免疫組化質量控制管理在胃腸道腫瘤病理診斷中的應用價值

張羽

（遼陽市中心醫院 病理科，遼寧 遼陽 111000）

胃腸道腫瘤是目前國內外發病率和病死率均較高的惡性腫瘤之一，且患者通常對于放化療并不敏感，多需通過手術治療[1]。早期臨床診斷對于治療方案確定和預后改善具有重要意義。胃腸纖維鏡和胃腸道造影等傳統胃腸道疾病診斷法雖然是臨床疾病診斷中常用的輔助診斷技術，但其仍屬于侵入性操作，患者耐受性差，且存在一定誤診和漏診現象[2-3]。超聲診斷屬于無創性輔助診斷方法，在胃腸道疾病的定位診斷中準確性良好，但在病理分型和分期等定性診斷中仍存在一定缺陷[4]。近年來，隨著各類腫瘤發病率的升高，病理診斷工作逐漸引起了人們的重視。免疫組化病理診斷屬于一種經典病理診斷技術，該方法在病理診斷中的應用效果已經得到了明確證實[5]。研究表明，質量控制方式的不同，容易影響病理診斷的效率及可靠性[6]。質量管理控制以提高質量為目標，為驗證該方法的價值，本研究主要針對103例胃腸道腫瘤患者進行如下分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年8月至2019年10月在遼陽市中心醫院病理科接受病理檢查的103例胃腸道腫瘤患者為研究對象。按照隨機硬幣拋擲法將納入者分為對照組（51例）和控制組（52例）。對照組男28例，女23例；年齡22～71歲，平均（45.08±11.11）歲；病灶位置：胃竇部位30例，胃體5例，賁門部位5例，回盲處7例，乙狀結腸2例，全胃浸潤2例；病理分型：未分化癌變23例，惡性淋巴瘤17例，腫瘤來源未確定11例?？刂平M男29例，女23例；年齡30～74歲，平均（45.69±11.02）歲；病灶位置：胃竇部位28例，胃體8例，賁門部位5例，回盲處5例，乙狀結腸4例，全胃浸潤2例；病理分型：未分化癌變26例，惡性淋巴瘤15例，腫瘤來源未確定11例。兩組納入者上述人口學和疾病相關資料分布間差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 納入和排除標準 納入者經臨床診斷和病理學檢查確診；臨床資料完整；明確研究相關內容和目的，同意簽署協議書；同時排除合并全身感染性疾病或免疫系統或血液系統疾病，依從性差，無法獲取病病理組織者。本研究已獲得我院倫理委員會的批準。

1.3 方法 對照組實施常規HE染色管理：①制備腫瘤標本。參照胃腸道腫瘤患者的影像學檢查結果，于胃腸道腫瘤患者胸腹部適宜位置作一切口，切除腫瘤組織，以備后續病理檢查。②固定。將胃腸道腫瘤組織標本置于冰箱內低溫儲存。進行病理診斷時，取出腫瘤組織標本，將其完全浸潤于10%濃度的中性甲醛溶液中，持續固定4 h。③脫水。分別將固定后的腫瘤組織標本浸潤于AF液、75%濃度乙醇溶液、80%濃度乙醇溶液及90%濃度乙醇溶液、95%濃度乙醇溶液、100%無水乙醇溶液中進行脫水處理。每個脫水環節的脫水時間控制為1 h。④染色。將脫水后的腫瘤組織標本分別浸潤于二甲苯（Ⅰ）、二甲苯（Ⅱ）溶液中，分別浸泡20 min、30 min。隨后于60 ℃條件下，以醋缸（Ⅰ）、醋缸（Ⅱ）分別進行浸泡（浸泡時間為1 h）。經上述處理后，將染色后的腫瘤標本置于60 ℃烤箱內，持續烤片2 h。

控制組實施免疫組化質量控制管理：①制備腫瘤標本。按照對照組方法，制備腫瘤標本。②固定。將腫瘤組織浸潤于足量10%濃度中性福爾馬林溶液中，持續固定8～12 h。③脫水、浸蠟。常規采用不同濃度乙醇進行脫水處理，組織脫水后，浸蠟，并進行石蠟包埋。④切片。選用LeicaRM2235型號切片機，參照4 μm厚度標準針對組織塊進行連續切片處理。⑤脫蠟。采用適量二甲苯（Ⅰ）中持續脫蠟5 min；取適量二甲苯（Ⅱ）中持續脫蠟5min；浸潤于無水乙醇（100%）溶液內水洗2 min；改用95%濃度乙醇持續水洗1 min；采用80%濃度乙醇水洗1 min；選用75%濃度乙醇水洗1 min；最后將經處理的組織塊浸潤于足量蒸餾水內，持續水洗2 min（每環節各2次，以確保水分充分吸干）。⑥染色。分別經雙氧水、檸檬酸緩沖液處理切片。加熱后，向量杯內切片滴加一抗，于40 ℃溫度下進行孵育。經磷酸鹽緩沖液再次處理后，于室溫下滴加二抗并孵育15 min。利用蘇木素針對切片進行染色處理，染色后以清水沖洗表面的殘留蘇木素。吸干水分后，利用鹽酸乙醇進行分化處理（0.5 min）。將染色后的切片置于50 ℃溫水中浸泡5 min后取出吸干表面水分。隨后將切片置于伊紅液內留置2 min。最后經常規脫水處理后［流程為：95%乙醇（Ⅰ）中脫水1 min、95%乙醇（Ⅱ）中脫水1 min、100%乙醇（Ⅰ）中脫水1 min、100%乙醇脫水1 min、二甲苯石碳酸處理1 min、二甲苯Ⅰ處理1 min、二甲苯（Ⅱ）中處理1 min］，以中性樹脂進行封片。

1.4 評價方法 切片質量評價標準：切片質量良好：細胞核漿對比鮮明，色彩鮮亮，染色均勻，厚薄適宜；切片質量合格：色彩較為清晰，可區別核漿，無氣泡，可有少數褶皺；切片質量不合格：染色濃厚，核漿對比不明顯，存在較多氣泡或褶皺[7]。

1.5 統計學方法 以SPSS21.0軟件統計。計數資料以[n（%）]描述，組間比較選擇χ2檢驗；計量資料描述用（），組間比較用獨立樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組標本質量合格情況比較 控制組的標本質量總體合格率（96.15%）顯著高于對照組（82.35%）（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組標本質量的合格率比較[n（%）]

2.2 兩組病理診斷效率比較 控制組的病理診斷耗時明顯短于對照組［（12.06±2.30）hvs.（17.42±3.18）h］，差異顯著（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組病理診斷效率的比較（h，）

表2 兩組病理診斷效率的比較（h，）

3 討論

病理診斷是一類重要的診斷技術，這種診斷方法的基本原理為：采集患者的病理組織制成標本，經標本染色處理后，置于顯微鏡下觀察細胞形態、大小等狀況，獲得較為可靠的診斷結果[8]。根據既往病理診斷經驗，在診斷過程中，標本處理方法及質量控制方式的選擇，均會影響診斷工作效率及準確性[9]。

常規HE染色管理與免疫組化質量控制管理是目前臨床診斷工作常用的兩種診斷方法。常規HE染色管理方法的特征為：采用HE染色法針對組織標本進行染色，同時按照常規管理模式，確保病理診斷工作的順利完成[10-11]。常規HE染色在乳腺癌[12]、胃癌[13]等腫瘤中的診斷價值，已經得到了明確證實。而免疫組化質量控制管理方法是將免疫組化病理檢查作為中心，利用質量控制管理模式提供良好的輔助作用，以保障免疫組化病理檢查價值的充分發揮。特征為：采集腫瘤組織標本后，按照固定、脫水等流程將其制成組織塊，切片后，利用免疫組化技術進行處理，最后以蘇木素針對處理后的組織切片進行染色[14]。在病理診斷中，免疫組化質量控制管理方法的應用，可充分保障切片處理質量[15]。

隨著免疫組化病理檢查方法的普及，免疫組化病理檢查期間的質量控制管理工作逐漸成為人們的重點。應用優勢在于：①確保切片質量。切片質量是影響病理診斷方法價值的主要因素。以常規HE染色法處理病理組織標本，并運用常規管理模式進行管理，所得切片質量尚可。但部分病理組織切片容易出現質量問題，原因在于[16]：①常規管理模式未對診斷過程中的固定時間、烤片操作等做強制要求，導致病理診斷中容易出現固定時間不足（影響固定效果）、烤片效果不佳等問題，進而影響切片質量。而引入免疫組化質量控制管理方法后，質量控制管理模式則可為免疫組化病理檢查提供良好的配合，即嚴格按照福爾馬林固定（8～10 h）、脫蠟（以二甲苯及不同濃度乙醇進行處理）、染色處理流程，制備切片。這一方法的良好質控作用，可充分保障切片質量。本研究證實：控制組標本質量總合格率96.15%，高于對照組（P＜0.05）。②提高診斷效率。相對于影像學檢查技術而言，病理診斷的耗時較長。采用常規HE染色管理方法處理腫瘤組織標本，容易受固定時間不足、染色不充分、染色背景濃厚等，而影響切片質量，進而影響病理診斷結果的準確性。當利用常規HE染色管理法制備的切片置于顯微鏡下觀察時，可能因切片質量不佳，而需要重新制備切片。這一操作也會導致診斷耗時過長，從而影響病理診斷工作的效率。選用免疫組化質量控制管理方法進行診斷時，質量控制管理標準對免疫組化病理檢查各環節的操作標準及時長均提出了明確的要求，按照上述要求規范開展免疫組化檢查，可確保病理檢查工作的順利完成，由此可認為，該方法在提升病理診斷效率方面具有一定優勢。本研究證實：控制組病理診斷耗時短于對照組（P＜0.05）。

在運用免疫組化病理技術進行診斷時，需注意合理把控質量控制管理要點，具體如下：①病理組織的制備及處理。這是免疫組化病理診斷的基礎環節，也是影響診斷工作效率及最終診斷結果的關鍵所在[7]。為保障病理組織的處理質量，需結合術前影像學檢查結果，合理選擇切口，并切除適宜大小的病理組織，制備病理組織標本。此外，根據既往病理檢查經驗，病理檢查以病理組織中的細胞為觀察重點，如未能合理儲存病理標本或及時送檢，組織細胞的形態學可能會出現一定變化，進而影響診斷結果的可靠性。對此，在運用質量控制管理方法進行干預時，應注意將采集的病理組織標本置于冰箱內儲存，避免污染，并盡量于采集標本后較短時間內送檢，以減少因病理組織細胞形態學改變引發的不良和后果[17]。②標本固定處理。新鮮組織標本的細胞中含有大量水解酶，隨著新鮮組織標本留置時間的延長，組織中的細胞逐漸處于缺氧狀態，此時，內部的水解酶會發揮水解作用，誘導細胞內的蛋白質分解，造成組織自溶[18]。為了避免出現上述狀況，在質量控制管理工作中，病理組織標本制備完成后，需盡快將其浸潤于中性固定液中，以抑制細胞缺氧、水解酶帶來的不良影響。③合理把控染色效果。免疫組化病理檢查多采用蘇木素進行染色[19]。在染色處理中，需注意把控染色效果，確定切片染色成功后，方可進行后續操作。

為了充分發揮免疫組化病理技術的價值，保障病理診斷質量，在后續質量控制管理工作中，應將以下幾種技術應用于實踐管理工作中：①試劑管理。免疫組化病理檢查中需要的試劑類型較多，如中性福爾馬林溶液、二甲苯溶液、乙醇溶液等。當相關試劑出現質量問題，可能會影響免疫組化病理檢查工作的效率，甚至影響診斷結果的準確性[20]。為保障免疫組化病理檢查結果的可靠性，需定期檢查各類試劑質量，及時更換新試劑（避免使用過期試劑）。在檢查試劑時，重點檢查試劑保存狀況，判斷有無揮發、滲漏問題，以防因試劑濃度改變而影響病理診斷結果的準確性。②脫水、脫蠟操作質量把控。脫水環節與脫蠟環節類似，均需經不同濃度乙醇處理標本。在針對切片進行脫水、脫蠟處理時，需注意嚴格參照不同乙醇濃度的排列順序，依次對切片進行脫水處理、脫蠟處理，以減少切片中的水分殘留，保障標本的脫蠟效果。③切片不合格原因分析。相對于常規HE染色而言，免疫組化病理檢查與質量控制管理方法聯用，在提升切片質量方面具有一定優勢。但在實踐病理診斷工作中，仍有部分切片會出現質量不合格問題。為了避免由切片質量不合格引發的不必要耗時，需結合免疫組化病理診斷經驗，從多個方面，綜合分析切片質量不合格的原因，以便根據切片質量不合格的原因，重新優化質量控制管理方案，以保障切片質量。④診斷結果管理。在重視切片質量的基礎上，統計免疫組化病理診斷結果的準確性，將誤診、漏診的切片作為重點，分析診斷結果與切片質量、免疫組化病理診斷流程之間的關聯，明確誤診、漏診的原因。如確定漏診、誤診與檢驗過程有關，需結合相關原因，進一步優化質量控制管理方案，以提升免疫組化病理診斷結果的準確性。

綜上所述，在胃腸道腫瘤免疫組化病理診斷中，宜推行免疫組化質量控制管理，以保障標本質量，減少重新制片的發生，提升病理診斷工作的效率，為疾病及早治療和預后改善提供更為及時準確的依據。