血清神經絲輕鏈蛋白水平與癲癇患者認知功能障礙的相關性

吳盈盈 劉時華 鐘 平

安徽醫科大學附屬宿州醫院，安徽 宿州 234000

癲癇（epilepsy，EP）是一種常見的慢性神經系統疾病，其特征是反復發作，常伴隨有其他并發癥，如認知功能障礙、焦慮抑郁狀態［1-2］。認知功能障礙是癲癇最常見的并發癥，70%～80%的癲癇患者存在認知功能障礙［3］。在過去的十余年中，神經絲（neurofilaments，Nfs）已成為許多臨床前和臨床研究的對象，且被證明是一些神經疾病變性或急性損傷的生物標志物［4］。正常情況下，軸突會釋放低水平的血清神經絲輕鏈蛋白（neurofilament light chain protein，NFL），當神經軸突受損時，NFL 可能會大量釋放到組織液中，隨后擴散到腦脊液（cerebrospinal fluid，CSF）中［5］，因此，其代表了一種神經損傷生物標志物［6］。研究發現血清中NFL 水平與腦脊液中NFL 水平呈正相關，由于NFL進入腦脊液并透過血-腦屏障進入血液，使外周血中NFL 水平也升高［7-8］。既往研究發現NFL在神經系統變性疾病、創傷性疾病、腦血管病中升高［6，9-11］。反復的癲癇發作是否也會引起血清中NFL水平升高，國內尚無相關報道。NFL 在預測阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s diseases，AD）患者認知能力下降方面具有實用價值［12］，而目前尚無關于血清NFL與癲癇相關認知功能障礙的研究。本研究旨在探討血清NFL水平與癲癇及癲癇相關認知功能障礙的相關性。

1 資料及方法

1.1 研究對象收集2020-08—2022-08 就診于安徽醫科大學附屬宿州醫院神經內科門診及住院的50例癲癇患者（實驗組）的臨床資料，男31例，女19例，年齡（32.96±11.65）歲；選取年齡、性別相匹配的健康對照30 例為對照組，其中男18 例，女12 例，年齡（34.1±11.18 歲）；癲癇組與健康對照組性別、年齡比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入及排除標準入組標準：（1）符合癲癇診斷標準；（2）年齡≥18歲；（3）72 h內無癲癇發作；（4）顱腦MRI提示無明顯病灶；（5）采用蒙特利爾認知評估量表（Montreal cognitive assessment，MoCA）評估入組受試者，MoCA 滿分30 分，MoCA<26 分，納入認知障礙組；MoCA≥26 分，納入非認知障礙組；（6）患者或家屬簽署研究知情同意書。排除標準：（1）合并嚴重臟器功能障礙；（2）顱內占位、腦損傷所致繼發性癲癇；（3）合并AD 等影響認知的疾病；（4）合并有其他神經系統疾病，如腦血管病、神經系統退行性疾病、神經系統變性病、周圍神經病變等；（5）無法配合完成量表評估者。

1.3 資料采集采集患者病史，包括一般情況（年齡、性別、受教育年限）、現病史（病因、起病年齡、病程、發作頻率、發作持續時間、發作時意識狀態等）、既往史、家族史、治療情況（服用藥物種類數量）。

1.4 方法采取清晨空腹安靜狀態下靜脈血5 mL，4 h 內4 ℃條件下3 000 r/min 離心15 min 后取出血清，并凍存于—80 ℃冰箱備用。采用酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測試劑盒測定血清中NFL水平濃度。酶標儀450 nm處讀數，測定各孔光密度（optical density，OD）值。

1.5 統計學分析使用SPSS 22.0、GraphPad prism 8 軟件進行統計學分析。對服從正態分布的計量資料用均數±標準差（±s）表示，組間比較使用單因素方差分析。對不符合正態分布的計量資料以中位數（四分位數）［M（Q1，Q3）］，組間比較使用Krus?kal-Wallis 檢驗。計數資料比較采用卡方檢驗。Pearson相關分析探究血清NFL水平與MoCA評分的相關性。對癲癇患者的血清NFL水平進行受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析，計算曲線下面積（area under curve，AUC），以靈敏度和特異度評估診斷性能，分析血清NFL 水平預測癲癇患者發生認知功能障礙的價值。多因素logistic回歸分析癲癇患者發生認知功能障礙的影響因素。檢驗標準α=0.05。

2 結果

2.1 3組血清NFL水平相關性分析癲癇認知功能障礙組血清NFL 的OD 值［0.345（0.272，0.418）］高于癲癇非認知功能障礙組［0.233（0.195，0.270）］和健康對照組［0.218（0.185，0.252）］，差異有統計學意義（Z=11.01，P=0.004）。見圖1。

圖1 3組血清NFL水平的OD值分析結果Figure 1 The OD value analysis of serum NFL level in three groups

2.2 癲癇患者血清NFL 水平與MoCA 評分的相關性分析采用Pearson 相關分析，癲癇患者血清NFL水平與MoCA 評分之間存在中等負相關（r=—0.492，P<0.001）。

2.3 血清NFL 水平預測癲癇患者發生認知功能障礙的價值血清NFL水平以0.326為最佳截斷值，約登指數為0.44，預測癲癇患者發生認知功能障礙的AUC為0.7024，靈敏度為0.56，特異度為0.88。見圖2。

圖2 血清NFL 水平預測癲癇患者發生認知功能障礙的ROC曲線Figure 2 ROC curve of serum NFL level predicting cognitive dysfunction in epilepsy patients

2.4 癲癇患者發生認知功能障礙影響因素的多因素logistic回歸分析以癲癇患者是否發生認知功能障礙為因變量，發作時意識狀態、發作形式、近1 a發作頻率、每次發作時間、服藥種類數量及血清NFL為自變量，納入模型進行多因素logistic回歸分析，結果顯示服藥種類數量及血清NFL是癲癇患者發生認知功能障礙的影響因素。見表1。

表1 癲癇認知功能障礙影響因素的多因素logistic回歸分析結果Table 1 Logistic regression analysis results of influencing factors of epilepsy cognitive dysfunction

3 討論

癲癇是以反復癲癇發作為突出表現的慢性腦?。?3］。癲癇往往并不單獨存在，超過一半的癲癇患者合并一個或者更多的并發癥。認知功能障礙抑郁癥是癲癇常見的并發癥，其中認知功能障礙的發生機制尚未完全闡明［14］。Nfs 特異性地表達于神經元中，是神經元細胞骨架蛋白的重要組成成分，根據相對分子質量Nfs 又被分為輕、中、重三種類型，在有髓鞘的神經元軸突中異常表達，并在細胞骨架中起著與其他纖維建立交叉橋接的作用。Nfs 主要分布于神經元的有髓軸突內，在細胞核和樹突含量較少。Nfs 主要影響軸突直徑，髓鞘形成和傳導速度。NFL 是反映神經元損傷的一種生物標志物。對于NFL 水平的既往研究主要集中于帕金森病、運動神經元病、腦血管病、阿爾茲海默病、額顳葉癡呆等慢性疾病中，發現在這些疾病中血清和或腦脊液中NFL 水平明顯高于健康對照者，伴有認知功能障礙的患者亦高于非認知功能障礙患者［15-17］。國內尚無NFL 在癲癇方面的研究，而國外關于癲癇與血清或腦脊液NFL水平研究甚少。國外已有的極少數研究發現在自身免疫性腦炎后癲癇、耐藥性癲癇及癲癇持續狀態患者中血清NFL水平較正常對照組升高［18-19］。本研究發現癲癇患者的血清NFL水平高于健康對照組，與既往研究相一致。研究發現單次癇樣發作后NFL水平會一過性升高［20-21］。而本研究探討癲癇的慢性過程所引起的NFL 變化情況，故為排除單次癲癇樣發作引起NFL 水平一過性升高的干擾，在納入標準中要求入組的癲癇患者在72 h 內無癇樣發作，以便證明NFL水平的升高是由于反復癲癇發作所致的慢性過程而非單次癇樣發作。

血清NFL水平與癲癇相關認知功能障礙的相關性分析，國內外均無相關研究，本研究為首次探究血清NFL水平與癲癇相關認知功能障礙的關系。本研究結果顯示，癲癇認知功能障礙組血清NFL 水平高于癲癇非認知功能障礙組，表明血清NFL 水平與癲癇認知功能之間具有一定相關性，推測NFL 可能會導致認知功能障礙。進一步對血清NFL 水平與MoCA 評分進行相關性分析，發現血清NFL 水平與MoCA 評分呈負相關，說明NFL 水平越高，認知功能越差，NFL 水平越低，認知功能越好。NASS 等［16］發現疾病隨著NFL 水平的升高而進展，隨著NFL 水平的下降而改善。研究發現癲癇患者的認知功能損害是可逆的［2］。對于存在認知功能障礙的癲癇患者是否可通過降低NFL 水平來改善認知功能，目前國內外均無相關研究，需進一步探討。

此外本研究多因素logistic 回歸分析結果顯示，聯合用藥種類數量及血清NFL水平是癲癇患者發生認知功能障礙的影響因素，通過控制此類影響因素來延緩認知功能惡化。另外，本研究ROC 曲線分析結果顯示，血清NFL 水平對癲癇患者發生認知功能障礙具有較高的預測價值，血清NFL 水平可以作為癲癇患者發生認知功能障礙的生物標志物。

神經絲輕鏈蛋白是癲癇所致認知功能障礙中的一種介質，癲癇認知功能障礙患者血清NFL 水平高于癲癇非認知功能障礙患者及健康對照，血清NFL水平與認知功能之間存在負相關；血清NFL 對癲癇患者發生認知功能障礙具有一定的預測價值；服藥種類數量多、血清NFL 水平升高的癲癇患者發生認知功能障礙的風險較大。但是由于本研究樣本量較少，需增加樣本量進一步驗證血清NFL 水平對癲癇認知功能障礙的影響。