， P75）]

2.5 血清腫瘤標(biāo)志物診斷NSCLC的ROC曲線分析

本研究采用ROC曲線分析HE4、CEA、CA125、HE4聯(lián)合CEA以及HE4聯(lián)合CA125對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值。結(jié)果表明，CA125、CEA單獨(dú)檢測(cè)診斷NSCLC的曲線下面積分別為0.553、0.577，均低于HE4（0.815）；HE4聯(lián)合CEA、HE4聯(lián)合CA125檢測(cè)診斷NSCLC的曲線下面積分別為0.822、0.843。另外，與CEA和CA125相比，HE4單獨(dú)檢測(cè)時(shí)診斷NSCLC的靈敏度最高，為0.742。此外，HE4與CEA或CA125聯(lián)合檢測(cè)時(shí)可提高診斷NSCLC的特異度，從HE4的0.787分別提高到0.894、0.915。（表5、表6、圖1）

表5 各腫瘤標(biāo)志物單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷NSCLC的ROC曲線分析

表6 各腫瘤標(biāo)志物單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC的診斷效能

圖1 各腫瘤標(biāo)志物單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)診斷NSCLC的ROC曲線

3 討論

多數(shù)肺癌患者在早期無明顯臨床癥狀，不易被發(fā)現(xiàn)，確診時(shí)已為中晚期，錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)[11]。因而高特異性的腫瘤標(biāo)志物對(duì)于提高肺癌的早期診斷率意義重大。

HE4是一種人附睪上皮細(xì)胞分泌的小分子糖蛋白，屬于乳清酸性4-二硫鍵核心家族。HE4不僅表達(dá)于人生殖道上皮細(xì)胞，也表達(dá)于近端呼吸道上皮細(xì)胞[12]，HE4既能作為卵巢癌的血清標(biāo)志物，也可應(yīng)用于肺癌的診斷。近年來大量研究證實(shí)，NSCLC患者組織及血清中HE4表達(dá)升高，可能成為診斷NSCLC的高特異性腫瘤標(biāo)志物，也可能是療效及預(yù)后評(píng)估的客觀指標(biāo)[13-15]。

劉政宏等[16]選擇124例NSCLC患者為觀察組，另選取同期96例健康體檢者為對(duì)照組，發(fā)現(xiàn)HE4在NSCLC患者組織及血清中表達(dá)升高。肖然等[17]對(duì)214例肺癌患者及76例健康者進(jìn)行血清HE4、CEA、細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段抗原21-1（cyto-keratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）、鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCC-Ag）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE）水平檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)，肺癌患者HE4水平顯著高于健康者，并且，HE4參與的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC的診斷效能優(yōu)于CYFRA21-1和CEA。另外，史永久等[18]開展的HE4對(duì)肺癌診斷價(jià)值的Meta分析也表明，HE4在NSCLC診斷中具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示，NSCLC患者血清HE4水平明顯高于健康人群，達(dá)到6倍，而CEA、CA125兩個(gè)指標(biāo)在NSCLC患者血清中的水平則僅為健康人群的1～2倍，這與Zeng等[19]的研究結(jié)果一致，HE4對(duì)NSCLC患者的診斷具有更高的靈敏度和特異度。對(duì)于不同臨床分期的NSCLC患者，本研究發(fā)現(xiàn)，Ⅳ期患者血清HE4、CEA、CA19-9、CA125水平均高于Ⅰ～Ⅲ期患者，其中HE4尤為顯著，提示血清HE4水平與NSCLC的疾病進(jìn)展存在一定關(guān)系，李婷娜等[20]亦有類似發(fā)現(xiàn)。

目前獨(dú)立用于NSCLC診斷的腫瘤標(biāo)志物特異度和靈敏度均不高，因此本研究特別分析了HE4及其他指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)在NSCLC診斷中的應(yīng)用價(jià)值。在王強(qiáng)等[21]的研究中，ROC曲線分析顯示，血清HE4診斷肺癌的特異度為72.70%，HE4聯(lián)合CEA、CYFRA21-1和NSE診斷肺癌的特異度則提升為81.80%。陳波等[22]發(fā)現(xiàn)，HE4、CYFRA21-1和組織多肽特異性抗原（tissue peptide-specific antigen，TPS）聯(lián)合檢測(cè)診斷NSCLC的靈敏度較單項(xiàng)檢測(cè)明顯增高。Korkmaz等[23]也通過ROC曲線分析指出，當(dāng)HE4與CYFRA21-1聯(lián)合檢測(cè)時(shí)診斷價(jià)值進(jìn)一步提高。本研究中的ROC曲線分析顯示，HE4聯(lián)合CEA或CA125檢測(cè)的曲線下面積均大于HE4單獨(dú)檢測(cè)，特異度由HE4單獨(dú)檢測(cè)時(shí)的78.7%提升為89.4%和91.5%，說明HE4聯(lián)合CEA或CA125檢測(cè)診斷NSCLC的特異度進(jìn)一步提高，因此臨床可積極采用HE4參與的腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，以便對(duì)肺癌早發(fā)現(xiàn)早治療，提高后續(xù)治療效果及生存率。另外，本研究的重要發(fā)現(xiàn)是，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血清HE4水平明顯高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，高達(dá)4倍，說明HE4的表達(dá)水平有可能成為判斷NSCLC患者有無轉(zhuǎn)移發(fā)生的重要指標(biāo)。Weissensteiner和Babusikova[24]的研究也指出，HE4濃度的升高對(duì)肺癌患者骨轉(zhuǎn)移的診斷有重要意義。

綜上所述，血清HE4是比CEA、CA125、CA19-9診斷效能更高的NSCLC診斷標(biāo)志物；本研究發(fā)現(xiàn)，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者血清HE4水平明顯高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，提示其可能成為判斷有無轉(zhuǎn)移發(fā)生的重要指標(biāo)。另外，本研究結(jié)果證實(shí)，男性NSCLC患者血清HE4水平高于女性，并且，HE4與CEA或CA125聯(lián)合檢測(cè)可顯著提高診斷NSCLC的特異度。本研究仍有不足，首先，本研究是納入樣本量較少的單中心研究，存在個(gè)體差異導(dǎo)致的數(shù)據(jù)偏倚可能；其次，本研究尚不夠深入，未能充分闡明HE4聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)志物對(duì)NSCLC診斷、分型、預(yù)后等方面的意義。相信隨著對(duì)HE4研究的不斷推進(jìn)，HE4在NSCLC診斷與治療中的應(yīng)用價(jià)值會(huì)日趨明確。