宜賓市冬春季禽流感監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

□文/陳燕凌 王穎旺 江科 黃利娟 周凡 吳玉疆 金仕強(qiáng)

禽流感（AvianInfluenza）是由正粘病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的以禽類(lèi)為主的烈性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病，我國(guó)將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。目前，禽流感病毒已廣泛分布于世界各地，每一次嚴(yán)重的爆發(fā)不僅可造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而且對(duì)人類(lèi)的生命健康也構(gòu)成了威脅。部分禽流感也能感染人，人感染后的癥狀主要表現(xiàn)為高熱、咳嗽、流涕、肌痛等，多數(shù)伴有嚴(yán)重的肺炎，嚴(yán)重者心、腎等多種臟器衰竭死亡。

冬春季是高致病性禽流感等重大動(dòng)物疫病的高發(fā)季節(jié)，為及時(shí)掌握高致病性禽流感病毒在家禽中的感染、帶毒、變異和流行情況，宜賓市開(kāi)展“冬春季節(jié)高致病性禽流感監(jiān)測(cè)專(zhuān)項(xiàng)行動(dòng)”，為禽流感防控提供科學(xué)、及時(shí)、有效的監(jiān)測(cè)預(yù)警預(yù)報(bào)，防范疫情風(fēng)險(xiǎn)。

一、材料與方法

（一）樣品采集

采集11個(gè)活禽交易市場(chǎng)，4個(gè)家禽屠宰場(chǎng)，25個(gè)家禽養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）共40個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的禽泄殖腔和口腔雙拭子212份；采集全市21個(gè)家禽養(yǎng)殖場(chǎng)，5個(gè)活禽交易市場(chǎng)，4個(gè)家禽屠宰場(chǎng)的血清樣品450份，-20℃保存在宜賓市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室。

（二）病原學(xué)檢測(cè)

采集的標(biāo)本均進(jìn)行禽流感核酸檢測(cè)。檢測(cè)試劑使用洛陽(yáng)萊普生物信息科技有限公司生產(chǎn)的禽流感病毒通用型熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒和病毒RNA提取試劑盒，均在有效期內(nèi)。儀器為德國(guó)耶拿qTOWER3G實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。20微升反應(yīng)體系，包括熒光定量PCR反應(yīng)檢測(cè)混合液10微升，引物混合液7微升，酶混合液0.5微升，RNA模板2.5微升。參數(shù)設(shè)置：反轉(zhuǎn)錄42℃5分鐘；預(yù)變性95℃10秒；PCR95℃5秒，58℃40秒，循環(huán)40次；在58℃采集熒光信號(hào)。

有效性判定：陽(yáng)性對(duì)照：Ct值≤30，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)；陰性對(duì)照：Ct值＞38或無(wú)Ct值，線形為直線或輕微斜線，無(wú)明顯指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。

樣本檢測(cè)結(jié)果判定：Ct值≤35，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)判為陽(yáng)性；檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～37范圍，應(yīng)對(duì)樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。如重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～37范圍，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，則判為陽(yáng)性，否則為陰性；樣品檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無(wú)Ct值為陰性。

（三）血清學(xué)檢測(cè)

采集的標(biāo)本進(jìn)行禽流感H5亞型血凝及血凝抑制試驗(yàn)，檢測(cè)試劑使用哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的H5Re-11/12抗原及陽(yáng)性血清，均在有限期內(nèi)。按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T18936-2020》進(jìn)行。

結(jié)果判定：當(dāng)抗原對(duì)照孔完全凝集，且陰性對(duì)照血清抗體效價(jià)不高于1∶4（22或2log2），陽(yáng)性對(duì)照血清抗體效價(jià)與已知效價(jià)誤差不超過(guò)1個(gè)滴度時(shí)，試驗(yàn)方可成立。以完全抑制4HUA抗原的最高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI抗體效價(jià)。用于檢測(cè)抗體，檢測(cè)雞血清時(shí)，HI抗體效價(jià)不高于1∶8判為陰性，不低于1∶16時(shí)判為陽(yáng)性。

二、結(jié)果與分析

（一）核酸檢測(cè)結(jié)果與分析

共檢測(cè)樣品212份，陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照成立，其中有13份樣品Ct值≤35，且有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，判為陽(yáng)性，如圖1所示。

圖1 圖標(biāo)本指數(shù)增長(zhǎng)曲線圖

根據(jù)結(jié)果分析，在采集的212份樣品中，陽(yáng)性樣品13份，陽(yáng)性率為6.1%；在40個(gè)監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)中，活禽交易市場(chǎng)11個(gè)，禽類(lèi)屠宰場(chǎng)點(diǎn)4個(gè)，養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）25個(gè)，出現(xiàn)陽(yáng)性的場(chǎng)點(diǎn)數(shù)為10個(gè)，其中包括7個(gè)活禽交易市場(chǎng)，3個(gè)活禽屠宰場(chǎng)，證明在活禽交易市場(chǎng)中禽流感病毒廣泛存在，感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)極高（表1）。

表1 監(jiān)測(cè)情況統(tǒng)計(jì)表

（二）血凝及血凝試驗(yàn)結(jié)果

共檢測(cè)樣品450份，陽(yáng)性對(duì)照陰性對(duì)照成立，其中387份樣品抗體效價(jià)不低于1∶16，判為陽(yáng)性，其余樣品抗體效價(jià)不高于1∶8判為陰性。

結(jié)果分析，在450份樣品中，養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）樣品數(shù)為359份，抗體陽(yáng)性318份；活禽交易市場(chǎng)樣品數(shù)51份，抗體陽(yáng)性樣品數(shù)37份；禽類(lèi)屠宰場(chǎng)樣品數(shù)40份，抗體陽(yáng)性樣品數(shù)32份。由此可見(jiàn)，養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）的禽流感抗體水平最好，抗體陽(yáng)性率為88.57%，活禽交易市場(chǎng)的抗體水平最低，抗體陽(yáng)性率為72.54%（表2）。

表2 血清學(xué)樣品結(jié)果統(tǒng)計(jì)

三、討論

（一）樣品場(chǎng)所來(lái)源

農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、家禽屠宰點(diǎn)檢出病原學(xué)陽(yáng)性樣品，可能與農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和屠宰場(chǎng)點(diǎn)禽只來(lái)源渠道廣、家禽交易頻繁、環(huán)境消殺不徹底有關(guān)；與病原學(xué)陽(yáng)性比較，養(yǎng)殖、交易、屠宰三個(gè)點(diǎn)位的血清學(xué)陽(yáng)性均達(dá)到了70%以上，結(jié)合采樣過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)明顯的高致病性禽流感癥狀，一方面說(shuō)明了免疫后疫苗保護(hù)水平較高，現(xiàn)有疫苗免疫效果較好，一方面無(wú)法排除是否存在禽感染病原學(xué)陽(yáng)性的情況。因此，從動(dòng)物防疫角度考慮，需要進(jìn)一步規(guī)范家禽屠宰環(huán)節(jié)和交易環(huán)節(jié)的檢疫監(jiān)管，認(rèn)真執(zhí)行日消、日清制度，規(guī)范禽類(lèi)有序流動(dòng)，降低生物安全風(fēng)險(xiǎn)。

（二）陽(yáng)性樣品的禽類(lèi)

農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、活禽交易市場(chǎng)檢測(cè)出的病原學(xué)陽(yáng)性樣品主要是散養(yǎng)戶拿到市場(chǎng)上售賣(mài)的雞，禽類(lèi)屠宰場(chǎng)的陽(yáng)性樣品是省內(nèi)市外的肉鴨，且根據(jù)抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果，活禽交易市場(chǎng)和禽類(lèi)屠宰場(chǎng)的抗體水平相對(duì)較低，也從側(cè)面說(shuō)明了散養(yǎng)戶水禽的禽流感免疫不到位，存在了感染高致病性禽流感的風(fēng)險(xiǎn)。因此，要將高致病性禽流感的基礎(chǔ)免疫工作落到實(shí)處，特別是加強(qiáng)對(duì)散養(yǎng)戶和水禽的免疫，繼續(xù)開(kāi)展抗體水平監(jiān)測(cè)，加強(qiáng)對(duì)水禽的抗體水平監(jiān)測(cè)，對(duì)抗體監(jiān)測(cè)不合格的要立即進(jìn)行補(bǔ)免。

（三）禽流感流行情況

2021年宜賓市南溪區(qū)發(fā)生一起人感染禽流感H5N6亞型，2022年南充市西充縣發(fā)生一起高致病性禽流感（H5N6亞型）疫情。宜賓市地處候鳥(niǎo)遷徙南線，每年春秋兩季都會(huì)有候鳥(niǎo)路過(guò)宜賓，候鳥(niǎo)遷徙也可能帶來(lái)高致病性禽流感病毒，因此還應(yīng)加強(qiáng)對(duì)野鳥(niǎo)糞便的病原學(xué)監(jiān)測(cè)，規(guī)范禽類(lèi)飼養(yǎng)管理，切斷疫病外來(lái)傳播的風(fēng)險(xiǎn)。

（四）禽流感防控措施

一是要持續(xù)抓好春秋兩季集中免疫，落實(shí)畜禽養(yǎng)殖者動(dòng)物防疫主體責(zé)任，特別是中小散戶集中免疫，保證免疫質(zhì)量和數(shù)量；二是要加強(qiáng)禽流感免疫效果監(jiān)測(cè)評(píng)估，對(duì)禽流感抗體不達(dá)標(biāo)的養(yǎng)殖戶要及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免；三是加大對(duì)家禽屠宰環(huán)節(jié)和交易環(huán)節(jié)的檢疫監(jiān)管，落實(shí)日消和日清制度，同時(shí)加大對(duì)活禽交易市場(chǎng)、畜禽屠宰場(chǎng)、養(yǎng)殖場(chǎng)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)；四是要重視對(duì)野鳥(niǎo)或候鳥(niǎo)的監(jiān)測(cè)，規(guī)范禽類(lèi)實(shí)驗(yàn)管理，切斷候鳥(niǎo)傳播疫病的途徑。切實(shí)做到人病獸防，關(guān)口前移，科學(xué)防控。