川歸膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其治療白癜風(fēng)的作用機(jī)制研究

馮詩(shī)涵,崔亞玲,高 歡,劉 彤,許子華,趙慶春*

0 引言

白癜風(fēng)是一種典型的色素脫失性疾病,全球的患病率為0.1%～8.0%,臨床表現(xiàn)為皮膚出現(xiàn)白斑,對(duì)患者造成嚴(yán)重的心理打擊,進(jìn)而導(dǎo)致生活質(zhì)量下降,患有精神疾病的可能性大大增加[1]。白癜風(fēng)疾病的發(fā)病機(jī)制尚不明確,研究認(rèn)為,其患病與自身免疫、氧化應(yīng)激、黑色素細(xì)胞自毀、遺傳等多方面功能障礙相關(guān),上述因素導(dǎo)致黑色素細(xì)胞破壞,最終使患者皮膚色素脫失[2]。目前,臨床上治療白癜風(fēng)的方法很多,包括口服藥物治療(中成藥、左旋咪唑)、光療(紅外線、PUVA)、外科手術(shù)治療、脫色、中西藥聯(lián)合治療等。中醫(yī)治療白癜風(fēng)與其他方法相比,臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)豐富、療效確切、復(fù)發(fā)率低、藥材來(lái)源豐富、成本較低、毒副作用小,具有廣闊的發(fā)展前景[3]。

川歸膠囊由川芎、當(dāng)歸、補(bǔ)骨脂及白鮮皮組成。本方結(jié)合白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制,選以活血散瘀、清熱涼血、疏肝理氣、燥濕解毒、祛風(fēng)通絡(luò)之藥來(lái)疏通經(jīng)絡(luò),去除肌膚毛孔之閉塞,散其行于肌膚瘀滯,標(biāo)本同治,臨床治療白癜風(fēng)具有一定的療效,但川歸膠囊的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制尚不明確。本研究主要通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選其藥效核心成分、靶點(diǎn)及通路,并對(duì)其治療白癜風(fēng)的作用機(jī)制進(jìn)行探討,將篩選出的核心成分阿魏酸進(jìn)行定性定量研究,建立川歸膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),以保證臨床用藥安全、有效、質(zhì)量可控。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(日本島津SPD-20AT),硅膠G薄層板 (青島海洋化工廠分廠),玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠生產(chǎn)),紫外線分析儀(SHIMADZU UV-2201),電子天平(上海精天電子儀器有限公司)。

1.2 試劑 川歸膠囊(規(guī)格：0.3 g/粒,北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院自制,批號(hào)：20201201、20201208、20201214),川芎對(duì)照藥材(四川省維克奇生物科技有限公司,批號(hào)：ycwkq21052404),當(dāng)歸對(duì)照藥材(中檢所,批號(hào)：120927-201516),乙醚(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司),乙酸乙酯(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司),正己烷-乙酸乙酯(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司),十八烷基硅烷鍵合硅膠(Shimmer-pack C18),醋酸溶液(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司),阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)：0773-9910),甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司),水為純化水,其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)分析

2.1.1 川歸膠囊活性成分篩選及靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過(guò)中藥數(shù)據(jù)庫(kù)ETCM (http：//www.tcmip.cn/ETCM/index.php),分別以“補(bǔ)骨脂”、“白鮮皮”、“川芎”、“當(dāng)歸”為關(guān)鍵詞,獲取川歸膠囊的活性成分及其對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)信息,檢索時(shí)間為2022年4月15日。分別收集到補(bǔ)骨脂、白鮮皮、川芎、當(dāng)歸的18、6、32、31個(gè)活性成分,合并去重后共得到77個(gè)活性成分,352個(gè)作用靶點(diǎn)。如圖1所示。

2.1.2 白癜風(fēng)疾病相關(guān)靶點(diǎn)的預(yù)測(cè) 在GeneCard(http：//www.genecards.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM(https：//www.omim.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)中以“Vitiligo”為關(guān)鍵詞檢索白癜風(fēng)的疾病靶點(diǎn),檢索時(shí)間為2022年4月24日。合并去重后共得到1 192個(gè)白癜風(fēng)疾病的相關(guān)靶點(diǎn)。將疾病靶點(diǎn)與成分靶點(diǎn)信息映射構(gòu)建維恩圖,取交集共得到50個(gè)潛在靶點(diǎn),結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.1.3 中藥-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析 將川歸膠囊中中藥、活性成分以及靶點(diǎn)導(dǎo)入到Cytoscape 3.9.1(https：//cytoscope.org/),構(gòu)建“中藥-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖,見(jiàn)圖3。采用軟件分析功能計(jì)算網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋮?shù),以各個(gè)節(jié)點(diǎn)的自由度值(Degree)為主要評(píng)估標(biāo)準(zhǔn),節(jié)點(diǎn)自由度值越大在網(wǎng)絡(luò)圖中則越重要。

取前10的節(jié)點(diǎn),分別為二十四烷酸、阿魏酸、亞油酸、豆甾醇、肉豆蔻酸、補(bǔ)骨脂異黃酮、孕烯醇酮、菜油甾醇、谷甾醇、花翠素,作為川歸膠囊治療白癜風(fēng)的核心成分。

圖2 川歸膠囊與白癜風(fēng)靶點(diǎn)的維恩圖

圖3 川歸膠囊中藥-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.1.4 交集靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將得到的藥物與疾病共有的潛在治療靶標(biāo)信息輸入String(http：//string-db.org/)數(shù)據(jù)庫(kù),物種設(shè)定為“Homo Sapiens”,得到川歸膠囊治療白癜風(fēng)疾病潛在治療靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖。將得到的String數(shù)據(jù)庫(kù)初始PPI網(wǎng)絡(luò)圖導(dǎo)入Cytoscape軟件進(jìn)行優(yōu)化處理,刪除孤立節(jié)點(diǎn)和連邊后,共有48個(gè)節(jié)點(diǎn),262條邊,從拓?fù)浞治鰠?shù)得到ALB、AKT1、TNF、INS、IL-6、ESR1、TP53、IL-1β的自由度值遠(yuǎn)大于其他節(jié)點(diǎn),故認(rèn)為該8個(gè)靶點(diǎn)可能是川歸膠囊治療白癜風(fēng)的關(guān)鍵靶點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)圖4、圖5。

2.1.5 基因本體(GO)功能富集和京都基因與基因組百科全書(shū)(KEGG)通路分析 將50個(gè)白癜風(fēng)疾病與成分的交集靶點(diǎn)輸入到DAVID平臺(tái)(https：//david.ncifcrf.gov/),以P≤0.05為篩選條件,進(jìn)行GO分析和KEGG分析。GO分析得到共計(jì)806個(gè)條目。其中,生物學(xué)過(guò)程(BP)得到734個(gè),主要涉及對(duì)激素水平的調(diào)節(jié),炎癥反應(yīng)和細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的反應(yīng)等;分子功能(MF)得到56個(gè),涉及氧化還原酶活性、核受體活性、配體激活的轉(zhuǎn)錄因子活性等;細(xì)胞組成(CC)得到16個(gè),主要涉及分泌顆粒腔、轉(zhuǎn)錄復(fù)合體、受體復(fù)合物等。KEGG分析共得到123條信號(hào)通路,主要富集在PI3K-Akt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、酪氨酸代謝、NOD樣受體信號(hào)通路、JAK-STAT信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等。見(jiàn)圖6、圖7。

圖4 川歸膠囊治療白癜風(fēng)作用靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

圖5 關(guān)鍵靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖

2.2 川歸膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 川歸膠囊為中藥復(fù)方制劑,君藥川芎和當(dāng)歸含量較高的主要活性成分為阿魏酸,因此,在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中選用阿魏酸作為質(zhì)量控制指標(biāo)。

2.2.1 川芎、當(dāng)歸的鑒別 取本品粉末1 g,加乙醚20 ml,加熱回流1 h,濾過(guò),濾液揮干,殘?jiān)右宜嵋阴? ml使溶解,作為供試品溶液。再取川芎、當(dāng)歸對(duì)照藥材各0.5 g,同法制成混合對(duì)照藥材溶液。再取按處方比例制成的缺川芎、當(dāng)歸的陰性樣品1 g,同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn),吸取上述供試品溶液與對(duì)照藥材溶液各2 μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖8。

圖6 川歸膠囊治療白癜風(fēng)潛在靶點(diǎn)的GO富集分析

圖7 川歸膠囊治療白癜風(fēng)潛在靶點(diǎn)的KEGG信號(hào)通路分析

2.2.2 含量測(cè)定 ①色譜條件。色譜柱：Welchrom C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相：甲醇(A)-1%醋酸溶液(B),梯度洗脫(0～30 min,25%～30%A;30～45 min,30%～50%A);柱溫：35 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：323 nm;流速：1.0 ml/min;進(jìn)樣體積：10 μl。

圖8 川芎、當(dāng)歸的薄層色譜

②溶液配制。對(duì)照品溶液的制備：取阿魏酸對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,加甲醇制成每l ml含18 μg阿魏酸的對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備：取川歸膠囊0.6 g,精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇溶液30 ml,稱(chēng)定重量,超聲處理30 min,放冷,再稱(chēng)定重量,用70%甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。陰性樣品溶液的制備：按處方取除川芎、當(dāng)歸外的藥材,按照制備工藝制成川歸膠囊陰性樣品,按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

③專(zhuān)屬性試驗(yàn)。分別精密吸取陰性樣品溶液、供試品溶液、對(duì)照品溶液各10 μl,按“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,記錄色譜圖。由圖9可知,陰性對(duì)照樣品不干擾阿魏酸的測(cè)定,阿魏酸與其他成分或雜質(zhì)的分離度均大于1.5,表明此法專(zhuān)屬性強(qiáng)。

圖9 專(zhuān)屬性HPLC圖

④線性關(guān)系考察。取阿魏酸對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,用甲醇配制成濃度分別為1.77、3.54、8.84、17.68、35.36、70.72 μg/ml的對(duì)照品溶液。精密吸取上述濃度的對(duì)照品溶液各10 μl,按“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定,測(cè)定各自峰面積,以對(duì)照品的濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo),峰面積值為縱坐標(biāo),求得回歸方程Y=57 401X-82 248,r=0.999 9。結(jié)果表明,阿魏酸在濃度為1.77～70.72 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

⑤精密度試驗(yàn)。精密吸取對(duì)照品溶液10 μl,按“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件分析,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄色譜峰的峰面積。測(cè)得峰面積值的RSD為0.72%(n=6),≤2%,符合要求。

⑥穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一批(批號(hào)：20200820)樣品,取約0.6 g,精密稱(chēng)定,按“2.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液,按“2.2.2”色譜條件分析,分別在0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣,測(cè)定樣品中阿魏酸峰面積。峰面積值的RSD為2.50%(n=7),說(shuō)明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

⑦重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批(批號(hào)：20200820)樣品,取約0.6 g(共6份),精密稱(chēng)定,按“2.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液,按“2.2.2”色譜條件分析,測(cè)定每份樣品中阿魏酸的含量。結(jié)果顯示,樣品中阿魏酸平均含量為0.48 mg/g,RSD為2.32%(n=6),符合要求。

⑧回收率試驗(yàn)。取同一批(批號(hào)：20200820)樣品,每份取約0.3 g(共6份),精密稱(chēng)定,分別精密加入10 μl阿魏酸對(duì)照品溶液(19.68 μg/ml),稱(chēng)定重量,按“2.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液,按“2.2.2”色譜條件分析,測(cè)定樣品中含量,計(jì)算回收率。結(jié)果顯示,平均回收率為102.06%,RSD為1.96%(n=6),符合要求,結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

⑨樣品測(cè)定。取3批次川歸膠囊樣品,按“2.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液,按“2.2.2”色譜條件分析,測(cè)定各自樣品中阿魏酸的含量,結(jié)果見(jiàn)表2。3批川歸膠囊中阿魏酸的平均含量為0.102 7 mg/粒。

表2 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=2)

3 討論

中醫(yī)藥理論認(rèn)為,白癜風(fēng)主要與氣血瘀滯、風(fēng)邪致病、肝腎不足、內(nèi)熱感邪學(xué)說(shuō)相關(guān)[4]。中藥復(fù)方制劑通常具有通過(guò)多個(gè)組分、多個(gè)靶點(diǎn)、多個(gè)通路來(lái)發(fā)揮治療疾病作用的特點(diǎn),使其對(duì)疾病作用機(jī)制的研究復(fù)雜。本研究通過(guò)對(duì)川歸膠囊活性成分以及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的篩選,探討川歸膠囊治療白癜風(fēng)的關(guān)鍵作用基因和通路。

通過(guò)川歸膠囊與白癜風(fēng)疾病交集靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)表明,ALB、AKT1、TNF、INS、IL-6、ESR1、TP53、IL-1β在川歸膠囊治療白癜風(fēng)疾病中發(fā)揮重要作用。TP53(細(xì)胞腫瘤抗原P53)蛋白可以使白癜風(fēng)患者避免受到光化損傷,改變黑色素細(xì)胞遷移能力,從而改善患者色素沉著[5]。白細(xì)胞介素會(huì)影響黑色素細(xì)胞的生理作用,導(dǎo)致體內(nèi)黑色素作用異常[6],進(jìn)而使患者患病。白癜風(fēng)患者血液中IL-6水平增加將使免疫成分匯集到皮膚,導(dǎo)致黑色素細(xì)胞被靶向破壞,IL-6就可以解決這個(gè)問(wèn)題。AKT1是RAC-α絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,可以抑制β連環(huán)素的降解,導(dǎo)致小眼癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)和酪氨酸酶被激活,從而促進(jìn)黑色素合成[7]。TNF可通過(guò)各種途徑誘導(dǎo)人黑色素細(xì)胞凋亡[8],因此在白癜風(fēng)的治療中可應(yīng)用TNF拮抗劑。這些結(jié)果表明,川歸膠囊可以從不同層面解決白癜風(fēng)疾病相關(guān)因素的異常,從而達(dá)到治療白癜風(fēng)的目的。

KEGG富集分析結(jié)果表明,川歸膠囊治療白癜風(fēng)可以由多條不同的通路共同完成,主要富集在腫瘤壞死因子信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、NOD樣受體信號(hào)通路、JAK-STAT信號(hào)通路等。腫瘤壞死因子 (TNF-α)是一種多向性的促炎性單核細(xì)胞因子,主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,能夠起到激活角質(zhì)形成其他炎癥介質(zhì)的作用[9],能夠抑制黑色素細(xì)胞的增生及黑色素生成,影響黑色素細(xì)胞的凋亡,同時(shí)參與白癜風(fēng)發(fā)病的免疫調(diào)控[10]。PI3K在持續(xù)活化的同時(shí),能抑制黑色素細(xì)胞產(chǎn)生凋亡,在一定程度上加快了黑色素細(xì)胞發(fā)生凋亡的速度。所以,在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的黑色素細(xì)胞損傷中,PI3K-Akt信號(hào)通路起到了重要作用。中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)以系統(tǒng)生物學(xué)、網(wǎng)絡(luò)信息學(xué)、生物信息學(xué)等多個(gè)學(xué)科理論為基礎(chǔ),將生物分子間復(fù)雜的相互作用和疾病相關(guān)靶點(diǎn)相關(guān)聯(lián),構(gòu)建中藥成分或組分-靶點(diǎn)-疾病相關(guān)生物分子網(wǎng)絡(luò)模型,進(jìn)而闡述藥物與機(jī)體的作用機(jī)制,具有整體性、系統(tǒng)性、動(dòng)態(tài)性特點(diǎn),倡導(dǎo)多靶點(diǎn)、多途徑的藥物分析和評(píng)價(jià)原則,與傳統(tǒng)中醫(yī)中藥診斷和治療疾病的原理殊途同歸。近年來(lái),網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中藥研究中具有長(zhǎng)足發(fā)展,可用于預(yù)測(cè)中藥作用靶點(diǎn)、預(yù)測(cè)與辨識(shí)中藥活性成分群、闡明中藥作用機(jī)制、科學(xué)解釋組方的規(guī)律、發(fā)現(xiàn)新的適應(yīng)證等[11-12]。然而,網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)中藥化學(xué)成分、基因靶點(diǎn)和信號(hào)通路的選擇主要依賴于對(duì)文獻(xiàn)和公共數(shù)據(jù)庫(kù)的分析,缺乏針對(duì)性,且缺少對(duì)“量”的考量,忽略了藥物的量效關(guān)系,無(wú)法體現(xiàn)出各有效成分含量上的差異。將所有成分同等對(duì)待,研究其可能的作用靶標(biāo)和作用機(jī)制存在一定的不合理性。因此,為了提高結(jié)果的可靠性,課題組將針對(duì)核心成分和靶點(diǎn)進(jìn)行后續(xù)的研究驗(yàn)證。

本文通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)系統(tǒng)分析可知,二十四烷酸、阿魏酸、亞油酸、豆甾醇、肉豆蔻酸、補(bǔ)骨脂異黃酮、孕烯醇酮、菜油甾醇、谷甾醇、花翠素是川歸膠囊治療白癜風(fēng)的主要活性化合物。研究發(fā)現(xiàn),阿魏酸能夠通過(guò)調(diào)控Nrf2/HO-1信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路和抑制NF-κB/TNF-α軸發(fā)揮抗氧化和抗炎作用[13-15]。補(bǔ)骨脂異黃酮通過(guò)降低pro-caspase-1自我剪切活化,從而降低NLRP3、NLRC4、AIM2炎癥小體的活性,進(jìn)一步抑制免疫炎癥反應(yīng)[16]。豆甾醇通過(guò)調(diào)節(jié)MAPK3和PRKACA的表達(dá)水平,在一定程度上發(fā)揮抗炎作用[17]。

能發(fā)揮活血、行氣、祛風(fēng)和止痛等功效[18],而當(dāng)歸性味為甘、溫、辛,具有補(bǔ)血活血、抗炎和增強(qiáng)免疫等功效[19],二者為臨床上常用的配伍藥材。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外有關(guān)川芎和當(dāng)歸的研究日漸深入,發(fā)現(xiàn)川芎中化學(xué)成分主要有揮發(fā)油(如藁本內(nèi)酯、3-丁基苯酞)、生物堿(如川芎嗪、川芎堿B)、有機(jī)酸(如棕櫚酸和阿魏酸)、多糖等,對(duì)心腦血管系統(tǒng)、肝腎系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等都具有多方面的藥理活性,主要表現(xiàn)為鎮(zhèn)痛、抗炎、抗氧化能力、抗衰老、細(xì)胞保護(hù)、改善心功能等作用[20-23]。從當(dāng)歸中分離出的化學(xué)成分主要包括揮發(fā)油、有機(jī)酸類(lèi)、多糖以及黃酮等。阿魏酸是有機(jī)酸類(lèi)的代表,是當(dāng)歸質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一。當(dāng)歸對(duì)造血系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)均有良好的藥理作用[24-25]。

川芎、當(dāng)歸在多系統(tǒng)、多器官及多種疾病的臨床治療中具有重要意義,且二者共同的有效成分主要為阿魏酸。目前,關(guān)于含有川芎或當(dāng)歸的制劑以阿魏酸為質(zhì)控成分的含量測(cè)定較多[26-28],且多數(shù)為高效液相等度洗脫,但因川歸膠囊為中藥復(fù)方制劑,供試品溶液經(jīng)制備后所得到的成分較多,等度洗脫無(wú)法使阿魏酸達(dá)到基線分離,因此,該研究中的含量測(cè)定方法采用梯度洗脫,經(jīng)多次摸索后確定了梯度洗脫的程序。該方法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確、穩(wěn)定可靠,可用于川歸膠囊的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

本研究以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選的核心成分—阿魏酸作為川歸膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中新的指標(biāo)成分,建立了阿魏酸的薄層色譜鑒別方法和HPLC含量測(cè)定方法。該方法具有較好的專(zhuān)屬性和重現(xiàn)性,提升了川歸膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),為川歸膠囊的臨床應(yīng)用和后期醫(yī)院制劑的研發(fā)提供理論依據(jù)。