石菖蒲單體ɑ-細辛醚對耐藥性癲癇大鼠的作用機制研究

馮 茜,董 波,吳樹宏,韋小鳳,唐秋燕,楊慧中,楊旭紅

(1.成都中醫藥大學,四川 成都 610075;2.成都市第七中學,四川 成都 610021;3.成都中醫藥大學附屬醫院,四川 成都 610072)

癲癇(Epilepsy ,EP)是一種多種病因引起的慢性腦部疾病,主要特點是大腦神經元反復、過度地同步化放電并導致發作性、突然性、短暫性的腦功能紊亂,表現為臨床各型EP發作,伴有腦電圖癇性波及相關實驗室指標異常改變[1]。其致殘率高、病程長,因此成為當前世界范圍的醫療難題及社會公共衛生問題。據世界衛生組織報告,全世界約有7 000萬EP患者[2]。目前我國EP總患病率為7‰,且每年以40萬人次的速度增加[3]。盡管目前的抗癲癇藥物(Anti epileptic drugs,AEDs)如苯巴比妥(Pentobarbital,PB)、卡馬西平(Carbamazepine ,CBZ)、左乙拉西坦(Levetiracetam, LEV)等具有較好的抗癇作用,但長期服用可產生中樞神經系統及肝腎功能損害、血小板降低等副作用[4]。此外,仍有約30%的患者對AEDs反映不佳,被歸類為耐藥性癲癇(Drug-resistant epilepsy, DRE)[5]。DRE的主要特征是EP患者對AEDs產生不同程度的耐藥性[6]。因此,仍需更多研究進一步探索副作用小、療效更加穩定的抗癲癇藥物。

中醫藥治療EP療效顯著、毒副作用小,在臨床中廣泛使用[7]。中醫中雖無與DRE相對應的病名,但從病機分析可將其歸于“癇病”范疇,《醫學綱目·癲癇》曰:“癲癇者,痰邪逆上也”,《丹溪心法·癇》云:“無非痰涎壅塞,迷悶孔竅”。本病主要病機是元神失控,清竅蒙蔽,因此,DRE的治療以醒腦開竅,豁痰定癇[8]為主。石菖蒲性溫,主歸心經和胃經,具有開竅豁痰、醒神益智的功效。現代藥理研究發現,石菖蒲提取液、醇提物、揮發油、除去揮發油的水提取液可減少驚厥次數,縮短持續時間,降低死亡率,總揮發油為其鎮靜、催眠、抗驚厥的主要部位[8]。α-細辛醚作為石菖蒲的主要活性成分之一,是石菖蒲發揮醒腦開竅和鎮靜、抗驚厥作用的主要活性成分[9],具有穿透血腦屏障的能力,對谷氨酸能神經傳遞有負性調節作用[10]。能抑制 NF-κB 信號通路,減輕小膠質細胞介導的神經炎癥,降低促炎介質TNF-α、IL-1β的產生[11-14],能明顯下調模型大鼠海馬與皮層中P-gp與Mdr1a1mRNA的表達,扭轉P-gp介導的癲癇耐藥性[15],而且在臨床上得到了廣泛應用[16]。這表明ɑ-細辛醚對于治療DRE具有明顯潛力。

然而,ɑ-細辛醚對于DRE的抗癇作用機制尚缺乏相關研究,本課題組在前期研究中發現石菖蒲能通過下調PTZ癲癇模型大鼠海馬炎癥因子的表達修復血腦屏障,從而減輕癲癇發作[17]。在預實驗中發現ɑ-細辛醚能延長DRE大鼠發作潛伏期,降低發作級別,縮短發作持續時間。因此,為進一步明確ɑ-細辛醚對DRE的抗癇效果及可能存在的機制,實驗采用SD大鼠腹腔注射PTZ后灌胃CBZ建立DRE模型,擬通過觀察ɑ-細辛醚對DRE大鼠海馬內炎性因子的表達情況,對血腦屏障(Blood Brain Barrier,BBB)調控作用及多藥耐藥基因的調控,揭示ɑ-細辛醚治療DRE的部分作用機制,以期為ɑ-細辛醚在臨床上治療耐藥性癲癇提供理論依據和進一步研究提供支持。

1 材料

1.1 動物及飼養

60只SD大鼠,SPF級,雄性,6～8周,體質量(200±20)g,購自成都恩斯維爾生物科技有限公司(批號:SCXK川2019-028),實驗動物使用許可證(SYXK川2020-225),實驗動物常規飼養,自由飲食,室溫20～22℃,相對濕度40%～45%,明暗交替12h,符合中華人民共和國國家科學技術委員會頒布的《動物管理條例》。

1.2 藥物及試劑

卡馬西平片(上海復旦復華藥業有限公司,批號:200911)、戊巴比妥鈉(北京化學試劑廠,批號:20111123)、戊四氮(上海一基實業有限公司,批號:P312752);ɑ-細辛醚(上海源葉生物科技有限公司,批號:Z30M9N57243,純度:99.9%);蛋白酶和磷酸化酶抑制劑混合物(碧云天生物技術有限公司,貨號:P1050)、BCA蛋白濃度測定試劑盒(碧云天生物技術有限公司,貨號:P0010)、RIPA裂解液(碧云天生物技術有限公司,貨號:P0013B)、PMSF(碧云天生物技術有限公司,貨號:ST506)、轉移生長因子-β1(Transforming growth factor-beta1,TGF-β1)抗體(英國abcam,貨號:ab179695)、磷酸化細胞信號轉導分子2(phospho-Smad2,P-smad2)抗體(英國abcam,貨號:ab188334)、白細胞介素-1β(Interleukin-1beta,IL-1β)試劑盒(上海酶聯,貨號ml037361-J)、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)試劑盒(上海酶聯,貨號ml037361-J)、多藥轉運蛋白-P糖蛋白(P-glycoprptein, P-gp)試劑盒(上海酶聯,貨號ml654884-J)、812環氧樹脂包埋套裝(北京中鏡科儀技術有限公司,貨號 GP18010)、醋酸雙氧鈾(北京中鏡科儀技術有限公司,貨號GS02624);檸檬酸鉛染液(北京中鏡科儀技術有限公司,貨號 GZ02616,);四氧化鋨(德國徠卡,貨號 GP18456)。

1.3 儀器

DW-2000腦立體定位儀(成都泰盟科技有限公司)、RM6240C型多道生物信號采集處理系統(成都儀器廠)、JEM-1400FLASH透射電子顯微鏡(日本電子JEOL)、EMTP徠卡組織處理機(德國徠卡)、EM KMR3玻璃制刀機(德國徠卡)、EM UC7超薄切片機(德國徠卡)、G50組織研磨器(卡尤迪生物科技宜興有限公司)、SCIENTZ-ⅡD超聲波細胞粉碎機(寧波新芝生物科技股份有限公司)、H1850R冷凍離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)、K30干式恒溫器(杭州奧盛儀器有限公司)、MULTISKAN GO全波長酶標儀(Thermo Scientific,美國)、MINI-P4/MT-BLOT MOD/PP BAS垂直電泳轉印系統(BIO-RAD,美國)、Champ Chemi 610全自動化學發光凝膠成像系統(北京賽智創業科技有限公司)。

2 方法

2.1 造模方法

60只SD大鼠適應性飼養7d后,按照隨機數表法選取50只大鼠隔日1次腹腔注射亞劑量PTZ 40mg·kg-1[18-19],按照Racine[20]標準對大鼠進行分級:Ⅰ級,濕狗樣顫動,面部肌肉痙攣及抽動(包括眨眼、動須、節律性咀嚼等);Ⅱ級,Ⅰ級基礎上加頸部肌肉痙攣(如節律性點頭);Ⅲ級,Ⅱ級基礎上加前肢痙攣; Ⅳ級,站立并伴有雙側前肢痙攣; Ⅴ級,Ⅳ級基礎上加身體向后倒下、失去平衡、四肢抽動、持續站立、傾倒。其中,大鼠若出現持續Ⅴ級EP發作,給予2%戊巴比妥鈉0.5mL緩解發作,連續3次或3次以上到V級發作即被認定為達到EP點燃標準,腹腔注射PTZ 15次,共造模30d。耐藥性篩選參考國外報道[21]并結合本課題研究需要進行改良,對一種抗癲癇藥無效的患者可能即是DRE,即對PB 耐藥的患者對苯妥英鈉(Phentoin,PHT)及 CBZ 也耐藥,PB、PHT 或 CBZ 是作用機制完全不同的一線抗癲癇藥,提示耐藥性可延伸到其他不同作用機制的藥物[22],故本實驗采CBZ對PTZ點燃模型進行耐藥性篩選。采用CBZ 0.125g·kg-1灌胃,灌胃后1h腹腔注射PTZ進行耐藥性篩選,連續出現3次V級發作被認定為DRE大鼠模型,耐藥性篩選試驗持續7d。造模過程中有19只大鼠因驚厥過度死亡,有3只大鼠未達到點燃標準,棄用。

2.2 分組及干預

造模成功后,SD大鼠按照隨機數表法分為3組:模型組(10只)、ɑ-細辛醚(50mg/kg)高劑量組(9只)、ɑ-細辛醚(25mg/kg)低劑量組(9只),另取10只SD大鼠為正常組。為統計數據一致,正常組、模型組各棄用一只大鼠。實驗中模型動物對AEDs耐受,故受試藥物不采用西藥對照組。空白組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃,ɑ-細辛醚高劑量和ɑ-細辛醚低劑量組給予ɑ-細辛醚溶液灌胃,每日1次,連續給藥3周。在給受試藥期間每7d給予PTZ維持點燃。3周后處死大鼠。

2.3 檢測指標及方法

2.3.1 各組大鼠腦電圖測量[23]造模后7d,每組隨機選取4只大鼠進行腦電圖測量,以2%戊巴比妥45mg·kg-1麻醉后,固定于腦立體定位儀上,備皮,消毒頭皮,按《大鼠腦立體定位圖譜》定位。植入電極:記錄電極(海馬CA1區):后囟門(3.3～3.7mm),旁側(2.5mm),硬膜下(3.0～3.5mm);參考電極:前囟門4.0mm,旁側2.0mm;頸部肌肉作為接地電極,縫合固定。將記錄電極、參考電極和接地線連接到小型三針插頭上,牙科水及牙科水泥固定。腹腔注射PTZ后,使用鱷魚夾將電極連接到RM6240C多通道生物信號采集和處理系統,記錄皮層腦電圖,走紙速度為30mm/s,濾波器為35Hz,增益為10μV/mm,時間常數為0.1s,使用每組腦電圖的描記,每只大鼠腦電記錄時間為30min。

2.3.2 樣本采集 實驗結束后,以2%戊巴比妥45mg·kg-1麻醉后解剖,通過下腔靜脈快速灌注生理鹽水,待灌洗液清澈后,開顱取出大腦,取大鼠雙側海馬組織,置于-80℃冷凍管中保存備用。

2.3.3透視電鏡觀察各組大鼠海馬組織BBB改變[24]大鼠海馬用3%戊二醛預固定,1%四氧化鋨再固定,丙酮逐級脫水,Ep812包埋超薄切片,乙酸鈾和檸檬酸鉛染色,JEM-1400FLASH透射電子顯微鏡觀察。

2.3.4 Elisa檢測各組大鼠海馬組織中TNF-α、IL-1β、P-gp蛋白表達情況[25]取出保存在-80℃的海馬組織樣品,在4℃的冰箱中解凍。嚴格按照TNF-α、IL-1β、P-gp Elisa試劑盒的說明進行操作。

2.3.5 WB檢測各組大鼠海馬組織中TGF-β1、P-samd2蛋白表達情況[26]取100mg大鼠海馬組織,加入含蛋白酶和磷酸化酶抑制劑的RIPA混合裂解液,冰上勻漿,4℃裂解1h后離心(12 000r/min,5min),收集上清液;BCA法測定總蛋白濃度;每孔以20μg蛋白上樣,100V電泳,100V濕轉;5%脫脂牛奶封閉2h,加入TGF-β1、P-samd2一抗(1∶1 000)在4℃下孵育過夜;加入辣根過氧化物酶標記的二抗(1∶10 000)室溫孵育1h;ECL顯影,用自動化學發光凝膠成像系統捕捉圖像。

2.4 統計學方法

3 結果

3.1 各組大鼠腦電圖檢測及癲癇發作情況

正常組腦電圖無尖峰波和棘波出現,與正常組相比,模型組大鼠腦電圖出現典型癲癇波,以尖峰波和棘波為主,波幅明顯上升,且EP發作潛伏期短(P<0.05);與模型組相比,ɑ-細辛醚配伍高劑量組與ɑ-細辛醚低劑量組腦電圖波幅明顯降低,潛伏期明顯延長(P<0.05);ɑ-細辛醚配伍高劑量組與ɑ-細辛醚低劑量組之間差異無統計學意義。詳見圖1,圖2,表1。

注:A:正常組;B:模型組;C:ɑ-細辛醚高劑量組;D:ɑ-細辛醚低劑量組。

注:A:Ⅱ級:面陣攣伴節律性點頭;B級:Ⅲ級:面陣攣伴前肢陣攣;C:Ⅳ級:前肢陣攣、后肢站立;D:Ⅴ級:全身緊張伴跌倒發作。

表1 各組大鼠癲癇發作總時間和發作等級比較

3.2 透視電鏡觀察各組大鼠海馬組織BBB變化

正常組大鼠BBB結構完整清晰,可見神經細胞,神經元細胞核大而圓,核仁、細胞膜清楚,BBB微血管內皮細胞層、基底層結構正常;與正常組相比,模型組大鼠BBB微血管內皮細胞中線粒體腫脹,其嵴有斷裂、溶解;血管腔內有紅血球堵塞,血管周隙增寬,細胞核蛋白和胞漿蛋白成分松散、丟失,粗面內質網及核糖體腫脹,部分溶解;與模型組相比,ɑ-細辛醚高劑量組與ɑ-細辛醚低劑量組BBB微血管內皮細胞中各細胞器形態結構較正常,僅見少量線粒體有輕度腫脹,血管內皮細胞間見完整的緊密連接結構,血管周隙輕度增寬。詳見圖3。

注:A:正常組;B:模型組;C:ɑ-細辛醚高劑量組;D:ɑ-細辛醚低劑量組。

3.3 Elisa檢測各組大鼠海馬組織TNF-α、IL-1β蛋白表達比較

與正常組相比,模型組TNF-α、IL-1β蛋白標示量顯著升高(P<0.05);與模型組相比,ɑ-細辛醚高劑量組、ɑ-細辛醚低劑量組TNF-α、IL-1β表達顯著降低(P<0.05),ɑ-細辛醚高劑量組較ɑ-細辛醚低劑量組TNF-α、IL-1β表達稍有下降(P>0.05),差異無統計學意義(*P<0.05,nsP>0.05)。詳見圖4。

注:模型組與正常組相比,P<0.05;ɑ-細辛醚高劑量組、ɑ-細辛醚低劑量組與模型組相比P<0.05;ɑ-細辛醚高劑量組與ɑ-細辛醚低劑量組相比,P>0.05。

細胞核(Nucleus,N);線粒體(Mitochondria,Mi);粗面內質網(Rough Endoplasmic Reticulum,RER)。

3.4 WB檢測各組大鼠海馬組織TGF-β1、P-smad2蛋白表達比較

與正常組相比,模型組TGF-β1、P-smad2蛋白標示量顯著升高(P<0.05);與模型組相比,ɑ-細辛醚高劑量組、ɑ-細辛醚低劑量組TGF-β1、P-smad2表達顯著降低(P<0.05),ɑ-細辛醚高劑量組較ɑ-細辛醚低劑量組TGF-β1、P-smad2表達稍有下降(P>0.05),差異無統計學意義。詳見圖5、表2。

圖5 WB檢測各組大鼠海馬組織TGF-β1、P-smad2蛋白表達水平

表2 WB檢測各組大鼠海馬組織TGF-β1、P-smad2蛋白表達比較

3.5 Elisa檢測各組大鼠海馬組織P-gp蛋白表達結果

與正常組相比,模型組P-gp蛋白表達量顯著升高(P<0.05);與模型組相比,ɑ-細辛醚高劑量組、ɑ-細辛醚低劑量組P-gp表達顯著降低(P<0.05),ɑ-細辛醚高劑量組較ɑ-細辛醚低劑量組P-gp表達稍有下降(P>0.05),差異無統計學意義。見表3。

表3 Elisa檢測各組大鼠海馬組織P-gp蛋白表達比較

4 討論

目前二線AEDs僅可使40%左右DRE患者癲癇發作減少50%,使10%～15%DRE患者停止發作,仍有大量DRE患者不能得到有效控制[27-28]。中醫藥治療DRE歷史悠久,療效確切。DRE屬中醫“癇癥”范疇,風、火、痰、瘀是疾病發作的直接病理因素。《三因極一病證方論·癲癇敘論》曰:“夫癲癇病,皆由驚動,使臟氣不平,郁而生痰,閉塞諸經”;《幼科釋謎·癇痙》曰:“然諸癇證,莫不有痰”;《壽世保元·癇證》曰:“風痰上涌而癇作矣”。本病主要病機是臟氣不平,陰陽偏勝,神機受累,元神失控,清竅蒙蔽,氣機失常,津液凝結成痰,痰氣膠著,上蒙清竅,反復出現意識昏蒙、抽搐等癥狀。中藥石菖蒲清香馨遠,芳香稟冽,入心透腦,是歸經入腦的重要藥物。《本草綱目》曰:“治中惡卒死,客忤癲癇”,其辛香行氣,苦溫通絡,化痰行瘀,集開竅豁痰、理氣活血、散風祛濕于一體。ɑ-細辛醚具有廣譜抗癲癇作用,能改善小鼠電驚厥、戊四氮引起的驚厥大發作和氯化鋰-匹羅卡品引起的癲癇持續狀態,對大鼠癲癇持續狀態后γ-氨基丁酸轉氨酶(GABA-T)活性增高,谷氨酸脫羧酶 67(GAD67)及 GABAA 受體的表達降低的過程有抑制作用,可明顯降低海馬CA1、CA3 區神經元 N-甲基-D-天冬氨酸受體l(NMDARl)的表達水平、細胞表面 NMDAR密度,從而抑制 NMDARl的活性及NMDA引起的興奮性神經毒性介導的癲癇過程。ɑ-細辛醚同時也具有神經保護作用,用于預防和治療包括TLE在內的小膠質細胞介導的神經炎癥疾病[29]。

ɑ-細辛醚作為抗癲癇藥物在我國臨床上也得到了廣泛應用[30],但目前關于其對DRE治療的藥理學研究及相關機制研究相對缺乏,原因與目前對DRE動物模型制備報道較少有關,制備與人類疾病相似的動物模型對研究DRE發病機制及開發治療藥物具有重要意義。PTZ是中樞神經系統興奮劑,通過阻斷γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)傳遞致癇[31],可使致癇動物產生和人類極相似的行為及神經病理學改變。PTZ無神經毒性,致癇過程不伴有神經元壞死, 若致癇動物出現神經元損傷,可明確判斷是EP發作本身所致[32]。EP發作后腦內,活化的小膠質細胞釋放的促炎因子可導致神經元死亡[33]。因此通過PTZ腹腔注射建立的化學點燃EP動物模型,可使致癇動物出現癇性發作誘導和上調炎癥介質表達,進而提高腦部興奮性和發生神經元變性。PTZ腹腔注射是一種建立EP化學點燃模型的較理想方式。有實驗報道對EP點燃大鼠采用CBZ進行篩選后再用丙戊酸鈉(Sodium Valproate, SV)篩選,建立DRE模型[34]。本研究根據DRE臨床特征[35],患者對AEDs耐藥性可延伸到其他不同作用機制的藥物,即對一種抗癲癇藥無效的患者即是DRE,本實驗采用經典抗癲癇藥物CBZ進行耐藥性篩選,結果顯示EP點燃大鼠發作情況能反應 DRE特點,可應用于DRE的深入研究。

DRE發病機制復雜, 研究證明DRE與炎癥密切相關,炎癥過程參與DRE發作與復發[36]。DRE發作時可誘發一系列炎癥反應,包括激活小膠質細胞[37]和星形膠質細胞[38-41]產生促炎細胞因子。IL-1β 是先天免疫反應的關鍵介質,在中樞神經系統中,IL-1β 可由小膠質細胞、星形膠質細胞、內皮細胞和神經元產生。IL-1β 與白細胞介素1受體I型(Interleukin-1 receptor type 1, IL-1R1)結合可刺激免疫細胞活化,改變 GABA 能和谷氨酸能神經傳遞,增加神經元興奮性并誘導神經毒性分子的產生[42]。TNF-α 是全身炎癥后EP易感性的重要介質[43]。在大腦中,TNF-α 由活化的小膠質細胞和星形膠質細胞釋放,通過上調α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸受體(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionicacid receptor, AMPA),觸發Ca2+依賴的谷氨酸釋放,增強海馬興奮性突觸活動并維持其興奮性。DRE發作之后,IL-1β、TNF-α及黏附分子等均呈現不同程度高表達,炎癥因子不斷蓄積引起內皮細胞與星形膠質細胞相互作用從而破壞BBB完整性, 導致BBB維持中樞神經系統的穩態功能受損[44]。BBB破壞使腦組織暴露于免疫系統中,血清白蛋白外滲進入腦組織,白蛋白在BBB損壞時進入中樞神經系統環境后,與TGF-β1受體結合,誘導P-smad2蛋白激活,TGF-β1/P-smad2通過影響星形膠質細胞的功能,改變星形膠質細胞鉀離子空間緩沖和重新攝取谷氨酸的能力,引起 N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDA)的GluN 2B亞基和上調突觸后細胞上的NMDA受體,放大大腦興奮性損傷反應,導致癲癇逐級發生至最高峰[45]。BBB作為血-腦間重要屏障系統,嚴格限制血液與腦組織物質交換,一方面允許腦組織所需營養物質進入屏障,另一方面限制有損腦組織物質進入屏障,以維持神經元微環境穩定。BBB內皮細胞中存在大量ABC外排轉運蛋白可有效阻止外源性毒素入侵,排出內源性有毒物質,維持中樞神經系統穩態[46]。其中P-gp是最主要的多藥耐藥蛋白,當炎癥等因素導致BBB損傷時,BBB及腦組織中P-gp異常升高,對AEDs跨膜轉運,主動將AEDs逆濃度梯度外排出腦組織,降低腦組織中藥物濃度,從而產生耐藥,這也是DRE多藥耐藥的重要分子生物學機制[47]。由此可見,DRE與腦內炎癥因子水平升高后BBB破壞,中樞神經穩態失衡,腦組織內多藥耐藥蛋白高表達致AEDs外排密切相關。

DRE發生后腦內炎癥因子如TNF-α、IL-1β、TGF-β1、P-smad2等呈現不同程度高表達[45],腦組織內P-gp也呈現過度表達[48]。本實驗研究發現,與正常組相比,模型組大鼠海馬組織中TNF-α、IL-1β、TGF-β1、P-smad2表達水平顯著升高,證實了炎性因子參與DRE發作過程。DRE急性發作時,BBB破壞,線粒體損傷,血管周隙增寬,白蛋白及白細胞進入大腦,提示DRE與BBB受損有關。本實驗BBB透視電鏡顯示,模型組線粒體損傷,血管周隙增寬,BBB開放,這進一步說明BBB的破壞參與DRE發生。與正常組相比,模型組大鼠海馬組織中P-gp表達水平顯著升高,證實了DRE大鼠模型對AEDs的外排。本課題組認為,ɑ-細辛醚能促進BBB 通透性增加,減少 BBB 緊密連接結構,具有下調炎性表達,保護BBB,促進BBB生理性開放,增加通透性,阻斷TGF-β信號傳導途徑,同時具有抑制腦內P-gp 表達的作用,通過對 P-gp 表達抑制使治療藥物進入腦組織。使進入BBB 的藥物被排除概率減小,使良藥透過BBB進入腦組織,實現腦部靶向治療。在本實驗研究中,與模型組相比,ɑ-細辛醚高劑量組、ɑ-細辛醚低劑量組大鼠發作潛伏期明顯延長、發作級別降低,持續時間明顯縮短。研究證實ɑ-細辛醚對DRE有確切治療效果。

綜上所述,ɑ-細辛醚能有效控制DRE,實現腦部靶向治療。這意味著在臨床上可以通過這種方式使因長期癇性發作或長期服藥導致BBB異常患者得到更有效治療,且在保證療效同時減少全身用藥量,降低藥物毒副作用。ɑ-細辛醚可打開BBB,且不破壞BBB功能,僅選擇性讓藥達病所,增加病灶局部血藥濃度;同時調節多藥耐藥蛋白及炎性反應,產生治療DRE的作用。值得注意的是,本次實驗中,ɑ-細辛醚高劑量組與ɑ-細辛醚低劑量組在改善DRE大鼠癲癇發作情況、保護BBB受損及相關炎性因子及多藥耐藥蛋白調控上無明顯差異, 其可能原因與藥物在大鼠體內的代謝過程以及藥物在腦組織內的含量水平有關,本次實驗未進行進一步探討,且由于作用機制相對復雜,ɑ-細辛醚抗DRE的靶點及通路尚不詳細,還待進一步研究。