中草藥在加州鱸病變肝臟中的修復(fù)作用

■ 王凱 （江門(mén)市澳保生物科技有限公司 廣東 江門(mén) 52900）

肝臟既是魚(yú)體代謝器官，也是重要的免疫器官，不僅具有解毒、代謝脂肪和糖類(lèi)的功能，而且在氧化防御方面具有重要作用。當(dāng)外界環(huán)境發(fā)生變化時(shí)，肝臟中一系列的抗氧化酶類(lèi)將被激活，快速清除體內(nèi)多余的自由基，以此抵御外界脅迫所產(chǎn)生的侵害，維持魚(yú)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。

近年來(lái)，在高產(chǎn)高效益的驅(qū)使下，我國(guó)每年都有由于投喂、管理不當(dāng)造成的白肝、花肝、黃肝等肝臟問(wèn)題，最終導(dǎo)致魚(yú)吃料少、長(zhǎng)速慢、免疫力低下。長(zhǎng)期的低免疫狀態(tài)使得魚(yú)體難以克服多變的外部環(huán)境，易造成魚(yú)病的爆發(fā)和魚(yú)類(lèi)的大規(guī)模死亡，從而增加養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)，影響?zhàn)B殖利潤(rùn)。

中草藥是一種天然的飼料添加劑，具有提高魚(yú)體免疫力、增加魚(yú)類(lèi)食欲、保肝護(hù)腸等功效，加之其低成本、低殘留、低耐藥性等特點(diǎn)，近年來(lái)，應(yīng)用中草藥防治魚(yú)病受到了越來(lái)越多的關(guān)注。

因此，針對(duì)現(xiàn)有魚(yú)類(lèi)肝臟問(wèn)題，對(duì)具有護(hù)肝功效的中草藥進(jìn)行探究，不僅有利于魚(yú)類(lèi)的健康養(yǎng)殖，維護(hù)“餐桌上的安全”，也對(duì)于水資源環(huán)境的保護(hù)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

養(yǎng)殖江門(mén)市澳保生物科技有限公司種苗廠實(shí)驗(yàn)網(wǎng)箱中的加州鱸，體質(zhì)量為50～100g/條，無(wú)病毒性、細(xì)菌性和寄生蟲(chóng)性疾病。實(shí)驗(yàn)期間養(yǎng)殖水體水質(zhì)良好，水溫21～27℃，氨氮0～0.2mg.L-1，亞鹽0～0.007mg.L-1，pH值7.4～7.8，溶氧5.6～7.6mg.L-1。每天投喂2次。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

江門(mén)市澳保生物科技有限公司自主研發(fā)的復(fù)方中草藥護(hù)肝產(chǎn)品A。

圖1 不同肝臟損傷程度分級(jí)

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 肝臟損傷檢查和肝臟分級(jí)

正式實(shí)驗(yàn)前對(duì)現(xiàn)有養(yǎng)殖的15個(gè)網(wǎng)箱加州鱸魚(yú)肝臟進(jìn)行檢查，每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取5條魚(yú)，選擇肝臟損傷較為嚴(yán)重的網(wǎng)箱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并對(duì)不同的肝臟損傷程度進(jìn)行分級(jí)。

1.3.2 肝臟修復(fù)實(shí)驗(yàn)一：產(chǎn)品A護(hù)肝效果初步檢驗(yàn)對(duì)肝損傷的網(wǎng)箱F中的加州鱸（200條）拌喂中草藥護(hù)肝產(chǎn)品A進(jìn)行治療，每天拌喂2次，連續(xù)拌喂14d。分別于第0d、第7d和第14d進(jìn)行取樣，每次隨機(jī)取樣6條魚(yú)，5條用于肝臟觀察，1條用于切片。

實(shí)驗(yàn)二：產(chǎn)品A護(hù)肝效果對(duì)比實(shí)驗(yàn) 將肝損傷的15、16號(hào)網(wǎng)箱中的加州鱸（200條/網(wǎng)箱）分為兩組，一組為對(duì)照組，投喂普通飼料，另一組為實(shí)驗(yàn)組，投喂拌有中草藥護(hù)肝產(chǎn)品A的藥餌，每天拌喂2次，連續(xù)拌喂7d，于第0d、第7d進(jìn)行取樣，每次隨機(jī)取樣10條魚(yú)，觀察肝臟情況。記錄每日吃料量，采樣前魚(yú)體總重，采樣后每條魚(yú)體重、肝臟重，計(jì)算增重、增重率、吃料量、餌料系數(shù)。

增重=魚(yú)體末重-魚(yú)體初重

增重率=（魚(yú)體末重-魚(yú)體初重）/魚(yú)體初重×100%

吃料量=每日吃料量×吃料天數(shù)

餌料系數(shù)=每日吃料量×吃料天數(shù)/增重×100%

2 結(jié)果

2.1. 肝臟分級(jí)

根據(jù)養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)，對(duì)魚(yú)體不同狀態(tài)下的肝臟進(jìn)行分級(jí)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的分析提供判斷依據(jù)。1級(jí)肝臟：肝臟為豬肝紅，肝臟狀態(tài)最好，不需調(diào)理；2級(jí)肝臟：肝臟顏色較豬肝紅淡，呈現(xiàn)為粉紅色，肝臟狀態(tài)尚可，可調(diào)理也可不調(diào)理；3級(jí)肝臟：肝臟紅潤(rùn)或粉紅帶白斑或黃斑，肝臟狀態(tài)較差，需要調(diào)理；4級(jí)肝臟：肝臟完全轉(zhuǎn)變?yōu)榘咨螯S色，肝臟狀態(tài)很差，急需調(diào)理。

2.2 產(chǎn)品A護(hù)肝效果初步檢驗(yàn)

2.2.1 肝臟外觀觀察

實(shí)驗(yàn)第0d，加州鱸魚(yú)肝臟發(fā)黃，均為4級(jí)肝臟；拌喂產(chǎn)品A 7d后，加州鱸魚(yú)肝臟好轉(zhuǎn)，4條肝臟為略微粉紅，2級(jí)肝臟，1條肝臟為發(fā)黃，4級(jí)肝臟；拌喂產(chǎn)品A 14d后，加州鱸魚(yú)肝臟基本修復(fù)完全，3條紅潤(rùn)，1級(jí)肝臟，2條粉紅，2級(jí)肝臟（圖2），表明隨著時(shí)間的增加，在產(chǎn)品A的作用下，加州鱸肝臟逐步修復(fù)。

圖2 網(wǎng)箱拌喂產(chǎn)品A后肝臟修復(fù)情況

圖3 網(wǎng)箱拌喂產(chǎn)品A后肝臟修復(fù)切片

圖4 拌喂產(chǎn)品A后增重、增重率、吃料量、餌料系數(shù)比較

肝臟切片結(jié)果表明，加州鱸胰腺埋于肝臟中，圍繞血管分布。在使用產(chǎn)品A前，肝臟發(fā)黃，血管周?chē)囊认俳M織完全消失；使用產(chǎn)品A 7d后，肝臟粉紅，血管周?chē)囊认俨糠中迯?fù)，部分出現(xiàn)病變，胰腺部分腫大、出現(xiàn)大量嗜酸性小體和空泡；使用產(chǎn)品A 14d后，肝臟紅潤(rùn)，胰腺組織恢復(fù)正常，圍繞血管均勻分布。

實(shí)驗(yàn)第0d，對(duì)照組和產(chǎn)品A組1～2級(jí)肝臟的占有率分別為40%和20%，3～4級(jí)肝臟的占有率分別為60%和80%，實(shí)驗(yàn)第7d，對(duì)照組1～2級(jí)肝臟和3～4級(jí)肝臟占有率相比于第0d沒(méi)有變化，而產(chǎn)品A組1～2級(jí)肝臟占有率顯著上升，為80%，3～4級(jí)肝臟的占有率顯著下降，為20%（表1），說(shuō)明產(chǎn)品A對(duì)肝損傷的加州鱸肝臟修復(fù)效果明顯。

表1 網(wǎng)箱拌喂產(chǎn)品A后肝臟修復(fù)效果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，投喂產(chǎn)品A組增重、增重率、吃料量、餌料系數(shù)均明顯優(yōu)于對(duì)照組，說(shuō)明魚(yú)體肝臟的修復(fù)有利于魚(yú)體的生長(zhǎng)。

3 討論

肝臟是魚(yú)體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)最核心的器官之一，當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)代謝紊亂和病變時(shí)，肝臟狀態(tài)也隨之發(fā)生變化，如肝臟由光滑有彈性轉(zhuǎn)變?yōu)槎垢癄睢⒁状嗟龋伾韶i肝紅轉(zhuǎn)變?yōu)辄S肝、花肝、白肝、綠肝等（黃春紅等，2019；汪開(kāi)毓等，2001）。在加州鱸養(yǎng)殖過(guò)程中，肝臟的顏色是否紅潤(rùn)通常是評(píng)價(jià)魚(yú)體是否健康的依據(jù)之一。在本研究中，我們選擇肝臟條件很差的魚(yú)類(lèi)進(jìn)行了兩組不同維度的肝臟修復(fù)實(shí)驗(yàn)，一組是縱向比較實(shí)驗(yàn)，另一組是橫向比較實(shí)驗(yàn)，兩組實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)損傷的肝臟在使用產(chǎn)品A后明顯變得紅潤(rùn)，說(shuō)明產(chǎn)品A對(duì)加州鱸的肝臟有明顯的修復(fù)效果。同時(shí)，我們注意到兩組肝臟修復(fù)實(shí)驗(yàn)的修復(fù)時(shí)間明顯不同，一組14d完全修復(fù)，另一組7d完全修復(fù)，說(shuō)明用藥后，肝臟修復(fù)的時(shí)間并非是固定不變的。這可能與肝臟的損傷程度、天氣的變化以及水質(zhì)等有關(guān)，在多次的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)肝臟損傷程度越輕，修復(fù)的時(shí)間越短，反之越長(zhǎng)。同時(shí)，好的天氣條件好和水質(zhì)條件也會(huì)加速肝臟的修復(fù)。

同肝臟一樣，胰腺也是魚(yú)體重要的消化腺和內(nèi)分泌腺，在魚(yú)類(lèi)的消化和吸收、血糖調(diào)節(jié)方面發(fā)揮著重要的作用，其分布在硬骨魚(yú)體內(nèi)非常復(fù)雜，大致分為4種類(lèi)型：緊湊型、散布致密型、彌散型和彌漫混合型（熊洪林和王志堅(jiān)，2009）。本研究中，切片結(jié)果表明胰腺埋于肝臟中，與肝臟交替分布，依據(jù)熊洪林等（2009）的分類(lèi)，加州鱸胰腺屬于迷漫混合型，與蝦蟹的胰腺的分布類(lèi)似，這一結(jié)果為加州鱸肝胰臟的研究奠定了基礎(chǔ)。此外，據(jù)了解，嗜酸性小體與細(xì)胞的凋亡有關(guān)。本研究中，紅潤(rùn)的肝臟中胰腺細(xì)胞分布均均；粉紅色的肝臟中胰腺出現(xiàn)部分腫大，腫大部位發(fā)現(xiàn)大量嗜酸性小體；在發(fā)黃的肝臟中，胰腺完全消失；而肝臟組織中并未發(fā)現(xiàn)明顯異常。由此，我們推測(cè)在加州鱸營(yíng)養(yǎng)性的肝損傷過(guò)程中，首先損傷的可能是埋藏于肝組織中的胰腺組織，胰腺組織的損傷影響?hù)~(yú)體對(duì)脂質(zhì)、糖類(lèi)的吸收和代謝，增加肝臟的負(fù)擔(dān)，從而造成肝臟代謝紊亂，引發(fā)肝臟顏色發(fā)生改變。黃春紅等（2019）發(fā)現(xiàn)不同肝臟等級(jí)的平均脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)不同，且隨著肝臟等級(jí)的增加（顏色的改變）平均脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著增加，與本研究結(jié)果一致。

長(zhǎng)期的魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肝臟與腸道之間存在一種“鐵”關(guān)系，魚(yú)體肝臟分泌的膽汁會(huì)隨胰腺分泌的胰液一起流到腸道里，幫助腸道消化食物、維護(hù)腸道菌群的組成和腸道屏障的完整性，食物消化后的各種產(chǎn)物包括內(nèi)毒素通過(guò)腸道粘膜上皮細(xì)胞進(jìn)入血液，通過(guò)門(mén)靜脈流進(jìn)肝臟進(jìn)行解毒。肝臟與腸道之間形成一個(gè)循環(huán)，互相影響，研究者們稱(chēng)之為“肝腸軸”。本研究發(fā)現(xiàn)，肝臟修復(fù)組的增重、增重率、吃料量、餌料系數(shù)均優(yōu)于未修復(fù)組，說(shuō)明肝臟的修復(fù)可能促進(jìn)了“肝腸軸”的良性循環(huán)，進(jìn)而有利于魚(yú)體生長(zhǎng)。

4 結(jié)論

隨著養(yǎng)殖集約化的不斷加強(qiáng)，魚(yú)類(lèi)肝臟問(wèn)題已經(jīng)成為養(yǎng)殖成功的限制因素之一。本研究對(duì)中草藥產(chǎn)品A的護(hù)肝效果進(jìn)行兩種不同維度的檢驗(yàn)，均發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品A對(duì)加州鱸魚(yú)的肝臟修復(fù)有明顯效果，并發(fā)現(xiàn)肝臟的修復(fù)時(shí)間可能與肝臟的損傷情況、水質(zhì)和天氣條件有關(guān)。肝臟切片結(jié)果表明加州鱸魚(yú)胰臟分布屬于迷漫混合型，與蝦蟹胰臟分布類(lèi)似，同時(shí)我們推測(cè)營(yíng)養(yǎng)性肝損傷可能最先損傷的是埋藏于肝臟中的胰臟。此外肝臟的修復(fù)可能有利于促進(jìn)“肝腸軸”的良性循環(huán)。