膠東地區(qū)不同家禽MSSA和MRSA的流行分布與耐藥性分析

肖 震，劉 娜，趙建梅，李 彥，隋明華，王 娟，段笑笑，韓 云，劉俊輝，王 琳，張青青，黃秀梅，高玉斌，王君瑋，曲志娜*，劉煥奇

(1. 中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東 青島 266032；2. 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266109；3. 青島市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山東 青島 266041；4. 萊西市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東 青島 266600)

金黃色葡萄球菌(S.aureus)廣泛分布于世界各地，是人類和其他動(dòng)物多種感染病的主要病原菌，包括輕微的細(xì)菌感染甚至到危及生命的菌血癥[1-2]。金黃色葡萄球菌的來(lái)源報(bào)道最早可以追溯到1880年，當(dāng)時(shí)亞歷山大·奧斯頓(Alexander Ogston)從手術(shù)傷口感染中分離出金黃色葡萄球菌。這種分離的微生物能夠在注射到豚鼠和小鼠體內(nèi)時(shí)產(chǎn)生膿腫。[3-4]近年來(lái)，隨著全球范圍內(nèi)抗生素藥物的廣泛使用，金黃色葡萄球菌耐藥狀況日趨嚴(yán)重，以耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)為典型代表的多重耐藥菌株的相關(guān)報(bào)道漸增。有研究顯示，全球不同地區(qū)MRSA的感染率占到金黃色葡萄球菌總檢出數(shù)量的30%～60%，且呈逐年上升趨勢(shì)[5]。MRSA主要是由mecA編碼低親和力青霉素結(jié)合蛋白2a (PBP2a)而產(chǎn)生耐藥性[6]，該蛋白對(duì)所有β-內(nèi)酰胺類抗菌素(青霉素、頭孢菌素、碳青霉烯類)具有低親和力，使葡萄球菌對(duì)這一大型和關(guān)鍵的抗菌素類產(chǎn)生耐藥性[7-8]；也有一小部分由于質(zhì)粒介導(dǎo)產(chǎn)生的β2內(nèi)酰胺酶而產(chǎn)生耐藥性。有分析證實(shí)家畜接觸和人類耐甲氧西林金黃色葡萄球菌傳播之間呈正相關(guān)，農(nóng)場(chǎng)人員和職業(yè)接觸豬或家禽的工人也面臨著被家畜相關(guān)MRSA (LA-MRSA)感染的高風(fēng)險(xiǎn)。[9-11]因MRSA感染率高，致死率高，對(duì)多種抗生素耐藥，成為全球性臨床治療難點(diǎn)，不僅嚴(yán)重威脅人類公共衛(wèi)生安全，而且畜禽攜帶耐藥菌，也會(huì)因治療困難給養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性存在時(shí)間、空間、動(dòng)物間等流行分布差異，且MRSA的報(bào)道多以牛源、豬源為主，禽源報(bào)道較少。因此，本研究通過(guò)分析青島地區(qū)不同禽源MSSA和MRSA的流行及耐藥情況，采取有針對(duì)性的干預(yù)措施。本研究旨在評(píng)估青島地區(qū)蛋雞、肉雞、水禽三種不同家禽共2730份咽拭子樣品中MSSA和MRSA的流行情況、耐藥特征及spa優(yōu)勢(shì)型別，為該地區(qū)防控MRSA及臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基、MRSA顯色培養(yǎng)基購(gòu)于上海欣中生物工程有限公司；7.5%氯化鈉肉湯、胰蛋白胨大豆瓊脂，購(gòu)于北京陸橋技術(shù)股份有限公司；基質(zhì)、裂解液，均購(gòu)于鄭州安圖生物工程股份有限公司，Go Taq Green Master Mix、DNA Marker DL1 000購(gòu)于TaKaRa公司，核酸染料、瓊脂糖；96孔藥敏板，購(gòu)于上海星佰生物技術(shù)有限公司；生物安全柜；細(xì)菌恒溫培養(yǎng)箱；MS1000全自動(dòng)微生物質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)； PTC200 基因擴(kuò)增儀；電泳儀、XR凝膠成像分析儀；比濁儀；渦旋混勻儀等。金黃色葡萄球菌ATCC 29213和MRSA ATCC 33591均由中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心致病微生物監(jiān)測(cè)室提供。

1.2 樣品來(lái)源 2021年8月至10月期間，在膠東地區(qū)從49個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)(蛋雞場(chǎng)15個(gè)、肉雞場(chǎng)22個(gè)、水禽 (肉鴨、鵝) 場(chǎng)12個(gè))采集2730份咽拭子，用于本實(shí)驗(yàn)研究。

1.3 金黃色葡萄球菌、MRSA的分離與鑒定 將采集的咽拭子置于預(yù)先盛有7.5%氯化鈉肉湯的離心管中，37 ℃恒溫培養(yǎng)18 h后，三區(qū)劃線分別接種于金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基和MRSA顯色培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)18～24 h，挑取疑似陽(yáng)性單菌落，再次劃線于上述兩種顯色培養(yǎng)基中，重復(fù)操作3次，挑取單菌落接種于胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)18～24 h后，挑取單菌落涂布到96孔靶板上，使用MS1000全自動(dòng)微生物質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)鑒定。上述步驟同時(shí)以質(zhì)控菌株ATCC 29213做陽(yáng)性對(duì)照。

選取部分金黃色葡萄球菌菌株，煮沸法粗提細(xì)菌DNA作為PCR模板，參考文獻(xiàn)[12]設(shè)計(jì)mecA引物，見表1。反應(yīng)體系：Go Taq Green Master Mix 12.5 μL，上下游引物各0.5 μL，模板2 μL，DDH20補(bǔ)足25 μL。反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min,30個(gè)循環(huán)，72 ℃再延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳，電泳緩沖液濃度為1×TAE，130V，25 min，凝膠成像儀觀察結(jié)果。同時(shí)以質(zhì)控菌株ATCC33591作為陽(yáng)性對(duì)照同步進(jìn)行。

1.4spa分型 選取214株MRSA和137株 MSSA 進(jìn)行spa分型實(shí)驗(yàn)。查閱文獻(xiàn)[13]并參照設(shè)計(jì)引物如表1所示。由擎科生物科技有限公司合成。反應(yīng)體系設(shè)置為Go Taq Green Master Mix 12.5 μL，上下游引物各0.5 μL，DNA模板2 μL，DDH20補(bǔ)足25 μL。PCR擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃1 min，35個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸7 min。擴(kuò)增后產(chǎn)物送由擎科生物科技有限公司測(cè)序。spa基因重復(fù)序列區(qū)域5’端的標(biāo)志序列為RCAMCAAAA，3’端的標(biāo)志序列為TAYATGTCGT。按此規(guī)則截取spa基因重復(fù)序列區(qū)域，并按照24 bp分割成不同的重復(fù)單元，結(jié)果提交至spa分型數(shù)據(jù)庫(kù)(http:∥www.ridom.de/spaserver/)進(jìn)行分型分析。

表1 引物序列及目的片段大小Tab 1 Primer sequences and target fragment sizes

1.5 藥敏試驗(yàn) 選取97株MSSA和102株MRSA，采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法，使用96孔藥敏板測(cè)定13大類18種抗菌藥的最小抑菌濃度(Minimal inhibitory concentration, MIC)，并根據(jù)CLSI的判定標(biāo)準(zhǔn)獲得實(shí)驗(yàn)菌株敏感(S)、中介(I)和耐藥(R)的結(jié)果。同時(shí)使用質(zhì)控菌株ATCC 29213同步進(jìn)行，質(zhì)控菌株在質(zhì)控范圍內(nèi)，且陽(yáng)性對(duì)照有菌生長(zhǎng)、陰性對(duì)照無(wú)菌生長(zhǎng)，則結(jié)果判讀有效。對(duì)3類及3類以上抗菌藥同時(shí)耐藥即為多重耐藥。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及處理 使用SPSS 26.0軟件、卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)及差異顯著性分析，P≤0.01，則差異極顯著，用“**”表示；0.010.05，則差異不顯著，用“ns”表示。利用BioNumerics 7.6 軟件構(gòu)建了基于spa型別的最小生成樹。在最小生成樹中，一個(gè)圈代表一個(gè)spa型，圈的大小代表菌株數(shù)量的多少，圓圈之間的距離代表親緣關(guān)系遠(yuǎn)近。

2 結(jié)果與分析

2.1 MSSA和MRSA菌株分布情況 2730份咽拭子樣品中，共分離到金黃色葡萄球菌742株，總體分離率為27.18%。其中MSSA 528株，MRSA 214株，分離率分別為19.34%和7.84%。從不同家禽看，水禽源菌株總體分離率最高(38.33%)，其次是蛋雞(28.45%)、肉雞(20.33%)。無(wú)論是MSSA還是MRSA在水禽中分離率均為最高(27.58%、10.76%)且青島地區(qū)蛋雞、肉雞、水禽三種不同來(lái)源的菌株分離率均有極顯著差異。詳見表2。

表2 青島地區(qū)不同家禽MSSA和MRSA分離率(菌株數(shù)/采樣量)Tab 2 MSSA and MRSA isolation rates in different poultry species in Qingdao, China(number of strains / sample size)

2.2spa分型結(jié)果 對(duì)214株MRSA和137株 MSSA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳和測(cè)序比對(duì)，獲得16種spa型別，詳見表3。對(duì)不同禽源分離菌株建立了基于spa型別的最小生成樹，展示了肉雞、蛋雞及水禽分離菌株的種群結(jié)構(gòu)及菌株間親緣關(guān)系，詳見圖1～圖3。其中，MRSA 有7種spa型，分別為t899(204，95.30%)、t1939(1.87%)、t034(0.93%)、t4558(0.47%)、t1250(0.47%)、t1793(0.47%)、t15591(0.47%)。MSSA有12種spa型，分別為t899、t034、t002、t010、t011、t1793、t2247、t267、t3041、t3155、t5268、t571，其中t899共97株(70.80%)， t034有11株(8.00%)、t010、t2247均有6株(各占4.40%)、t3041、t002、t5268均有3株(各占2.20%)、t1793、t267、t571均有2株(各占1.46%)、t011、t3155均有1株(各占0.73%)。

表3 青島地區(qū)不同家禽來(lái)源MSSA和MRSA spa 分型結(jié)果Tab 3 Results of MSSA and MRSA spa typing from different poultry sources in Qingdao, China

圖1 137株 MSSA與214株MRSA基于不同家禽來(lái)源和spa型別的最小生成樹Fig 1 Minimum spanning tree of 137 MSSA and 214 MRSA by different poultry and spa type(注： A：所有菌株；B：MSSA；C：MRSA DJ: 蛋雞 RJ: 肉雞 SQ:水禽)

圖2 青島地區(qū)禽源MSSA與MRSA的耐藥率比較Fig 2 Comparison of resistance rates between avian derived MSSA and MRSA in Qingdao, China

從不同家禽看，蛋雞來(lái)源的菌株共得到7種spa型，t899共102株(MSSA 38株，MRSA 64株)，其次是t010共6株，t002共3株，t2247共2株，t034、t3041、t3155各1株，其中，t010、t002、t3155僅在蛋雞中分布，t034、t3041在蛋雞，肉雞，水禽來(lái)源的樣品中均有分布。蛋雞來(lái)源的MRSA菌株均為t899型別。肉雞來(lái)源的菌株共得到8種spa型，MSSA中， t899共有30株，t034共6株，t2247共4株，t571共2株，t3041、t011各1株。MRSA中，t899共有74株，t1939共4株，t011、t4558各1株。t571、t011僅在肉雞中分布。水禽來(lái)源的菌株共得到8種spa型，MSSA中t899共有29株，t034共有4株，t5268共有3株，t1793、t267各有2株，t3041有1株。MRSA中，t899共有66株，t034共有2株，t1793、t1250、t15591各有1株。其中t1793、t5268、t267僅在水禽中有分布。

2.3 藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)CLSI的判定標(biāo)準(zhǔn)，97株MSSA及102株MRSA對(duì)18種藥物的耐藥情況見表4。青島地區(qū)分離到的禽源MSSA和MRSA均對(duì)18種藥物均有不同程度的耐藥。97株MSSA對(duì)青霉素、紅霉素、喹諾酮類藥物(恩諾沙星、氧氟沙星)的耐藥已十分嚴(yán)重，耐藥率均已達(dá)到80%以上，對(duì)磺胺異噁唑、利奈唑胺、多西環(huán)素較為敏感，耐藥率均在10%以下。對(duì)克林霉素、氟苯尼考、替米考星、慶大霉素均表現(xiàn)中等程度以上的耐藥，耐藥率在60%～80%之間。對(duì)其余藥物的耐藥率在20%～50%之間。102株MRSA對(duì)青霉素、紅霉素、克林霉素、喹諾酮類藥物(恩諾沙星、氧氟沙星)、氟苯尼考、替米考星等藥物耐藥嚴(yán)重，耐藥率均達(dá)到100%，對(duì)頭孢類、苯唑西林、泰妙菌素、慶大霉素耐藥率也在90%以上，對(duì)阿莫西林/克拉維酸表現(xiàn)中等程度以上的耐藥，耐藥率為77.45%。對(duì)利奈唑胺、多西環(huán)素同樣敏感，耐藥率均低于5%。對(duì)磺胺類藥物的耐藥率在10%～50%之間。MSSA與MRSA中均未分離到萬(wàn)古霉素耐藥菌株。表4和圖2顯示，除磺胺異噁唑、萬(wàn)古霉素、復(fù)方新諾明、多西環(huán)素、利奈唑胺5種藥物外，MRSA對(duì)其余13種藥物耐藥率均極顯著高于MSSA(P<0.01)。

從不同家禽看，蛋雞、肉雞、水禽三種家禽來(lái)源的MSSA菌株對(duì)克林霉素、磺胺異噁唑、替米考星耐藥差異極顯著(P<0.01)，對(duì)紅霉素、頭孢噻呋、頭孢西丁、苯唑西林差異顯著(P<0.05)，對(duì)其余11種藥物無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。蛋雞、肉雞、水禽三種家禽來(lái)源的MRSA菌株對(duì)阿莫西林/克拉維酸、磺胺異噁唑、泰妙菌素差異極顯著(P<0.01)，對(duì)慶大霉素差異顯著(P<0.05)，對(duì)其余藥物無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.4 多重耐藥結(jié)果 191株金黃色葡萄球菌多重耐藥，總體多重耐藥率為95.98%(191/199)。其中，97株MSSA中多重耐藥株共有89株，占比為91.75%，集中分布在6～8耐，未分離到10耐以上菌株。102株MRSA菌株均為多重耐藥株，且均在5耐以上，集中分布在9～10耐。多重耐藥結(jié)果見圖3及表5。

圖3 青島地區(qū)三種家禽來(lái)源MSSA與MRSA的多重耐藥結(jié)果Fig 3 Multi drug resistance results of MSSA and MRSA from three poultry sources in Qingdao, China

從不同家禽看，MSSA中，蛋雞耐藥重?cái)?shù)較為分散，從0耐到10耐均有分布，其中7耐、8耐占比最多，肉雞耐藥重?cái)?shù)分布較為集中，7耐所占比例最多，水禽耐藥重?cái)?shù)多集中在8耐，其次是6耐，均無(wú)10耐及以上菌株。MRSA中，蛋雞、肉雞、水禽三種家禽來(lái)源的菌株耐藥重?cái)?shù)均很集中，均有過(guò)半比例(64.44%、68.18%、68.25%)為9耐菌株。

表5 青島地區(qū)三種家禽來(lái)源MSSA與MRSA的多重耐藥結(jié)果Tab 4 Multi drug resistance results of MSSA and MRSA from three poultry sources in Qingdao, China

3 討 論

金黃色葡萄球菌廣泛分布于世界各地區(qū)、各類動(dòng)物體內(nèi)，隨著抗菌藥的廣泛使用導(dǎo)致耐藥菌株不斷增多，以MRSA為代表的耐藥菌株報(bào)道較多，尤以豬源、牛源為主，近年來(lái)禽源樣品也有報(bào)道。范麗霞等人針對(duì)山東地區(qū)畜禽糞污進(jìn)行了金黃色葡萄球菌的分離鑒定，結(jié)果顯示80份樣品中有3份檢出有金黃色葡萄球菌，分離率達(dá)到3.75%。[14]低于本研究，推測(cè)原因在于糞樣樣本與咽拭子樣本等不同樣本形式對(duì)最終分離率存在影響，咽拭子分離率較高而糞樣較低。王龍光對(duì)膠東地區(qū)生豬生產(chǎn)鏈各環(huán)節(jié)分離鑒定，2556 份樣品共分離出 MSSA 386 株(15.10%)，MRSA 122 株(4.77%)，SA 的分離率為19.87%，[15]低于本文禽源樣本分離率。陳瑤等對(duì)重慶市多個(gè)動(dòng)物源(豬、雞、牛、羊、兔)進(jìn)行糞樣采集及金黃色葡萄球菌分離鑒定，其中豬源分離率較高，而雞源金黃色葡萄球菌分離率僅占7.6%[16]。四川省不同地區(qū)養(yǎng)禽場(chǎng)(雞、鴨)MRSA檢出率在22.95%[17]。韓國(guó)學(xué)者Song等在一份報(bào)告中指出，奶牛乳腺炎乳樣中，MRSA的檢出率有逐年上升的趨勢(shì)，從 1.3%(2003)、2.5%(2007)、4.3%(2011)上漲到13.9%(2012)[18]。在Saliha Bounar-Kechih的一項(xiàng)研究中，從阿爾及利亞北部地區(qū)的蛋雞和肉雞屠宰場(chǎng)采集了共8375份樣品，其中金黃色葡萄球菌在蛋雞和肉雞中分離率分別為42%和 12%[19]。本實(shí)驗(yàn)所用樣品均來(lái)源于青島地區(qū)的三種不同家禽，具有廣泛代表性。2730份咽拭子樣品中，金黃色葡萄球菌、MSSA、MRSA分離率分別為27.18%、19.34%和7.84%。其中，水禽來(lái)源的金黃色葡萄球菌的整體分離率及MRSA分離率均顯著高于蛋雞和肉雞來(lái)源菌株。綜上所述，不同國(guó)家及地區(qū)、不同動(dòng)物甚至不同品種家禽來(lái)源的MSSA及MRSA分離率不盡相同，原因可能在于不同國(guó)家、不同地區(qū)的細(xì)菌流行情況、養(yǎng)殖規(guī)模化程度以及畜禽飼養(yǎng)管理不同，導(dǎo)致分離率出現(xiàn)差異。

spa分型結(jié)果顯示，無(wú)論是從不同家禽來(lái)源來(lái)看還是從青島不同市區(qū)來(lái)看，t899在MSSA和MRSA菌株中均為優(yōu)勢(shì)型別。葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal protein A)是金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁的組成部分和重要的毒力因子，包括Fc結(jié)合區(qū)，X區(qū)和C末端H區(qū)域。X區(qū)是由24 bp 重復(fù)序列串聯(lián)而成的可變重復(fù)區(qū)域[20],基因呈現(xiàn)高度多態(tài)性[21],良好的重復(fù)性及穩(wěn)定性，廣泛用于金黃色葡萄球菌的分型研究。顏文光等人在研究中發(fā)現(xiàn)62株動(dòng)物源(豬、牛、羊、鴨)金黃色葡萄球菌菌株中共檢測(cè)到17種基因型，檢測(cè)到最多的型別為t899(30.65%)[22]。何文強(qiáng)等人對(duì)青島省相關(guān)雞肉產(chǎn)品調(diào)查后發(fā)現(xiàn)，主要的 MRSA 克隆是 ST9-t899 SCCmecIVb/PFGE A (70.0%, 14/20)。在 MSSA 分離株中，ST9-t899/PFGE A 最為普遍(27.6%)，均與本文結(jié)果相近[23]，說(shuō)明青島地區(qū)家禽源金黃色葡萄球菌也是以t899型別為主的克隆傳播。但應(yīng)注意，部分型別僅在蛋雞(t010、t002、t3155)或肉雞(t571、t011)或水禽(t1793、t5268、t267)中分離到。

藥敏結(jié)果顯示， MSSA對(duì)多種藥物顯示出高水平耐藥， MSRA更甚。二者對(duì)青霉素、紅霉素、喹諾酮類藥物(恩諾沙星、氧氟沙星)耐藥率均已超過(guò)80%。三種家禽來(lái)源中，肉雞來(lái)源的菌株對(duì)克林霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、氟苯尼考、替米考星的敏感性低于其余兩種來(lái)源，蛋雞來(lái)源的菌株對(duì)泰妙菌素、慶大霉素的敏感性低于其余兩種來(lái)源，水禽對(duì)頭孢類藥物(頭孢噻呋、頭孢西丁)、苯唑西林的敏感性低于其余兩種來(lái)源，因此，在臨床用藥的選擇上，對(duì)不同家禽應(yīng)注意規(guī)避上述對(duì)應(yīng)低敏性藥物的使用。國(guó)內(nèi)有研究報(bào)道顯示，雞源金黃色葡萄球菌對(duì)大多數(shù)抗生素具有耐藥性，其中對(duì)青霉素、紅霉素耐藥率較高，甚至接近于 100%[24]。本文結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)菌株對(duì)利奈唑胺、多西環(huán)素耐藥率較低，低于10%，且未發(fā)現(xiàn)萬(wàn)古霉素耐藥菌株。此結(jié)果與李淑敏[25]Nelisiwe Mkize[26]等人的研究結(jié)果相近。顏敏等采集了病鴨的關(guān)節(jié)滲出液、肝臟、脾臟組織，使用紙片擴(kuò)散法對(duì)分離的金黃色葡萄球菌進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示分離株對(duì)青霉素、鏈霉素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、林可霉素、克林霉素高度耐藥；對(duì)慶大霉素、四環(huán)素、卡那霉素、新霉素中度耐藥，對(duì)阿莫西林、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素、紅霉素、阿米卡星較為敏感，對(duì)米諾環(huán)素、頭孢拉定、頭孢噻肟高度敏感[27]，與本文結(jié)果略有差異。究其原因，可能由于不同養(yǎng)殖場(chǎng)具體用藥情況差異所致。因此，臨床使用抗生素藥物時(shí)應(yīng)減少青霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類、克林霉素等低敏性藥物的使用頻率。

本文研究結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌多重耐藥情況嚴(yán)重。MSSA和MRSA多重耐藥率分別高達(dá)91.75%、100%，耐藥重?cái)?shù)集中分布在6～8耐、9～10耐。林杰等的研究中顯示，雞源心肝脾組織分離到的金黃色葡萄球菌的絕大多數(shù)(73.9%)同時(shí)對(duì)5種以上抗生素耐藥，表現(xiàn)顯著的多重耐藥現(xiàn)象[28]，結(jié)果與本文相似。劉茜從安徽皖中地區(qū)采集的病禽肝臟組織中分離金黃色葡萄球菌并采用 K-B 法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示，耐藥重?cái)?shù)以5耐、6耐居多[29]，耐藥重?cái)?shù)略低于本文。值得注意的是，本文中MSSA和MRSA菌株均對(duì)多西環(huán)素的中介率較高，分別達(dá)到19.59%和82.35%，暗示二者對(duì)其的耐藥率在未來(lái)有上升的可能性。總的來(lái)說(shuō)，國(guó)內(nèi)外各研究中MSSA與MRSA耐藥及多重耐藥結(jié)果雖有出入，但均顯示二者對(duì)多種抗菌藥的耐藥情況嚴(yán)峻，多重耐藥菌株耐藥性上升，未來(lái)防控更加艱難，給養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展及公共衛(wèi)生問(wèn)題帶來(lái)巨大阻礙。

金黃色葡萄球菌在青島地區(qū)不同家禽中均有不同程度的分布，且分離菌株耐藥現(xiàn)象較為普遍，其中MRSA耐藥尤為嚴(yán)重，存在耐藥菌株傳播給人的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)人類健康具有安全隱患。耐藥菌株雖然呈現(xiàn)“型多面廣”的現(xiàn)象，但主要是以t899型別為主的克隆傳播，因此應(yīng)通過(guò)分子溯源技術(shù)深入了解各地區(qū)中金黃色葡萄球菌的流行趨勢(shì)，結(jié)合耐藥表型監(jiān)測(cè)，規(guī)范獸用抗菌藥的使用，為MSSA和MRSA的有效防控提供依據(jù)。

4 結(jié) 論

金黃色葡萄球菌(MSSA、MRSA)在青島地區(qū)家禽中分布較為廣泛，且在不同家禽中的攜帶情況存在差異，水禽攜帶MSSA和MRSA的現(xiàn)象較其它兩種家禽更為普遍；MSSA和MRSA均是以t899為主的克隆傳播；青島禽源金黃色葡萄球菌對(duì)多種抗菌藥普遍耐藥，且MRSA較MSSA耐藥更為嚴(yán)重，均為多重耐藥菌株。綜上所述，應(yīng)加強(qiáng)家禽養(yǎng)殖過(guò)程中耐藥菌株的流行病學(xué)調(diào)查與分析，規(guī)范獸用抗菌藥的合理使用與監(jiān)管，以有效遏制耐藥菌株的產(chǎn)生與傳播。