血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2與慢性乙型病毒性肝炎患者HBV-DNA載量、肝功能及肝纖維化標志物的相關性分析

劉俊香，畢泗朕

1.山東省濱州市中醫醫院檢驗科，山東濱州 256600；2.山東省濟南市平陰縣中醫醫院檢驗科，山東濟南 250400

慢性乙型病毒性肝炎(CHB)主要是指因乙型肝炎病毒(HBV)感染引發的一種慢性感染性肝病，如不予以及時、有效的治療，可能進展成肝纖維化，最終導致肝硬化甚至肝癌的發生[1-2]。HBV-脫氧核糖核酸(HBV-DNA)載量、肝功能及肝纖維化標志物均是目前臨床上用來診斷CHB以及評估病情嚴重程度的重要指標[3-4]。然而，HBV-DNA載量檢查費用較高，肝功能指標則存在特異度及靈敏度不高的缺陷，肝纖維化標志物無法對CHB實施早期診斷。因此，尋求更為經濟、可靠的生物學指標實現對CHB病情的評估以及肝纖維化的判定具有極其重要的意義。高爾基體蛋白73(GP73)是廣泛存在于高爾基體的跨膜蛋白之一，與肝癌的發生密切相關[5-6]。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是一種具備免疫調控功能的細胞因子，可用來評估肝臟損傷程度[7-8]。纖維蛋白原樣蛋白1(FLP1)屬于特異性促肝增殖因子之一，在肝細胞增殖以及肝保護過程中起著至關重要的作用[9-10]。可溶性生長刺激表達基因2蛋白(sST2)可通過與白細胞介素(IL)-33結合，繼而介導系統性炎癥反應[11-12]。鑒于此，本文通過研究血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2與CHB患者HBV-DNA載量、肝功能及肝纖維化標志物的相關性，旨在為臨床診斷提供數據支持，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇濱州市中醫醫院2021年2月至2022年2月收治的166例CHB患者為研究對象。CHB患者中男104例，女62例；年齡34～78歲，平均(58.32±10.57)歲；病程1～16年，平均(6.12±1.30)年；體質量指數19～32 kg/m2，平均(23.19±2.10)kg/m2。納入標準：(1)所有患者的診斷均符合《慢性乙型肝炎防治指南：2010年版》[13]中所制定的相關診斷標準；(2)入組前12個月內未接受抗炎或(和)免疫抑制劑治療；(3)年齡18～80歲。排除標準：(1)心、肺等臟器功能嚴重障礙者；(2)神志異常或伴有精神疾病者；(3)合并器質性疾病者；(4)正參與其他研究者；(5)丙型或丁型病毒性肝炎者；(6)合并血液系統疾病、免疫系統疾病或惡性腫瘤者；(7)伴有可能對本研究結果產生影響的疾病者。另選取同期健康體檢人員60例作為健康對照組。健康對照組中男36例，女24例；年齡33～78歲，平均(58.41±10.62)歲。本研究所有受試者均已簽署知情同意書，濱州市中醫醫院醫學倫理委員會已批準本研究。

1.2方法 (1)HBV-DNA載量檢測：采集所有CHB患者的空腹靜脈血5 mL，進行離心處理(離心半徑10 cm，離心速率為3 000 r/min，離心10 min)，獲取血清保存備用。檢測方式為聚合酶鏈反應(PCR)結合熒光探針的體外擴增技術，首先進行DNA的提取，隨后遵循試劑盒說明書完成相關操作。相關試劑盒購自廣州中山大學達安基因股份有限公司。其中上游引物序列為5′-ATCCTGCTGCTATGCCTCATCTT-3′，下游引物序列為5′-ACAGTGGGGAAAGCCCTACGAA-3′；探針引物序列：5′-TGGCTCAGTTTACTAGTGCCATTTG-3′。將所有患者根據HBV-DNA載量的差異分成低載量組(HBV-DNA載量≤105copy/mL)、中載量組(HBV-DNA載量在>105～107copy/mL)、高載量組(HBV-DNA載量>107copy/mL)。(2)血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2檢測：分別于所有患者入院后翌日、健康體檢人員體檢當日采集清晨空腹靜脈血4 mL，離心處理(離心半徑10 cm，離心速率為3 000 r/min，離心10 min)后，獲取血清保存至-80 ℃冰箱中備用待檢。GP73、HMGB1、FLP1、sST2檢測方法均為酶聯免疫吸附試驗，按照試劑盒說明書進行操作，相關試劑盒購自美國Bio Rad公司。(3)肝功能檢測：相關指標有丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)以及γ-谷氨酰轉移酶(GGT)，采用全自動生化分析儀完成檢測。(4)肝纖維化標志物檢測：相關指標有透明質酸(HA)、層粘連蛋白(LN)及Ⅳ型膠原(CⅣ)，檢測方法均為放射免疫法，按照試劑盒說明書進行操作，相關試劑盒由北京泰格科信生物有限公司提供。

2 結 果

2.1各組血清GP73、HMGB1、FLP1以及sST2水平對比 根據HBV-DNA載量的差異將所有患者分為低載量組76例、中載量組50例、高載量組40例。低載量組、中載量組、高載量組血清GP73、HMGB1及sST2水平均高于健康對照組，且中載量組、高載量組血清GP73、HMGB1及sST2水平高于低載量組，高載量組血清GP73、HMGB1及sST2水平高于中載量組，差異均有統計學有意義(P<0.05)。低載量組、中載量組、高載量組血清FLP1水平均低于健康對照組，且中載量組、高載量組血清FLP1水平低于低載量組，高載量組血清FLP1水平低于中載量組，差異均有統計學有意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清GP73、HMGB1、FLP1以及sST2水平對比

2.2不同HBV-DNA載量組肝功能指標水平比較 中載量組、高載量組ALT、AST及GGT水平均高于低載量組，且高載量組ALT、AST及GGT水平高于中載量組，差異均有統計學有意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同HBV-DNA載量組肝功能指標水平對比

2.3不同HBV-DNA載量組HA、LN以及CⅣ水平對比 中載量組、高載量組HA、LN以及CⅣ水平均高于低載量組，且高載量組HA、LN以及CⅣ水平高于中載量組，差異均有統計學有意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同HBV-DNA載量組HA、LN以及CⅣ水平對比

2.4血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2與CHB患者HBV-DNA載量、肝功能指標及肝纖維化標志物的相關性分析 經Spearman/Pearson相關性分析可得：血清GP73、HMGB1、sST2與CHB患者HBV-DNA載量、ALT、AST、GGT、HA、LN、CⅣ水平均呈正相關(r>0，P<0.05)，而血清FLP1與CHB患者HBV-DNA載量、ALT、AST、GGT、HA、LN、CⅣ水平呈負相關(r<0，P<0.05)。見表4。

表4 血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2與CHB患者HBV-DNA載量、肝功能指標及肝纖維化標志物的相關性分析

3 討 論

HBV-DNA載量檢測是目前臨床應用較為廣泛的評價病毒復制活躍程度的指標之一，亦是CHB患者治療適應證以及評估療效的指標[14-16]。然而，該指標存在一定的局限性，加上部分患者出現HBV突變，從而難以獲得真實的病毒復制情況，降低了病毒載量檢查的特異度以及準確度[17-18]。因此，尋求一種更為準確、特異的無創性血清學標志物顯得尤為重要，亦是臨床研究的熱點。這在針對有明顯肝纖維化的CHB患者實施抗病毒治療中至關重要[19-20]，亦是減緩病情發展以及降低相關并發癥發生風險的關鍵，因此尋求可準確反映肝纖維化程度的生化指標具有極其重要的意義。

本文結果發現，CHB患者血清GP73、HMGB1、sST2水平均呈異常高表達，而FLP1水平呈異常低表達，且隨著HBV-DNA載量的增加，上述各項指標水平升高或降低。GP73主要是由400個氨基酸構成的相對分子質量約為73×103的Ⅱ型跨膜糖蛋白，正常情況下存在高爾基復合體上，且在正常肝臟中僅在膽管上皮細胞中表達，在肝臟發生損傷時，肝臟細胞和血清中的GP73水平異常升高[21-22]。HMGB1通路在機體內炎癥反應過程中具有促進炎癥反應的作用[23-24]。FLP1屬于肝源性生長因子之一，可促進正常肝細胞增殖，在機體內往往以同源二聚體的形式發揮自身局部促肝細胞增殖的活性[25-26]。sST2屬于白細胞介素(IL)-33的重要受體，在HBV感染時IL-33會被釋放至細胞外，繼而導致IL-4及IL-13等大量細胞因子分泌，進一步引起Th1/Th2的失衡，從而引起炎癥反應，加速肝臟功能損害[11,27]。其中侯麗娟等[28]的一項研究發現，血清sST2與CHB患者病情嚴重程度有關，這可為本研究結果提供佐證。此外，隨著CHB患者HBV-DNA載量的增加，患者的肝功能損傷程度以及肝纖維化程度加劇。分析其原因，HBV-DNA載量的增加往往反映了病毒復制程度的加劇，患者長期處于持續感染狀態之下，肝組織炎癥程度增加，繼而促進了病情進展[29]。隨著HBV-DNA載量的增加，CHB患者ALT、AST及GGT水平逐漸升高。分析其原因，可能是ALT、AST及GGT均是臨床上反映肝功能的生物學指標，隨著HBV-DNA載量的增加，肝臟受損程度加劇，繼而導致ALT、AST及GGT表達異常。與此同時，隨著HBV-DNA載量的增加，CHB患者肝纖維化程度加劇，這可能和HBV-DNA載量越高其活性越強有關，繼而對肝臟造成持續損害，促進了肝纖維化。另外，經Spearman/Pearson相關分析可得：血清GP73、HMGB1、sST2與ALT、AST、GGT、HA、LN、CⅣ均呈正相關，而血清FLP1和上述相關指標呈負相關。這提示了血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2可輔助評估CHB患者肝功能以及肝纖維化，同時也說明這4項指標在CHB患者病情發展過程中起著至關重要的作用。其中GP73、HMGB1、sST2均有一定的促進病情進展的作用，隨著其水平的升高，會加重HBV對肝功能的損害；而FLP1具有肝保護作用，可通過自分泌途徑刺激肝細胞增殖，因此在肝臟再生過程中其水平升高。由此推測，實際工作中可通過對血清GP73、HMGB1、sST2及FLP1水平進行聯合檢測，從而為CHB的診斷和病情判定提供參考依據。

綜上所述，CHB患者血清GP73、HMGB1、sST2水平均呈異常高表達，而FLP1水平呈異常低表達，且這4項血清學指標可有效評估CHB患者的HBV-DNA載量、肝功能和肝纖維化，繼而指導臨床CHB患者治療方案的制訂以及實施，從而達到改善CHB患者預后的目的。