自殺未遂患者外周血NR3C1基因單核苷酸多態性與壓力性生活事件的交互作用

周艷華，陸奕彬，瞿銘，黃繽慧，張琳娜，褚成靜

1 廣東醫科大學人文管理學院應用心理學系，廣東 東莞 523808；2 東莞市第七人民醫院精神科；3 伊犁哈薩克自治州奎屯醫院精神衛生科；4 廣東理工職業學院文法系；5 廣州醫科大學附屬腦科醫院精神科

自殺行為已成為嚴重的公共衛生問題。在15～33歲個體中，自殺死亡成為死亡原因的第一位［1］。自殺行為有一定的遺傳基礎。糖皮質激素受體（NR3C1）基因作為抑郁癥和自殺行為相關的候選基因引起學者廣泛關注。NR3C1基因位于5q23染色體上，編碼的糖皮質激素受體（GR）是維持下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸應激系統功能穩定的關鍵因素，HPA軸功能紊亂是抑郁癥和自殺行為的重要生化改變之一［2-3］。遺傳和環境因素之間存在復雜的交互作用，環境因素會增加抑郁癥和自殺行為發生的風險［4-5］。基因和環境因素交互作用是目前研究自殺機制的重點［6］，關于環境因素與NR3C1基因的交互作用研究國內少有報道。本研究擬通過探討NR3C1潛在的功能性單核苷酸多態性（SNP）位點與自殺行為的關系，以及采用多因子降維法對NR3C1基因SNP和壓力性生活事件進行交互作用分析，探索自殺行為的精神病理學機制，為自殺行為的發病機制研究且及時干預自殺行為提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2017 年3 月—2018 年8 月64例就診患者作為病例組，均因自殺未遂來廣東醫科大學附屬醫院心理科、東莞市精神衛生中心及奎屯市伊犁州奎屯醫院就診。納入標準：至少有1 次自殺未遂行為，排除自殺意念；年齡14～50 歲；文化水平要求小學以上，能正常書面表達和溝通交流；自愿加入研究者。排除標準：有重大軀體疾病和腦器質性疾病患者；嚴重精神疾病如躁狂癥患者；有藥物濫用史者；孕期、哺乳期女性。以同期身體心理健康者49 例作為對照組，無家族自殺史、物質依賴及重大軀體、精神疾病。兩組均知情同意；本研究獲得廣東醫科大學附屬醫院倫理委員會的批準（PJ2012134）。

1.2 一般資料收集 收集兩組的以下資料：性別、年齡、家庭關系、文化程度、婚姻狀況等。

1.3 生活壓力評估［7］采用生活事件量表（LES）評估實驗對象1 年內環境的生活事件刺激，包括家庭生活、工作學習、社交等。實驗對象根據自身實際感受判斷事件的影響程度，影響持續時間（3個月、6個月、1 年、1 年以上，分別計1、2、3、4 分），壓力性生活事件總和=正性生活事件刺激量+負性生活事件刺激量。分值越高，說明個體所遭受生活環境壓力越大，以樣本中75%百分位（27 分）用作中度和重度水平分組的臨界值，納入后續研究。

1.4 NR3C1基因SNP分析 位點的選擇：根據公共數據庫（http：//www. ncbi. nlm. gov/sites/enrrez）和HapMap數據庫（http：//www.hapmap.org），對中國北京漢族人進行標簽SNP的選擇；參數設置：最小等位基因頻率＞0.05，決定系數（r2）＞0.8，對NR3C1基因進行標簽SNP 篩選，得出潛在功能性SNP 位點。并且結合國內外文獻得出5個潛在的功能性SNP位點，即rs10052957、rs9324924、rs41423247、rs6191、rs6196。基因分型：取外周靜脈血1 mL，置于-80 ℃冷藏備用，用TIANamp Blood DNA Kit 試劑盒（天根生化科技有限公司）提取DNA。用Snapshot 技術對SNP 進行基因型分型，基于熒光標記單堿基延伸鏈終止反應原理對基因進行分型。PCR 引物用設計軟件Primer 3 online version 0.4.0設計，由中國北京東勝創新生物科技有限公司合成。PCR 反應體系：模板DNA 1～2 μL、10倍緩沖液0.5 μL，Taq酶1.25 U，上下游引物各1 μL。擴增條件：95 ℃預變性2 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火90 s，65 ℃延伸30 s，65 ℃延伸10 min，共循環40次。4 ℃保存。用美國ABI公司3730XL基因測序儀，用熒光標記單堿基延伸鏈終止法進行PCR 產物測序。

1.5 統計學方法 采用SPSS25.0統計軟件。符合正態分布的計量資料以±s表示，兩組比較采用t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗；非正態分布計量資料以M（P25，P75）表示，兩組比較采用Mann Whitney 檢驗。基因位點SNP 的Hardy-Weinberg 平衡吻合度用在線統計軟件SNP Stats（https：//www.SNPtats.net/）進行檢驗；基因-環境之間的交互作用用GMDR0.7軟件進行分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 兩組性別、年齡、婚姻狀況比較差異無統計學意義（P均＞0.05），家庭關系、文化程度、壓力性生活事件評分比較差異有統計學意義（P均＜0.05）。見表1。

表1 病例組與對照組人口學資料和生活事件得分比較

2.2 兩組NR3C1基因型與等位基因分布比較 兩組NR3C1 基 因5 個SNP 位 點rs9324924、rs10052957、rs41423247、rs6191、rs6196 的基因型均符合Hardy-Weinberg 平衡定律（P均＞0.05）。兩組NR3C1 基因SNP位點rs10052957、rs41423247、rs6191、rs6196的基因型頻率、等位基因型頻率分布比較差異無統計學意義（P均＞0.05）；兩組rs9324924的基因型頻率、等位基因頻率分布差異有統計學意義（P均＜0.05），Bonferroni法校正后差異無統計學意義（P均＞0.05）。見表2、3。

表2 兩組基因型頻率分布比較［例（%）］

2.3 兩組SNP 位點基因型與自殺未遂行為的關聯 使用SNP stats在線軟件對NR3C1基因的5個SNP等位基因在不同遺傳模型［共顯性模型（MM vs mm vs Mm）、顯性模型（MM vs Mm+Nm）、隱性模型（mm vs Mm+Mm）、超顯性模型（MM+mm vs Mm）以及累加模型（MM vs Mm+mm vs mm），M為主要等位基因，m為次要等位基因］下與自殺未遂行為的關系。rs9324924位點SNP與自殺未遂存在關聯，在隱性模型下，rs9324924位點的T/T基因型可以降低自殺行為易感性（OR=0.19，95%CI：0.04～0.87，P＜0.05），見表4。

表3 兩組等位基因頻率分布比較［例（%）］

表4 兩組校正了文化程度與家庭情況后SNP位點基因型與自殺未遂行為的關聯［例（%）］

2.4 NR3C1基因SNP與壓力性生活事件的交互作用分析 GMDR 分析結果顯示二階模型差異有統計學意義（P＜0.05）。NR3C1 基因rs9324924 位點與壓力性生活事件的二階模型是預測自殺風險的最佳模型（P＜0.05），交叉驗證一致性為10/10，檢驗樣本準確率最高0.646 0，見表5。在高生活壓力下，攜帶GG 和GT基因型的個體發生自殺行為的風險高于TT基因型攜帶者，提示NR3C1基因rs9324924位點的G基因型與高生活壓力的交互作用會增加自殺風險，見圖1。

圖1 NR3C1基因rs9324924位點與生活事件最佳模型單元格

表5 基因環境交互模型

3 討論

NR3C1 基因SNP 與情緒障礙、自殺行為等精神疾病相關［8］，研究認為GR 表達異常是抑郁癥以及自殺行為的病理基礎［9］。NR3C1基因有助于個體在面對急性壓力時，提高GR 對皮質醇的敏感性，維持HPA 軸的負反饋功能穩定。因此，NR3C1 基因表達上調對個體急性應激條件下維持HPA 軸功能至關重要。

本研究在簡單基因關聯分析中發現，rs9324924位點SNP 與自殺行為相關，這與相關研究［10］結果一致。值得注意的是，經過Bonferroni法校正后這種關聯均不顯著。隨后從多種基因模式角度下進行關聯分析，發現NR3C1 基因rs9324924 位點G 等位基因攜帶者與自殺行為有關。隱性模型下，NR3C1 基因的TT基因型顯示為自殺行為的保護因素，間接反映rs9324924 位點G 等位基因攜帶者增加了自殺風險。這與既往研究［11］發現rs9324924 的G 等位基因比T等位基因的個體更易發生糖皮質激素抵抗一致。但尹紅蕾［12］研究發現，rs9324924位點SNP 與抑郁癥無關；也有研究認為rs9324924位點SNP與自殺行為相關。結果不一致可能與疾病發生的年齡、地區、環境等不同有關。

大多觀點認為自殺未遂行為的發生是遺傳、環境因素共同作用的結果。本研究將NR3C1 基因與自殺行為的主要危險因素做了交互作用分析。GMDR 模型顯示，NR3C1 基因rs9324924 位點與壓力性生活事件的二階模型是預測自殺風險的最佳模型，NR3C1 基因rs9324924 的G 等位基因與高生活壓力相互作用，增加了自殺風險。由此提示rs9324924與壓力性生活事件之間的交互作用可能與自殺未遂風險有關。經歷早期壓力性事件后，NR3C1 基因變異個體更易發生抑郁癥等情緒障礙相關精神疾病［13］，與復雜疾病的基因-環境交互作用理論是一致的。

由于國內外對于NR3C1 基因rs9324924 位點SNP 與自殺發生風險關聯研究報道較少，且結果不一致，本研究有關NR3C1 基因rs9324924 位點與環境因素交互分析結果雖然顯著，但受樣本量的限制，其與自殺未遂的關系未來還需進一步研究加以證實。自殺未遂行為受環境、遺傳、心理等因素的多重影響，加強青少年心理健康教育，學會正確應對環境中的壓力，倡導正確的生活觀，對自殺行為的預防和發現有重要意義。