當歸飲子及其拆方對慢性濕疹豚鼠皮毛疏泄與潤澤功能狀態的影響

高 志，馬靜怡，武亦閣，范麗娜，賀 乙，周 光

(新疆醫科大學中醫學院，新疆 烏魯木齊 830011)

濕疹是由素體在多種因素誘發下的臨床難治性皮膚病，病理組織形態表明可累及皮膚表皮及真皮淺層[1]，引起表皮屏障功能障礙。中醫皮毛“疏泄肌表”和“潤澤肌膚”的功能和狀態與西醫“表皮屏障功能”趨同，其功能障礙是臨床皮膚病的共性機制[2-3]。皮毛“疏泄肌表”和“潤澤肌膚”的功能和狀態是課題組對皮毛“衛外作用”理論的研究詮釋，皮毛“開闔”功能和生理狀態反映了皮毛的“疏泄”作用，皮毛“潤澤肌膚”是指皮毛的正常生理和功能表現需要氣血津液的正常敷布與潤養。歷代醫家對苔蘚化皮損為特征的濕疹患者多從血虛風燥證論治[4]，多以當歸飲子加減治療。當歸飲子(出自《重訂嚴氏濟生方》)具有祛風止癢、養血潤燥之功效，課題組前期研究表明當歸飲子能夠降低豚鼠血清IgE水平，減輕瘙癢癥狀，平衡血清白細胞介素-4(IL-4)、白細胞介素-17(IL-17)水平，調節皮膚水通道蛋白AQP3及皮膚角質層含水量和經皮水分散失量[5]。基于課題組前期研究，本實驗以方測證，觀察了當歸飲子“疏泄”與“潤澤”組方用藥對皮膚角質層含水量和經皮水分散失量的影響，研究當歸飲子調節皮膚屏障功能的關鍵用藥和配伍意義。

1 實驗材料與方法

1.1動物 雄性豚鼠40只，體重(350±20)g，購自陜西君行生物科技有限公司，合格證號：SCXK(陜)2017-001。實驗動物飼養環境為普通級環境實驗室，光照12 h，自由攝食飲水，豚鼠適應性喂養1周后開始實驗。本實驗得到新疆醫科大學第一附屬醫院動物倫理委員會批準(IACUC-20160218-076)。

1.2藥物、試劑及儀器 當歸飲子：當歸10 g、白芍藥10 g、川芎10 g、生地黃10 g、白蒺藜10 g、防風10 g、荊芥10 g、何首烏5 g、黃芪5 g、炙甘草5 g、生姜3 g。當歸飲子去疏泄藥組：當歸10 g、白芍藥10 g、川芎10 g、生地黃10 g、何首烏5 g、黃芪5 g、炙甘草5 g。當歸飲子去潤澤藥組：白蒺藜10 g、荊芥10 g、防風10 g、黃芪5 g、炙甘草5 g。飲片購自新疆醫科大學第四臨床醫學院中藥房。將中藥采用傳統煎煮方法常規煎煮2次，合并濾液后通過95 ℃水浴鍋濃縮后保存備用。當歸飲子藥液生藥濃度為1.36 g/mL，當歸飲子去疏泄藥的生藥濃度為0.85 g/mL，當歸飲子去潤澤藥的生藥濃度為0.62 g/mL。2，4-二硝基氯苯(DNCB)購自上海古朵生物科技有限公司(批號：20191210)，丙酮購自天津富宇精細化工有限公司(批號：20190608)。德國CK公司MPA6/10型多功能皮膚測試儀；德國Sartorius公司BL310/BL21S型分析天平；上海菁海儀器有限公司DY15K型電子天平。

1.3造模溶液的制備 致敏溶液的制備：稱取DNCB 3.50 g，溶解于50 mL丙酮中制成7% DNCB丙酮溶液作為實驗的致敏溶液；激發溶液的制備：稱取DNCB 0.10 g，溶解于100 mL丙酮中制成0.1% DNCB丙酮溶液作為實驗的激發溶液。

1.4實驗方法 實驗豚鼠適應性喂養1周后，隨機分為正常組、模型組、當歸飲子全方組、當歸飲子去潤澤藥組、當歸飲子去疏泄藥組，每組8只。參照文獻[5-6]方法造模：實驗第1天將豚鼠背部脫毛,范圍約3 cm×3 cm，除正常組外，其余各組豚鼠背部脫毛區以7% DNCB丙酮溶液100 μL外涂致敏,實驗第5天除正常組外所有豚鼠右耳內側以0.1% DNCB丙酮溶液25 μL外涂激發，每周涂藥1次,連續涂藥4周。豚鼠背部致敏區皮損呈現紅斑、丘疹、苔蘚樣變,并且伴有明顯搔抓跡象，豚鼠右耳局部滲出減少且伴有少量皮屑，提示血虛風燥型慢性濕疹模型造模成功。于造模結束后第2天，按人與豚鼠體表面積比例換算豚鼠給藥劑量，當歸飲子全方組給予1.36 mg/mL當歸飲子全方水煎液6.82 g/kg灌胃，當歸飲子去潤澤藥組給予0.62 g/mL當歸飲子去潤澤藥水煎液4.26 g/kg灌胃,當歸飲子去疏泄藥組給予0.85 g/mL當歸飲子去疏泄藥水煎液3.10 g/kg灌胃，正常組和模型組給予等體積純凈水灌胃，均1次/d，連續灌胃2周。

1.5觀察指標與方法

1.5.1皮損評分 分別于造模結束當日和末次灌胃結束當日對各組豚鼠背部皮損(紅斑、水腫、抓痕)進行評分。紅斑：按無、輕微、明顯、中度紅斑伴輕中度痂皮、重度紅斑伴重度痂皮分別賦予0，1，2，3，4分；水腫按無、輕度、中度、重度分別賦予0，1，2，3分；抓痕按無、有賦予0，1分；將各指標得分相加得到總積分，最高分為8分[7]。

1.5.2皮膚角質層含水量和經皮水分散失量 采用德國CK公司MPA6/10型儀器檢測，將儀器測試探測頭垂直放在測試皮膚上面，儀器電腦系統顯示數據。

2 結 果

2.1各組豚鼠皮損評分 末次灌胃結束后，模型組皮損評分明顯高于正常組(P<0.05)，當歸飲子全方組、當歸飲子去疏泄藥組、當歸飲子去潤澤藥組均明顯低于模型組(P均<0.05)，各藥物組間比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1 正常組和慢性濕疹各組豚鼠皮損評分比較分)

2.2各組豚鼠皮膚角質層含水量比較 造模結束當日，各造模組豚鼠皮膚角質層含水量均明顯低于正常組(P均<0.05)，各造模組間比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。末次灌胃結束后，模型組皮膚角質層含水量明顯低于正常組(P<0.05)，當歸飲子全方組、當歸飲子去疏泄藥組、當歸飲子去潤澤藥組皮膚角質層含水量均明顯高于模型組(P均<0.05)，但當歸飲子去疏泄藥組和當歸飲子去潤澤藥組皮膚角質層含水量均明顯低于當歸飲子全方組(P均<0.05)。見表2。

表2 正常組和慢性濕疹各組豚鼠皮膚角質層含水量比較

2.3各組豚鼠經皮水分散失量比較 造模結束當日，各造模組豚鼠經皮水分散失量均明顯高于正常組(P均<0.05)，各造模組間比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。末次灌胃結束后，模型組經皮水分散失量明顯高于正常組(P<0.05)，當歸飲子全方組、當歸飲子去疏泄藥組、當歸飲子去潤澤藥組經皮水分散失量均明顯低于模型組(P均<0.05)，各藥物組間比較差異均無統計學意義(P均>0.05)，但趨勢全方組優于各拆方組。見表3。

表3 正常組和慢性濕疹各組豚鼠經皮水分散失量比較

3 討 論

濕疹纏綿反復，遷延不愈，其病因復雜而不明確。現代研究表明皮膚屏障功能障礙是臨床常見皮膚病的主要發病機制[8]，慢性濕疹皮膚干燥伴隨著表皮屏障功能障礙，多表現為皮膚水分過度散失，從而引起皮膚干燥脫屑，同時促進皮膚炎癥因子的釋放[9]。中醫認為濕疹患者多為稟賦不耐，素體脾虛，或為飲食不節，或為外邪誘發，病情反復，邪熱蘊膚，化熱耗傷津血，肌膚失養，皮膚脫屑、干燥、苔蘚化。究其根本為濕熱蘊膚，玄府、腠理阻塞，皮毛“疏泄”失調，濕熱蘊久，耗傷陰血，皮毛津血不足，“潤澤”失司。皮毛“疏泄”與“潤澤”的功能與狀態與表皮屏障功能密切相關，二者之間具有趨同性[10-11]。

皮膚角質層含水量和經皮水分散失量在一定程度反映了表皮通透屏障功能狀態，其中皮膚角質層含水量可直觀反映皮膚潤澤狀態，經皮水分散失量和表面皮脂在一定程度上反映肌表疏泄的功能狀態[12-13]。表皮水分散失過多反映皮毛衛外不固，疏泄水濕過度，有損津血，皮毛失于濡養;水分散失過低反映邪蘊皮毛，玄府、腠理疏泄不暢;皮膚皮脂含量過高反映濕熱邪毒蘊結皮毛，疏泄不足，濡養障礙;皮膚皮脂含量過低反映氣血濡養，潤澤不足。由此可見，中醫皮毛“疏泄”與“潤澤”功能理論及調控經驗為西醫“表皮通透屏障功能”研究提供了思路。

當歸飲子組成藥物主要為“養血潤澤”藥組(當歸、川芎、生地黃、白芍藥、何首烏、炙甘草)和“疏泄敷布津血”藥組(黃芪、白蒺藜、防風、荊芥、生姜)，許多前世醫家將其應用于陰血虧損合并風邪的多種皮膚病如瘙癢癥、濕疹、蕁麻疹等[14-16]，能有效緩解瘙癢，減少鱗屑，改善皮膚肥厚癥狀。課題組前期實驗研究顯示，該方對濕疹等免疫相關變態反應性疾病皮膚屏障具有調節作用[5]，并認為血虛風燥證慢性濕疹之風為“風象”，而非風邪。當歸飲子組方中當歸辛潤甘緩，通絡養血潤燥；白芍苦、酸入肝脾經，養血和營衛；生地黃性味甘寒，涼血養血，且能養陰生津；何首烏性甘溫，補肝腎，益精血；川芎性溫，行氣活血，通絡行營衛；黃芪益氣托毒，斂瘡生肌；方中辛潤甘緩之當歸、白芍、生地黃、何首烏乃養血滋陰藥，配甘溫流氣之川芎、黃芪，可敷布津血于皮毛，養血潤燥，改善皮毛之干燥癥狀。《內經》提出辛味藥治“腎燥”。腎精虧而津血不足，膚失潤養是臨床干燥性皮膚病的主要內因。故當歸飲子方中辛潤甘緩之當歸、白芍、生地黃、何首烏又配以辛散透表之防風、荊芥、白蒺藜、生姜，一則疏泄蘊結皮毛之邪，二則助津血之藥敷布于皮毛。縱觀全方，雖為養血潤燥之方，但養血之中孕育著“疏泄”與“潤澤”皮毛之玄機。

拆方研究是研究中醫組方用藥規律，探索名家用藥配伍經驗的有效方法，能夠優化中藥復方，為尋找最佳組方和關鍵藥物提供科學依據。通過當歸飲子拆方實驗，課題組認為當歸飲子治療慢性濕疹主要以養血潤燥、辛散透表的配伍組合改善皮毛“疏泄狀態”與“潤澤狀態”，以修復表皮通透屏障功能，因此將當歸飲子拆分成“去疏泄”藥組和“去潤澤”藥組進行驗證實驗。本次實驗研究顯示，當歸飲子組豚鼠皮膚角質層含水量明顯高于模型組，經皮水分散失量明顯低于模型組，說明當歸飲子能夠提高皮膚角質層含水量，維護皮毛“疏泄”與“潤澤”狀態，提高皮膚屏障功能，解決皮毛干燥問題；而當歸飲子去潤澤藥組和當歸飲子去疏泄藥組豚鼠皮膚角質層含水量較當歸飲子組低，經皮水分散失量有所提高，說明“疏泄”藥組和“潤澤”藥組的配伍結構在治療中發揮了關鍵作用。

綜上所述，當歸飲子能夠改善慢性濕疹豚鼠皮膚角質層含水量和經皮水分散失量，即能夠改善皮毛“疏泄”與“潤澤”功能狀態，修復表皮通透屏障功能，從而緩解皮膚干燥狀態，其效果優于拆方組，作用機制與當歸飲子“疏泄”藥組和“潤澤”藥組的配伍結構密切相關，體現出中醫經典方劑當歸飲子的組方特點和配伍的科學性。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。