局部晚期宮頸癌患者血清雙腎上腺素樣激酶1、黏蛋白1的表達及與放療預后的關系

于曉，白睿華，李修煒，成慧君#

鄭州大學附屬腫瘤醫院/河南省腫瘤醫院1婦瘤科，2病理科，鄭州 450000 3周口市中心醫院放療科，河南 周口 466000

宮頸癌是發生在子宮頸的惡性腫瘤，在女性生殖系統惡性腫瘤中發病率最高，嚴重威脅女性健康[1]。宮頸癌起病隱匿，早期無特異性癥狀，多數患者就診時已處于中晚期，使得治療難度增加，患者易復發，預后較差。局部晚期宮頸癌具有腫瘤體積大、分化程度低、淋巴結易發生遠處擴散和轉移的特點，放療是目前臨床治療局部晚期宮頸癌的常用方法[2-3]。放療可有效降低宮頸癌局部復發率和遠處轉移率，但放療預后受到多種因素影響，因此尋找可有效預測患者預后的指標對于臨床治療方案的選擇和預后改善具有重要意義[4-5]。雙腎上腺素樣激酶1（doublecortin like kinase 1，DCLK1）可參與調控神經元形成和遷移，可與胰腺上皮內瘤變特異性標志物協同表達增加胰腺癌發病風險，具有原癌基因作用[6]。黏蛋白1（mucin 1，MUC1）是一種高分子蛋白，存在于多種器官上皮細胞中，可參與細胞間信號轉導，但在腫瘤中呈異常表達，可以使蛋白出現糖基化不全或畸形糖基化，是一種腫瘤特異性抗原[7]。目前，有關DCLK1、MUC1 表達水平與局部晚期宮頸癌患者放療預后的研究較少。基于此，本研究探討局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平及其與臨床特征和放療預后的關系，以期為臨床治療局部晚期宮頸癌提供參考依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月至2019年4月于鄭州大學附屬腫瘤醫院就診的局部晚期宮頸癌患者的臨床資料。納入標準：①經病理學檢查證實為宮頸癌；②確診宮頸癌前未進行手術治療及放化療；③生存時間﹥3 個月；④年齡28～70 歲。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并子宮內膜異位癥、黏膜下子宮肌瘤等子宮疾病；③合并肝、腎功能障礙及免疫系統嚴重疾病；④接受過激素藥物治療；⑤精神或神經疾病，存在認知功能障礙。根據納入、排除標準，共納入102 例局部晚期宮頸癌患者，年齡28～70歲，平均（48.36±4.24）歲；淋巴結轉移57 例，無淋巴結轉移45 例；臨床分期：Ⅱ期55 例，Ⅲ期47 例；分化程度：低分化36 例，中分化29 例，高分化37 例。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意。

1.2 研究方法

收集并記錄患者臨床資料，包括年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移情況、臨床分期、分化程度、病理類型。采集患者空腹靜脈血8 ml，將樣本保存在抗凝管中，以10 cm 離心半徑3500 r/min 離心15 min，取上清液保存在-80 ℃環境中。采用酶聯免疫吸附法按照試劑盒說明書測定血清DCLK1、MUC1 水平。采用雙抗體夾心法，向100 μl 標準品和待測樣品中加入人DCLK1、MUC1 抗體，反應90 min 后棄掉孔內液體，再向孔內滴加100 μl 生物素化抗體工作液，反應60 min，洗滌3次后，滴加100 μl辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）結合物工作液，反應30 min，再滴加底物液和終止液，應用全自動酶標儀在450 nm 波長下測量光密度值以獲取血清DCLK1、MUC1水平，檢測均在37 ℃環境下進行。

1.3 觀察指標

①分析化療前局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平與臨床特征的關系。②比較放療前后局部晚期宮頸癌患者的DCLK1、MUC1 表達水平。③分析化療前DCLK1、MUC1表達水平與臨床療效的關系。臨床療效判定標準：病灶和臨床癥狀完全消失為完全緩解；病灶基本消失，臨床癥狀基本緩解為部分緩解；病灶穩定，臨床癥狀基本改善為疾病穩定；病灶無明顯改善甚至出現新病灶，臨床癥狀無改善甚至加重為疾病進展。④分析化療前DCLK1、MUC1 表達水平與局部晚期宮頸癌患者預后的關系。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計軟件進行數據分析。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（）表示，多組間比較采用F檢驗，兩組比較采用t檢驗；計數資料以例數表示；以P﹤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同臨床特征局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達水平的比較

不同年齡、病理類型局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）；不同腫瘤直徑、淋巴結轉移情況、臨床分期和分化程度局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平比較，差異均有統計學意義（P﹤0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達水平的比較

2.2 放療前后DCLK1、MUC1 表達水平的比較

放療后，局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平均明顯低于放療前，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。（表2）

表2 放療前后局部晚期宮頸癌患者DCLK1、MUC1 表達水平的比較

表2 放療前后局部晚期宮頸癌患者DCLK1、MUC1 表達水平的比較

時間放療前（n=102）放療后（n=102）t值P值DCLK1（ng/ml）3.60±1.57 2.76±1.43 3.99<0.01 MUC1（U/ml）25.35±3.12 21.71±2.76 8.825<0.01

2.3 不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達水平的比較

不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平比較，差異均有統計學意義（P﹤0.01），且放療前局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 水平均隨著疾病發展逐漸升高。（表3）

表3 不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達水平的比較

表3 不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達水平的比較

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2.4 不同預后局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達水平的比較

3年生存局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 水平均明顯低于1年生存患者，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。（表4）

表4 不同預后局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達水平的比較

表4 不同預后局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達水平的比較

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3 討論

宮頸癌是危害女性生命健康的惡性腫瘤之一，在35～40 歲和60～64 歲女性中發病率較高，主要與人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染和不良生活習慣有關，近年來隨著生活方式的改變，宮頸癌的發病率逐漸升高且有年輕化趨勢，嚴重威脅女性生命健康[8-9]。宮頸癌發病隱匿、早期無特異性癥狀，有50%以上的患者就診時已處于局部晚期，患者常因復發或轉移導致生活質量較差[10-11]。目前，臨床治療局部晚期宮頸癌患者常應用手術與放療結合的方式，但治療效果受到放療敏感性、耐藥性等因素的影響[12-13]。因此，尋找可以有效預測放療預后的指標，對于臨床治療方案選擇和預后改善具有重要意義。

有研究顯示，宮頸癌的發生發展與腫瘤相關基因的異常表達相關[14]。DCLK1 可參與骨架形成并調節細胞運動，在胃癌、直腸癌組織中呈異常高表達[15-16]。MUC1 是一種跨膜蛋白，在多種組織器官中均有表達[17]。MUC1 表達水平在腫瘤細胞中明顯升高，可有效調控腫瘤細胞增殖。此外，MUC1還可參與腫瘤免疫逃逸過程，目前以MUC1 為靶點的腫瘤治療已成為研究熱點[18]。本研究結果顯示，不同年齡、病理類型局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）；不同腫瘤直徑、淋巴結轉移情況、臨床分期和分化程度局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平比較，差異均有統計學意義（P﹤0.05）。表明血清DCLK1、MUC1 表達水平與局部晚期宮頸癌患者腫瘤發生發展具有密切聯系，DCLK1、MUC1 高表達可提示腫瘤惡性程度較高。放療后局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平均明顯低于放療前，表明放療可有效控制腫瘤進展，患者血清DCLK1、MUC1 水平降低，通過監測患者DCLK1、MUC1 水平可以判斷疾病轉歸，為臨床治療提供參考。對患者放療效果和血清DCLK1、MUC1 表達水平進行分析，結果顯示，不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平比較，差異均有統計學意義（P﹤0.01），且放療前局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 水平均隨著疾病發展逐漸升高。提示DCLK1、MUC1 高表達可能與患者的不良預后有關。可能是因為DCLK1、MUC1 表達水平與放療敏感性密切相關[19-20]。放療可對腫瘤細胞增殖產生抑制作用，抑制腫瘤細胞向周圍侵襲，放療前DCLK1、MUC1 水平較低，患者對放療的敏感性較好，臨床治療效果也較好，可取得較好預后。進一步研究結果顯示，3年生存局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 水平均明顯低于1年生存患者，表明DCLK1、MUC1 水平與患者預后有關，可作為預測患者預后的生物標志物。通過對放療前后患者血清DCLK1、MUC1 表達水平進行檢測，可以有效評估放療效果從而改進治療方案，有效改善患者預后。

綜上所述，局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達水平與腫瘤直徑、淋巴結轉移情況、臨床分期和分化程度有關，放療前血清DCLK1、MUC1 水平與患者臨床療效和預后密切相關，可作為判斷腫瘤轉歸和評估放療預后的重要指標。