四磨湯對肝脾氣滯證功能性消化不良大鼠胃腸運動及血清GAS、MTL的影響

周 姝，周賽男，韓運宗，劉 琴，陳思清

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院， 湖南 長沙 410007)

功能性消化不良(functional dyspepsia，F(xiàn)D)是臨床上高發(fā)的一種功能性胃腸道疾病，患病率為7.2%～16%，以早飽、餐后飽脹、伴或不伴腹部疼痛或燒灼感，并排除器質(zhì)性改變?yōu)橹饕卣鱗1-3]。依據(jù)羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)D被分為上腹疼痛綜合征(PDS)、餐后窘迫綜合征(EPS)和PDS重疊EPS(混合型) 3個亞型[4]。FD的病因與發(fā)病機制目前并未完全明確，西醫(yī)普遍認(rèn)同F(xiàn)D的主要病理生理學(xué)基礎(chǔ)是胃腸道動力障礙，其中30%～60%存在胃排空減慢[5]。中醫(yī)認(rèn)為FD的發(fā)病與肝脾兩臟密切相關(guān)，雖然證型諸多，然而氣機升降失調(diào)是其核心病理環(huán)節(jié)[6]。四磨湯源于宋代嚴(yán)用和的《濟生方》，由烏藥、檳榔、沉香、人參組成，它能明顯改善FD患者癥狀，但作用機制目前尚不清楚。本研究以胃腸道動力障礙為切入點，探討了四磨湯對肝脾氣滯證FD大鼠的胃排空率、小腸推進率及血清胃泌素(GAS)、胃動素(MTL)水平的影響，以為臨床應(yīng)用提供客觀依據(jù)。

1 實驗材料與方法

1.1動物 健康Wistar大鼠36只，購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物使用許可證號：SCXK(湘)2019-0004，大鼠使用全價顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水，飼養(yǎng)于清潔級動物房。本實驗操作經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物倫理委員會審核批準(zhǔn)(ZYFY20210913-04)。

1.2藥物 四磨湯組成：檳榔9 g、烏藥6 g、沉香6 g、人參6 g，中藥材購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，常規(guī)水煎濃縮為0.32 g/mL(高劑量)后4 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫捎酶邉┝克鍧饪s液加蒸餾水稀釋制備低劑量濃度(0.18 g/mL)和中劑量濃度(0.24 g/mL)。枸櫞酸莫沙必利片(成都康弘藥業(yè)集團股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20031110，規(guī)格：5 mg/片)，將藥片研磨為粉末，與蒸餾水比配成濃度0.030 5 mg/mL的混懸液，放置4 ℃冰箱備用。

1.3主要儀器與試劑 ELISA試劑盒：GAS(批號：U13032070)、MTL(批號：Z08036488)，武漢華美生物工程有限公司。臺式高速冷凍離心機(湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司，型號：H1650R)；全自動酶標(biāo)洗板機(深圳市匯松科技發(fā)展有限公司，型號：PW-812 )；多功能酶標(biāo)分析儀(深圳市匯松科技發(fā)展有限公司，型號：MB-530)。

1.4實驗方法 采用分層隨機設(shè)計, 將36只大鼠隨機分為空白組、模型組、四磨湯低劑量組、四磨湯中劑量組、四磨湯高劑量組、莫沙必利組。結(jié)合既往實驗結(jié)果[7-8]，采用夾尾刺激法和不規(guī)則喂養(yǎng)法對除空白組的大鼠進行FD肝脾氣滯證造模：每日7:00，10:00，13:00，16:00用長鉗夾住大鼠尾巴的近心端(約2/3)，以不夾破皮為準(zhǔn)則，使其暴怒，從而與同籠的其他大鼠撕打，激怒其他大鼠，每次刺激30 min左右；每日喂水，隔日喂食。連續(xù)干預(yù)21 d后，通過大鼠行為學(xué)、胃排空及血清GAS和MTL水平判斷是否造模成功。證實造模成功后，空白組和模型組灌胃蒸餾水(10 mL/kg)，四磨湯低、中、高組分別灌胃1.8 g/(kg·d)、2.4 g/(kg·d)、3.2 g/(kg·d)四磨湯，莫沙必利組灌胃0.305 mg/(kg·d)莫沙必利混懸液，均每日1次，持續(xù)14 d。

1.5觀察指標(biāo)和方法

1.5.1大鼠一般狀態(tài) 每日觀察大鼠的精神狀態(tài)、姿勢、皮毛色澤、活動度以及糞便等全身情況。

1.5.2大鼠體重 實驗開始后，隔日7:00稱量大鼠體重，根據(jù)體重調(diào)整給藥量，比較各組大鼠灌胃第1天和第14天的體重。

1.5.3胃排空率 采用酚紅法測定：末次灌胃結(jié)束后禁食1 d，各組大鼠灌注2 mL甲基纖維素-酚紅溶液，半小時后處死大鼠，打開腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門，取出鼠胃，順胃大彎剖開，將胃內(nèi)容物沖洗干凈，定容為20 mL。加入0.5 mol/L NaOH溶液20 mL攪勻，放置1 h，取5 mL上清液加入20%三氯乙酸0.5 mL以去蛋白，以3 500 r/min離心10 min，取上清液用分光光度計在560 nm處測定吸光度(A)值，再取10%甲基纖維素-酚紅溶液2 mL，依次加入18 mL蒸餾水、20 mL的0.5 mol/L NaOH溶液、4 mL的20%三氯乙酸，攪勻后測定吸光度值。胃排空率=(1-實測酚紅A/標(biāo)準(zhǔn)酚紅A)×100%。

1.5.4小腸推進率 取出胃后，分離出腸系膜，剪取幽門至回盲部的一段腸管，將不施牽引力的腸管平攤于白紙上，測量小腸中的移行距離。小腸推進率=碳粉前端至幽門括約肌距離/幽門括約肌至小腸末端距離×100%。

1.5.5血清GAS和MTL水平 全血標(biāo)本于室溫放置2 h,于2～8 ℃下 1 000×g離心15 min，取上清,按照ELISA試劑盒操作說明檢測，記錄酶標(biāo)儀在450 nm波長處各孔吸光度(OD值)，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)得到相應(yīng)曲線，根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算相應(yīng)濃度。

2 結(jié) 果

2.1大鼠一般狀態(tài)比較 空白組大鼠精神狀態(tài)良好，皮毛榮潤，活動度正常，糞便不干不稀，飲水進食正常；模型組大鼠精神頹靡，皮毛粗糙，喜歡聚集籠箱一角，易受驚嚇刺激，易呈現(xiàn)高攻擊狀態(tài)，糞便溏結(jié)不調(diào)，易黏滯于墊料，進食量減少；藥物干預(yù)后，四磨湯高劑量組與莫沙必利組大鼠攻擊力減弱，進水進食增加，糞便正常。

2.2大鼠體重比較 灌胃第14天，模型組大鼠體重明顯低于空白組(P<0.05)，四磨湯各劑量組與莫沙必利組大鼠體重均明顯高于模型組(P均<0.05)；四磨湯高劑量組大鼠體重與莫沙必利組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，四磨湯低、中劑量組均明顯低于莫沙必利組(P均<0.05)。見表1。

表1 空白組和肝脾氣滯證功能性消化不良各組大鼠灌胃第1天及第14天體重比較

2.3大鼠胃排空率與小腸推進率比較 模型組大鼠胃排空率、小腸推進率均明顯低于空白組(P均<0.05)，四磨湯中、高劑量組和莫沙必利組大鼠胃排空率與小腸推進率均明顯高于模型組(P均<0.05)；四磨湯高劑量組胃排空率明顯高于四磨湯低、中劑量組和莫沙必利組(P均<0.05)，莫沙必利組均明顯高于四磨湯低、中劑量組(P均<0.05)；四磨湯高劑量組及莫沙必利組大鼠小腸推進率均明顯高于四磨湯低劑量組(P均<0.05)，與空白組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，且四磨湯高劑量組與莫沙必利組比較差異無統(tǒng)計學(xué)義(P均>0.05)。見表2。

表2 空白組和肝脾氣滯證功能性消化不良各組大鼠胃排空率與小腸推進率比較

2.4大鼠血清GAS和MTL水平比較 模型組大鼠血清GAS、MTL水平均明顯低于空白組(P均<0.05)；四磨湯各劑量組和莫沙必利組大鼠血清MTL、GAS水平均明顯高于模型組(P均<0.05)；四磨湯高劑量組大鼠血清MTL、GAS水平均明顯高于四磨湯低、中劑量組和莫沙必利組(P均<0.05)，且莫沙必利組均明顯高于四磨湯低、中劑量組(P均<0.05)。見表3。

表3 空白組和肝脾氣滯證功能性消化不良各組大鼠血清GAS和MTL水平比較

3 討 論

根據(jù)FD的癥狀，臨床多將FD歸于中醫(yī)學(xué)“痞滿”“胃脘痛”等范疇。中醫(yī)認(rèn)為FD以脾虛為根本，氣滯為關(guān)鍵病機，貫穿疾病全程[9]。四磨湯以烏藥為君，疏肝郁、行脾滯；沉香為臣，下氣降逆；佐以檳榔、人參，開郁行氣而不傷正，四藥共奏行氣降逆、寬胸散結(jié)之效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，烏藥含有大量的呋喃倍半萜及內(nèi)酯等物質(zhì), 具有抗炎止痛、抗腫瘤、抗氧化等作用[10]。沉香具有鎮(zhèn)痛、神經(jīng)保護、抗炎抗菌、抗抑郁等作用[11]，其主要成分倍半萜類化合物和2-(2-苯乙基)色酮類化合物可抑制乙酰膽堿酯酶活性[12]。人參可抗菌，調(diào)節(jié)人體免疫力[13]。體現(xiàn)檳榔生物活性的重要化合物是檳榔堿，檳榔堿可以通過提高小腸推進率、胃平滑肌收縮幅度和胃腸激素來調(diào)節(jié)胃腸道功能[14]。本課題組前期研究也表明四磨湯能明顯改善肝脾氣滯證FD患者癥狀[15]。

莫沙必利是治療FD的常用藥，它能興奮膽堿能神經(jīng)元釋放乙酰膽堿，促進胃排空與小腸蠕動[16]，故本研究將該藥設(shè)為陽性對照藥。然而，長期使用莫沙必利會出現(xiàn)一系列不良反應(yīng)，如腹瀉、腹痛、皮疹和頭暈[17]，尋求一種安全有效的治理方案尤為重要。

FD的病因眾多，與胃腸道運動障礙、胃腸激素分泌紊亂、內(nèi)臟感覺高敏、幽門螺桿菌感染、精神等多方面都有關(guān)聯(lián)，而在FD的發(fā)病中起著尤為關(guān)鍵作用的當(dāng)屬胃腸道運動障礙[18]。胃腸道的運動功能與平滑肌細(xì)胞的電活動緊密相關(guān)，以周期性移行性復(fù)合運動(MMC)為表現(xiàn)形式。GAS和MTL都屬于興奮性胃腸激素，其中GAS可增強胃腸蠕動,并且有促進胃腸道黏膜修復(fù)及增加血流量, 促進胃酸、胃蛋白酶、胰液分泌等作用[19]。MTL主要是通過腸神經(jīng)系統(tǒng)觸發(fā)MMC來促進胃腸道蠕動，刺激胃蛋白酶的分泌，可作用于胃腸平滑肌上的胃泌素受體，增強平滑肌收縮功能[20]。

本研究中通過復(fù)合病因方法建立肝脾氣滯證FD大鼠模型，顯示FD大鼠胃腸功能明顯減退，主要表現(xiàn)為胃殘留率升高，小腸推進率及血清MTL、GAS水平降低，而這恰恰反映了肝脾氣滯導(dǎo)致胃腸蠕動減慢的FD發(fā)生特點；四磨湯高劑量組胃殘留量明顯減少，小腸推進率及血清GAS、MTL水平增高。提示四磨湯可改善肝脾氣滯型FD大鼠胃腸運動，其效應(yīng)可能是通過升高大鼠血清中GAS和MLT水平來實現(xiàn)的。然而四磨湯調(diào)節(jié)MTL、GAS表達的作用機制以及改善胃腸動力的具體作用靶點通路尚不明確，這些問題均有待在后續(xù)研究中完善。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。