外周血結核感染T細胞斑點試驗對活動性結核的診斷價值

徐 楊 寧 麗 尹航賢

（大連市友誼醫院，遼寧 大連 116001）

結核病是由結核桿菌引起的慢性傳染病，是我國重點控制的疾病類型，在我國的發病率較高，位于全球第2位。早發現、早治療是結核病控制的關鍵。當前臨床診斷結核病的相關技術都在不斷升級，為提高臨床診斷價值，為早期治療提供有效依據，還需要重視新技術的應用[1]。外周血結核感染T細胞斑點試驗是以高靈敏度的酶聯免疫斑點技術為檢驗措施，檢驗結核分歧桿菌感染情況的新技術。該技術為活動性結核的早期診斷提供了新的技術支持與檢驗方向，為研究外周血結核感染T細胞斑點試驗在活動性結核臨床檢驗方法的診斷價值[2-3]。本研究以我院檢驗科2018年5月至2019年5月收治的疑似結核病患者50例為研究對象進行試驗，詳細報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院檢驗科2018年5月至2019年5月收治的疑似結核病患者50例對研究對象，對患者進行試驗研究。將患者以隨機分組法分為試驗組與對照組。試驗組患者男性13例，女性12例，平均年齡為（43.80±5.30）歲，患者平均病程為7 d～3個月。對照組患者男性12例，女性13例，平均年齡為（44.50±6.10）歲，患者平均病程為7 d～3個月。試驗組患者中發熱待查的患者18例，肺部感染性病變患者6例，腹腔積液患者7例。對照組患者中發熱待查的患者15例，肺部感染性病變患者9例，腹腔積液患者6例。兩組患者的性別、年齡、病程等一般資料差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 納入與排除標準 納入標準：患者自愿參與本次試驗研究，了解試驗研究目的與內容，簽署同意書；患者經過臨床診斷確認為結核病；患者未感染其他傳染性疾病，不對試驗研究形成影響。排除標準：抗結核治療無效；非結核性疾病；具有認知障礙或精神疾病、家族遺傳病史。

1.3 方法 試驗組患者接受外周血結合感染T細胞斑點試驗，通過對患者外周靜脈采血的方式，采集患者血液5 mL，從患者血液中分離外周單個核細胞，并添加陽性細胞培養液、植物血凝素、分泌靶細胞抗原于微量板孔中，送入培養箱孵育2 h，于2 h后洗脫PBS，并進行顯色處理，通過放大計斑點樹木的方式，進行檢出率分析與判斷。其中，計數孔點數大于陰性對照2倍的為陽性，或計數孔點數多出陰性對照5個點的為陽性。對照組患者接受結核干擾素酶免檢驗，取新鮮采集肝素鈉抗凝血8 mL，放置6 h后加入刺激物，后于4 ℃冰箱內放置過夜，隔天取出，在取出的培養物中置入發光底物液，對培養物進行光分析，在發光底物液置入后5 min時讀取培養物的發光強度，記錄數據。

1.4 觀察指標 通過對試驗組患者與對照組患者的試驗研究，收集試驗指標指數，對比兩組患者的敏感度、特異度、準確度、動脈血壓變異率（PPV）、NPV、LR+、LR-指標。

1.5 統計學方法 采用SPSS 20.0統計學軟件對數據進行分析。計量資料采用（）表示，組間比較行t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

試驗組即以外周血結核感染T細胞斑點試驗患者在檢驗敏感度上為87.9%，特異度為84.1%，PPV、NPV指標分別為73.8%、94.9%，準確度達84.2%，LR+為（6.10±0.31），LR-為（0.13±0.30）；對照組即以結核干擾素酶免試驗的患者在檢驗敏感度上為57.9%，特異度為57.3%，PPV、NPV指標分別為42.5%、74.9%，準確度達59.2%，LR+為（1.59±0.29），LR-為（0.68±2.31）。經對比發現，試驗組檢驗指標明顯優于對照組檢驗指標，且兩組指標間數據差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

結核病作為慢性傳染病，具有傳染性，若患者未及時接受治療，將造成結核桿菌的耐藥性，難以治愈，并危及生命[4]。在結核病發病早期，采用不同的診斷方法得到的診斷效果也是不同的。為了提高臨床診斷的價值，需要在結核病的診斷措施中不斷優化與完善[5]。以外周血結核感染T細胞斑點試驗進行活動性結核的臨床診斷是一種新的技術，其通過在外周血標本中的檢測對機體感染結核桿菌后分泌干擾素的T淋巴細胞水平來判斷機體是否感染結核桿菌[6]。其技術原理如下：結核分歧桿菌在侵入并感染人體后，首先會被機體非特異度抗體的第2道防線中吞噬細胞吞噬，但吞噬細胞不能完全清除結核分歧桿菌，在吞噬細胞凋亡后將釋放出大量的特異度抗原，激發機體的特異度免疫，結核分歧桿菌特異度抗原刺激特異度免疫中的T細胞，造成T細胞致敏，同時激活并釋放大量的γ干擾素[7]。在臨床醫學診斷中，將結核抗原刺激下特異度分泌γ干擾素的T細胞為檢驗標志物，能夠形成對結核分歧桿菌感染的認識，具體是通過檢測外周血中受結核分歧桿菌特異度抗原刺激后分泌γ干擾素的T淋巴細胞水平判斷機體是否感染結核分歧桿菌[8]。

為分析外周血結核感染T細胞斑點試驗對活動性結核的臨床診斷價值，本文通過試驗研究的方式，對比外周血結核感染T細胞斑點試驗與結核干擾素酶免試驗，通過試驗的對比與分析發現，以外周血結核感染T細胞斑點試驗進行試驗研究的患者在采集的數據上明顯由于干擾素酶免試驗的患者數據[9]。外周血結核感染T細胞斑點試驗在活動性結核的臨床診斷中具有較高的敏感度，特別是患者自身機體的免疫狀態對外周血結核感染T細胞斑點試驗形成影響較少，即使患者接種過卡介苗也不形成明顯的影響[10-11]。通過外周血結核感染T細胞斑點試驗能夠檢驗患者的活動性肺結核、腹腔結核、免疫抑制結核等癥狀，在臨床檢驗上速度較快，效率較高，一般在檢驗后24 h即可得出結果，所以將外周血結核感染T細胞斑點試驗應用于活動性結核的早期診斷中是具有較高的臨床診斷價值的，其能夠更早的發現患者的結核病情況[12]。

為進一步分析外周血結核感染T細胞斑點試驗在活動性結核的臨床診斷價值，從其優劣勢中進行深入探討：①從外周血結核感染T細胞斑點試驗的優點上來分析，其診斷的速度快，能夠在診斷后的24 h出診斷報告，便于臨床診斷研究與分析；其能夠檢測的結核病類型多，應用較為廣泛，可以應用于活動性肺結核、肺外結核、結核性漿膜炎、免疫抑制結核患者中，都能夠形成有效的診斷與分析報告；其臨床診斷的靈敏度較高，能夠對結核病患者的結核分歧桿菌狀態形成具體認識，具有較高的特異度，不受患者是否接種卡介苗的影響或環境分歧桿菌的影響，在診斷準確率上較高，且不受患者機體免疫狀態的影響；通過檢驗能夠形成療效的評估，在患者接受結核病治療后，再次進行外周血結核感染T細胞斑點試驗，若患者T細胞斑點數目減少或呈陰性，這表示為患者接受的治療有實際效果，能夠為患者治療情況形成有效評價[13]。②外周血結核感染T細胞斑點試驗也具有一定的不足，由于該技術的產生不久，在技術流程上還相對繁瑣，技術應用的成本較高，并且對于實驗室技術與操作水平的要求較高。如在試驗用的標本上，需要室溫保存與運輸血液樣本過程中都能夠保持溫度在18～25 ℃，不能進行冷凍或冷藏處理，且患者的血液樣品采集后8 h內需要完成檢測工作，超時則不具有檢測價值；另外，當前以外周血結核感染T細胞斑點試驗進行臨床試驗的數據還較為缺乏，難以形成有效的數據對比效果，在數據分析上缺少依據。所以在外周血結核感染T細胞斑點試驗的臨床應用中還需要與其他檢測進行聯合檢測與判斷，臨床上以外周血結核感染T細胞斑點試驗檢驗為陰性結果的也不能夠直接排除暴露或感染結核桿菌的可能性；再者，外周血結核感染T細胞斑點試驗還無法高質量的鑒別結核病的活動性與潛伏性，當前并無統一的界值能夠用于潛伏結核感染與活動性肺結核中，所以存在一定的不確定性因素；最重要的是，外周血結核感染T細胞斑點試驗不能夠確定患者的病變部位，所以在檢驗的針對性上還不強，需要加以技術完善與改進[14-15]。

但不可忽視的是，結核病的預防對于結核病患者生活質量的改善與身體功能的早期調節具有積極的意義。外周血結核感染T細胞斑點試驗在活動性結核的臨床診斷上具有一定價值，能夠在結核病患者早期發病周期內準確的提供患者感染結核雙歧桿菌的依據，幫助患者積極的控制病情，以利于降低患者受結核病影響的概率，有效控制結核病患者病死率。外周血結核感染T細胞斑點試驗作為一種新的檢驗技術，在結核雙歧桿菌的檢測上具有良好檢驗優勢，其應用酶聯免疫學的技術基礎形成檢驗，在敏感度與特異度上較早期的PPD試驗都有所提高，在試驗檢測的效率上也更高，針對于早期結核病患者的診斷價值更高[16]。相關報道發現，在臨床癥狀較為不典型的結核病患者中，以PPD檢測診斷難以形成較好診斷效果時，通過外周血結核感染T細胞斑點試驗能夠幫助確診結核病感染情況。這說明，外周血結核感染T細胞斑點試驗作為一種新的檢驗技術，其在結核病的檢驗上具有一定技術優勢，應用于活動性結核的早期診斷上能夠提高早期診斷的科學性，形成較高的臨床診斷價值[17]。

總的來說，以外周血結核感染T細胞斑點試驗對活動性結核進行臨床診斷，其具有技術優勢，在試驗數據的準確性上較高，且試驗數據報告的出具較快。該試驗技術具有較強的靈敏度與特異度，形成了以傳統檢驗技術的明顯對比，能夠為結核病患者的早期診斷提供有力依據。盡管外周血結核感染T細胞斑點試驗具有流程繁瑣、成本較高等不足，但在活動性結核的臨床診斷中依舊是具有較高的診斷價值，其能夠提高對結核病患者早期診斷的效率，從而為患者及時治療，減輕患者病痛，提高治療質量。