血清EBV抗體及其DNA聯(lián)合檢測對鼻咽癌診斷價值

秦倪 王帥 劉雯

［摘要］ 目的 探討血清EB病毒（EBV）抗體以及EBV-DNA聯(lián)合檢測在鼻咽癌治療前診斷中的臨床價值。

方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測163例鼻咽癌病人和140例健康對照者血清EBV衣殼抗原IgA（VCA-IgA）、早期抗原IgA（EA-IgA）、Rta蛋白IgG（Rta-IgG）抗體水平，熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測EBV-DNA載量，評價各項(xiàng)指標(biāo)在鼻咽癌診斷中的價值。

結(jié)果 鼻咽癌病人血清EBV VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量水平以及其陽性率均顯著高于健康對照者（t=12.499～14.597，Z=12.893，χ2=51.274～153.132，P＜0.05）。VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA聯(lián)合檢測診斷鼻咽癌的曲線下面積（AUC）為0.992。Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人VCA-IgA、Rta-IgG抗體效價及EBV-DNA載量均顯著高于Ⅰ～Ⅱ期病人（t=3.332、4.324，Z=10.507，P＜0.05）。

結(jié)論 VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA聯(lián)合檢測對于鼻咽癌早期篩查及診斷具有較高的臨床價值。

［關(guān)鍵詞］ 鼻咽癌；皰疹病毒4型，人；抗體，病毒；DNA，病毒；診斷

［中圖分類號］ R739.63

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

［文章編號］ 2096-5532（2023）01-0064-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2023.59.017

［網(wǎng)絡(luò)出版］ https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20230302.1738.005.html;2023-03-03 17：08：42

VALUE OF COMBINED MEASUREMENT OF SERUM EPSTEIN-BARR VIRUS ANTIBODIES AND EPSTEIN-BARR VIRUS DNA IN THE DIAGNOSIS OF NASOPHARYNGEAL CARCINOMA

QIN Ni， WANG Shuai， LIU Wen

（School of Basic Medicine， Qingdao University Medical College， Qingdao 266071， China）

; ［ABSTRACT］ ?Objective ?To investigate the clinical value of combined measurement of serum Epstein-Barr virus （EBV） antibodies and EBV-DNA in the preoperative diagnosis of nasopharyngeal carcinoma.

Methods ?A total of 163 patients with nasopharyngeal carcinoma and 140 healthy controls were enrolled. ELISA was used to measure the serum levels of VCA-IgA， EA-IgA， and Rta-IgG， and quantitative real-time PCR was used to measure EBV-DNA load. The value of each indicator in the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma was analyzed.

Results ??Compared with the healthy controls， the patients with nasopharyngeal carcinoma had significantly higher titers of VCA-IgA， EA-IgA， and Rta-IgG antibodies and significantly higher load and positive rate of EBV-DNA （t=12.499-14.597，Z=12.893，χ2=51.274-153.132，P<0.05）. Combined measurement of VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA had an area under the ROC curve of 0.992 in the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma. The patients with stage Ⅲ-Ⅳ nasopharyngeal carcinoma had significantly higher titers of VCA-IgA and Rta-IgG antibodies and EBV-DNA load than those with stage Ⅰ-Ⅱ nasopharyngeal carcinoma （t=3.332， 4.324，Z=10.507，P<0.05）.

Conclusion ?Combined measurement of VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA has a high clinical value in the early screening and diagnosis of nasopharyngeal carcinoma.

［KEY WORDS］ ?nasopharyngeal carcinoma; herpesvirus 4， human; antibodies， viral; DNA， viral; diagnosis

鼻咽癌是起源于鼻咽黏膜上皮細(xì)胞的頭頸部惡性腫瘤，其發(fā)病率居頭頸部惡性腫瘤首位［1-3］。鼻咽癌起病隱匿、早期癥狀不明顯、發(fā)病位置狹窄，易被忽視且易擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，大多數(shù)病人發(fā)現(xiàn)時已處于中晚期，嚴(yán)重影響了病人的預(yù)后［4］。早發(fā)現(xiàn)早診斷，有利于鼻咽癌病人的治療和預(yù)后。EB病毒（EBV）與鼻咽癌的發(fā)生密切相關(guān)，可以潛伏感染鼻咽部黏膜上皮細(xì)胞引發(fā)癌變，并刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，如EBV衣殼抗原IgA（VCA-IgA）、早期抗原IgA（EA-IgA）、Rta蛋白IgG（Rta-IgG）等，這些抗體可作為鼻咽癌的血清學(xué)標(biāo)志物，然而單個指標(biāo)檢測對鼻咽癌的血清學(xué)輔助診斷效能不理想，目前臨床上多采用多個指標(biāo)聯(lián)合檢測的方式［3，5］。應(yīng)用熒光定量聚

合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（FQ-PCR）技術(shù)檢測血清EBV-DNA載量能夠提高鼻咽癌早期篩查的準(zhǔn)確率，近年來逐漸引起重視［6-8］。本研究在常用的鼻咽癌抗體標(biāo)志物組合（VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG）的基礎(chǔ)上，聯(lián)合檢測血清EBV-DNA載量，以探討血清EBV抗體和EBV-DNA聯(lián)合檢測在鼻咽癌治療前診斷中的價值?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2019年12月—2020年12月，選取青島大學(xué)附屬醫(yī)院住院及門診確診的鼻咽癌病人163例（鼻咽癌組），其中男95例，女68例，年齡42～84歲，平均（63.39±8.90）歲。所有病例均經(jīng)組織病理檢查確診為鼻咽癌，且未合并其他惡性腫瘤或器官衰竭，3個月內(nèi)均未發(fā)生急性感染、急性心腦血管疾病及嚴(yán)重創(chuàng)傷，采血檢驗(yàn)前均無手術(shù)、化療、放療及免疫治療史。依據(jù)中國鼻咽癌2008臨床TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，其中Ⅰ～Ⅱ期70例（早期），Ⅲ～Ⅳ期93例（晚期）。同期選取體檢中心的140例健康體檢者作為對照組，其中男73例，女67例，年齡為38～84歲，平均（62.45±9.77）歲；均排除鼻咽部疾病，且無心腦血管疾病、急性感染及嚴(yán)重創(chuàng)傷。兩組的年齡及性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 標(biāo)本采集與檢測

鼻咽癌病人均于入院后治療前采集清晨空腹靜脈血5 mL，體檢者均于體檢日采集清晨空腹靜脈血5 mL，均以4 000 r/min離心10 min，分離血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗體水平，采用FQ-PCR法檢測EBV-DNA載量，所有檢測均嚴(yán)格按照儀器及配套試劑的說明進(jìn)行操作。抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：VCA-IgA、EA-IgA以標(biāo)本吸光度（A）值/校準(zhǔn)品A值≥1.1為陽性；Rta-IgG以標(biāo)本A值/臨界值≥1為陽性，其中臨界值根據(jù)說明書提供的方法計(jì)算。VCA-IgA、EA-IgA及Rta-IgG的結(jié)果以相對A值（rA）表示，rA=S/CO，S/CO為標(biāo)本A值與cutoff值的比值。采用自動分析軟件對FQ-PCR結(jié)果進(jìn)行分析，EBV-DNA以＞5×105 copies/L為陽性。聯(lián)合檢測采用平行試驗(yàn)（并聯(lián)試驗(yàn)）方法，檢測項(xiàng)目其中一項(xiàng)為陽性即判斷為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s形式表示，組間比較采用成組t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（M）和四分位數(shù)間距（QU－QL）形式表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。根據(jù)血清EBV抗體和EBV-DNA檢測結(jié)果繪制受試者工作特征（ROC）曲線，采用公式計(jì)算診斷靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度和曲線下面積（AUC）等指標(biāo)［9］。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)? 果

2.1 兩組血清EBV抗體效價及EBV-DNA載量的比較

鼻咽癌組血清VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量水平及其陽性率均高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.499～14.597，Z=12.893，χ2=51.274～153.132，P＜0.05）。結(jié)果見表1、2。

2.2 血清EBV抗體和EBV-DNA檢測對鼻咽癌的診斷價值

單項(xiàng)檢測中，AUC最高的指標(biāo)為EBV-DNA（0.930），靈敏度最高的為VCA-IgA（78.53%），特異度最高的為EBV-DNA（92.86%），準(zhǔn)確度最高的為EBV-DNA（84.49%）；聯(lián)合檢測中，AUC最高的指標(biāo)為VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA（0.992），靈敏度最高的為VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA以及VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA（100.00%），特異度最高的則為VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA（65.00%），準(zhǔn)確度最高的為VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA（83.83%）。見圖1和表3。

2.3 不同分期鼻咽癌病人血清EBV抗體效價和DNA載量比較

Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人血清VCA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量明顯高于Ⅰ～Ⅱ期病人，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.332、4.324，Z=10.507，P＜0.05）；Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人EBV-DNA陽性率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期病人，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=46.802，P＜0.05），但不同分期鼻咽癌病人3項(xiàng)抗體陽性率比較差異無顯著意義（P＞0.05）。見表4、5。

3 討? 論

近年來，鼻咽癌的發(fā)病率逐年升高，在我國其發(fā)病率和死亡率均高于世界平均水平［4，10］。EBV是可引起人類B淋巴細(xì)胞感染的皰疹病毒，與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。機(jī)體感染EBV產(chǎn)生的多種特異性抗體，如VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG等，具有不同的臨床意義，它們在不同鼻咽癌病人血清中的滴度有一定差異，且其血清水平與病人病情密切相關(guān)［5］。

VCA-IgA和EA-IgA檢測在鼻咽癌篩查及輔助診斷中已有較多應(yīng)用。Rta蛋白是EBV裂解期BRLF1基因突變表達(dá)的一種編碼蛋白，能誘導(dǎo)促進(jìn)鼻咽部上皮細(xì)胞分裂發(fā)生癌變，是目前備受關(guān)注的新分子靶標(biāo)，檢測EBV Rta-IgG有助于早期鼻咽癌的輔助診斷［10］。國內(nèi)外已經(jīng)有不少研究證實(shí)了Rta-IgG與VCA-IgA、EA-IgA聯(lián)合檢測在鼻咽癌早期診斷中的潛在價值［11-12］。EBV感染機(jī)體后可潛伏在淋巴細(xì)胞內(nèi)，并以環(huán)狀DNA的形式游離于細(xì)胞質(zhì)中，因此檢測EBV-DNA拷貝數(shù)可反映病人體內(nèi)EBV載量［13-14］。

本文研究結(jié)果顯示，鼻咽癌組血清VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量及其陽性率均顯著高于健康對照組，提示該4項(xiàng)指標(biāo)可用于鼻咽癌的輔助診斷。進(jìn)一步分析這4項(xiàng)指標(biāo)的診斷價值，單項(xiàng)檢測中AUC最大的為EBV-DNA（0.930），其診斷效能最優(yōu)，且其診斷特異度及準(zhǔn)確度也最高，但診斷靈敏度低于VCA-IgA。因此，在臨床篩查鼻咽癌時各項(xiàng)標(biāo)志物常采用聯(lián)合檢測且并聯(lián)試驗(yàn)的方法，以提高診斷的陽性率。本文研究結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測可明顯提高診斷效能，4項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測的AUC及靈敏度均最高，常規(guī)兩種抗體和EBV-DNA檢測組合VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA的AUC、靈敏度及特異度也明顯高于單純抗體組合VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG，表明VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA聯(lián)合檢測在臨床篩查鼻咽癌時具有較好的應(yīng)用潛力。

目前，EBV抗體效價與鼻咽癌臨床分期的相關(guān)研究較多，但結(jié)果存在一定的爭議［15］。而EBV-DNA拷貝數(shù)的檢測可以更直觀地體現(xiàn)機(jī)體內(nèi)EBV的含量，為探究EBV載量與鼻咽癌分期的關(guān)系提供了便利。本研究初步探討了163例鼻咽癌病人3種EBV抗體和EBV-DNA與鼻咽癌病人TNM分期的關(guān)系，結(jié)果顯示，Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人血清VCA-IgA、Rta-IgG抗體效價和EBV-DNA載量明顯高于Ⅰ～Ⅱ期病人，并且EBV-DNA陽性率也明顯高于Ⅰ～Ⅱ期病人，但其他3項(xiàng)指標(biāo)的陽性率在早期和晚期病人中無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以往的研究已經(jīng)證實(shí)，VCA-IgA陽性提示病毒大量復(fù)制，而EA-IgA陽性提示病毒進(jìn)入復(fù)制階段［16］。因此，與EA-IgA相比較，血清VCA-IgA滴度變化更為明顯。隨著臨床分期的升高，鼻咽癌會刺激EBV編碼蛋白的高表達(dá)，Rta蛋白表達(dá)也會增高，進(jìn)而使得相應(yīng)抗體效價增高［11，17］。因此，晚期鼻咽癌病人血清中的Rta-IgG水平明顯高于早期病人。隨著病情的惡化，腫瘤細(xì)胞釋放到外周血可引起病人血清中EBV-DNA拷貝數(shù)的增加［1］。因此，EBV-DNA拷貝數(shù)與腫瘤分期呈正相關(guān)性。今后的研究中，我們將擴(kuò)大樣本量，在根據(jù)檢測結(jié)果區(qū)分不同分期的病人時重新計(jì)算截?cái)嘀?，并進(jìn)一步分析各項(xiàng)標(biāo)志物區(qū)分不同分期鼻咽癌病人的診斷價值。

綜上所述，相較于單一的EBV抗體檢測，聯(lián)合檢測可提高診斷效能，并且在初篩時3項(xiàng)抗體聯(lián)合EBV-DNA檢測更為理想，有利于病人的早期診斷、病情判斷及個性化治療方案的及時制定，在鼻咽癌病人輔助診斷和治療中具有一定的臨床價值。

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（本文編輯 馬偉平）