降濁合劑濃縮液對肥胖大鼠體質量、糖脂指標的影響

蘇瓊 江丹娜 鐘釗 周開 龔文波

[摘要]?目的?探究降濁合劑濃縮液對肥胖大鼠體質量、糖脂指標的影響。方法?將30只SD大鼠隨機分為正常組、模型組和給藥組，每組各10只。正常組大鼠給予普通飼料足量喂養+生理鹽水灌胃，模型組大鼠給予高脂飼料足量喂養+生理鹽水灌胃，給藥組大鼠給予高脂飼料足量喂養+降濁合劑濃縮液灌胃。干預8周后，觀察各組大鼠的大體情況和體質量變化，采用蘇木精–伊紅染色（hematoxylin?and?eosin?staining，HE染色）觀察脂肪細胞的病理變化，比較血糖（glucose，GLU）、總膽固醇（total?cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low?density?lipoprotein-cholesterol，LDL-C）水平。結果?干預后，給藥組大鼠的精神狀態、皮毛光澤度顯著改善，且干預7～8周的體質量顯著低于模型組（P<0.05）；HE染色觀察顯示，給藥組大鼠的白色、棕色脂肪細胞體積接近正常組；給藥組大鼠的TG顯著低于模型組（P<0.05），GLU、TC、LDL-C水平略低于模型組，但比較無統計學意義（P>0.05）。結論?降濁合劑濃縮液能夠改善肥胖大鼠的體質量和皮毛光澤度，緩解脂肪組織變性，降低糖脂指標。

[關鍵詞]?降濁合劑濃縮液；高脂飼養；肥胖；病理變化

[中圖分類號]?R723.14??????[文獻標識碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2023.16.015

Effect?of?concentrated?solution?of?Jiangzhuo?mixture?on?body?weight，?glucose?and?lipid?index?of?obese?rats

SU?Qiong1，?JIANG?Danna2，?ZHONG?Zhao3，?ZHOU?Kai1，?GONG?Wenbo1

1.Department?of?Endocrinology，?Ningbo?Hospital?of?Chinese?Medicine?Affiliated?Zhejiang?Chinese?Medical?University，?Ningbo?315010，?Zhejiang，?China;?2.Department?of?Cardiology，?Ningbo?Hospital?of?Chinese?Medicine?Affiliated?Zhejiang?Chinese?Medical?University，?Ningbo?315010，?Zhejiang，?China;?3.Department?of?Rheumatology，?Ningbo?Hospital?of?Chinese?Medicine?Affiliated?Zhejiang?Chinese?Medical?University，?Ningbo?315010，?Zhejiang，?China

[Abstract]?Objective?To?explore?the?effect?of?concentrated?solution?of?Jiangzhuo?mixture?on?body?weight，?glucose?and?lipid?index?of?obese?rats.?Methods?30?SD?rats?were?randomly?divided?into?normal?group，?model?group?and?drug?group，?with?10?rats?in?each?group.?The?rats?in?normal?group?were?given?regular?feed?and?normal?saline?intragastric?administration，?the?rats?in?model?group?were?given?high-fat?feed?and?normal?saline?intragastric?administration，?and?the?rats?in?drug?group?were?given?high-fat?feed?and?Jiangzhuo?mixture?intragastric?administration.?After?8?weeks?of?intervention，?the?general?condition?and?weight?changes?of?each?group?of?rats?were?observed，?hematoxylin?and?eosin?（HE）?staining?was?used?to?observe?the?pathological?changes?of?adipocytes，?and?glucose?（GLU），?total?cholesterol?（TC），?triglyceride?（TG），?low?density?lipoprotein-cholesterol?（LDL-C）?levels?were?compared.?Results?After?intervention，?the?mental?state?and?coat?gloss?of?the?rats?in?drug?group?were?significantly?improved，?and?the?body?weight?at?7-8?weeks?was?significantly?lower?than?that?of?model?group?（P<0.05）.?HE?staining?observation?showed?that?the?white?and?brown?adipocyte?volumes?in?drug?group?were?close?to?those?in?normal?group.?The?TG?of?rats?in?drug?group?was?significantly?lower?than?that?in?model?group?（P<0.05），?the?levels?of?GLU，?TC?and?LDL-C?were?slightly?lower?than?those?of?model?group，?but?there?were?no?statistical?significance?（P>0.05）.?Conclusion?The?concentrated?solution?of?Jiangzhuo?mixture?can?improve?the?weight?and?coat?gloss?of?obese?rats，?relieve?adipose?tissue?degeneration，?and?lower?glucose?and?lipid?index.

[Key?words]?Concentrated?solution?of?Jiangzhuo?mixture;?High?fat?feeding;?Obesity;?Pathological?changes

肥胖癥是一種常見的代謝綜合征，由熱量攝入超過機體需求，使過量脂肪堆積于體內所致。該疾病是多種因素共同作用的結果，其影響因素包括缺乏鍛煉、高熱量飲食、基因、生活方式等[1]。肥胖是人類健康的主要風險因素之一，可引發糖尿病、胰島素抵抗、心血管疾病等多種慢性疾病，同時還可導致患者自尊心及個人外表滿意度下降，進而產生消極心理，甚至引起不良的社會后果[2-5]。由此可見，尋找防治肥胖的有效手段具有重要意義。《中國超重/肥胖醫學營養治療專家共識（2016年版）》[6]建議體質量指數>28kg/m2的肥胖者，在飲食管理、行為干預的基礎上應用藥物進行減重治療。與合成藥物相比，中藥制劑通常是多藥合用，毒性較小，可對高膽固醇血癥進行安全有效的治療，且藥物不良反應較少[7]。本研究根據中藥配伍原則制作降濁合劑濃縮液，采用高脂飼養大鼠建立肥胖模型，探究該中藥湯劑在肥胖大鼠中的治療作用，以期為肥胖癥治療提供可行方案，現報道如下。

1??材料與方法

1.1??實驗動物

本實驗開展于2020年7月至2021年4月，30只SPF雄性SD大鼠，平均體質量（120±10）g，由杭州醫學院提供并在浙江省中醫藥研究院實驗動物中心進行飼養，飼養溫度（22±2）℃，濕度50%～60%，保持光照周期12h/12h晝夜節律。實驗動物生產許可證號：SCXK（浙）2019-0002，實驗動物使用許可證號：SYXK（浙）2019-0010。

1.2??主要試劑、材料和儀器

Trizol試劑（Ambion公司，批號：119704）；異丙醇（成都市科龍化工試劑廠，批號：2015122801）；無水乙醇（成都市科隆化學品有限公司，批號：2018051801）；二甲苯（北京偶合科技有限公司，批號：01001437-100ml）；蘇木精–伊紅染色（hematoxylin?and?eosin?staining，HE染色）試劑盒（碧云天生物，批號：C0105S）。普通飼料為實驗動物標準飼料，由浙江省中醫藥研究院實驗動物中心提供；造模飼料含食用化豬油15%、蔗糖20%、膽固醇1.2%、膽鹽0.2%，其余63.6%為普通飼料加工而成。降濁合劑組方：生黃芪30g、丹參30g、生蒼術15g、生薏苡仁30g、生麥芽30g、生扁豆30g、絞股藍30g、生雞內金15g、生葛根30g、生山楂30g、荷葉15g。加水煎制成生藥濃度5g/ml的濃縮液，由寧波市中醫院提供。

Centrifuge?5810R型離心機（Eppendorf公司）；AU5831型全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特有限公司）；TP1020-1型組織脫水機、EG1150型石蠟包埋機、RM2235型石蠟切片機（德國萊卡公司）。

1.3??模型制備及動物分組

將大鼠隨機分為正常組、模型組和給藥組，每組各10只。正常組大鼠予普通飼料喂養。模型組和給藥組大鼠用于構建肥胖模型，以高脂飼料足量喂養，自由飲食飲水。肥胖大鼠建模成功的標準為空腹條件下體質量超過正常組大鼠平均體質量的20%。待模型建立后，模型組大鼠給予蒸餾水10ml/kg灌胃，給藥組大鼠給予降濁合劑濃縮液50g/kg灌胃，正常組大鼠給予蒸餾水10ml/kg灌胃，每日上午灌胃1次。均連續飼養8周。觀察各組大鼠的一般情況、體質量變化，檢測糖脂指標，HE染色觀察白色、棕色脂肪細胞的病理變化。

1.4??觀察指標

干預8周后，觀察大鼠的一般情況，包括體質量、體長（大鼠鼻尖至肛門的長度）、精神狀態、皮毛光澤度等。禁食24h，采用3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，將血液置于離心管4000轉/min離心20min，分離血清，采用全自動生化分析儀檢測各組大鼠的血糖（glucose，GLU）、總膽固醇（total?cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low?density?lipoprotein-cholesterol，LDL-C）水平。將大鼠脂肪組織固定于10%中性福爾馬林溶液24h，酒精脫水后，置于二甲苯溶液中透明，然后將組織置于石蠟液中包埋24h，制成4μm的切片，進行常規HE染色，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察脂肪細胞的形態學改變。

1.5??統計學方法

采用SPSS?17.0統計軟件處理數據。計數資料以例數（百分率）[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗，計量資料以均數±標準差（）表示，多組間比較采用方差分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2??結果

2.1??三組大鼠的大體形態比較

干預8周后，正常組大鼠形體適中、自主活動正常，食欲佳，皮毛光澤、蓬松，大便質地硬，對外界反應敏捷，飲水量正常；模型組大鼠形體肥胖、活動度下降，食欲下降，皮毛無光澤、蓬松度差，便溏，對外界反應能力下降，飲水量減少；與模型組相比，給藥組大鼠活動度較強，食欲可，皮毛光澤及蓬松度好，大便質地硬，對外界反應能力增強，飲水量較多。干預后，模型組大鼠的體質量均顯著高于正常組（P<0.05）；干預0～6周，給藥組大鼠的體質量均顯著高于正常組（P<0.05），干預7～8周，給藥組大鼠的體質量顯著低于模型組（P<0.05），見圖1。

2.2??三組大鼠的脂肪細胞病理變化

正常組大鼠的白色脂肪細胞、棕色脂肪細胞均呈空泡狀，近似圓形；模型組大鼠的白色、棕色脂肪細胞體積明顯大于正常組；干預8周后給藥組大鼠的脂肪細胞體積與正常組相似，見圖2。

2.3??三組大鼠的生化指標比較

干預8周后，給藥組大鼠的TG顯著低于模型組（P<0.05），GLU、TC、LDL-C水平略低于模型組，但比較無統計學意義（P>0.05），見表1。

3??討論

肥胖現已成為嚴重的社會健康問題。研究表明，肥胖不僅影響形體美觀，還可誘發糖尿病、胰島素抵抗等多種并發癥，對人民健康造成消極影響[8-9]。中醫湯藥不良反應小，是現階段肥胖治療的較佳方案。中醫認為肥胖是由多種原因導致體內膏脂堆積過多，《景岳全書·非風諸證治法》指出“肥人多有氣虛”，因其“陰盛于陽”，故又“多濕多滯”，以氣虛為本，痰濕氣滯為標。治療上以補氣虛為原則。此外，《脾胃論·脾胃盛衰論》中提到肥胖者常見脾胃虛弱，而脾胃虛弱則不能化生氣血精微以養五臟，五臟不興則諸證起，其多見痰濕、水腫。因此在治療肥胖時可采用健脾祛濕之藥物，本研究根據中藥配伍原則配制降濁合劑濃縮液，試圖為肥胖治療提供一個可行方案。

降濁合劑濃縮液由黃芪、丹參、生蒼術、生薏苡仁、生麥芽、生扁豆、絞股藍、生雞內金、生葛根、生山楂、荷葉組成。研究表明，黃芪可降低糖尿病大鼠血糖水平[10]；丹參可防止脂肪堆積，提高胰島素敏感性，控制血糖[11]；生蒼術可健脾燥濕、祛風散寒、消腫祛瘀[12]；生薏苡仁長于健脾，利于消腫，對虛胖的療效較好[13]；絞股藍可降血脂、防治血栓、調節血糖，適用于糖尿病肥胖的治療[14]；生扁豆可增強免疫、降血脂，且富含膳食纖維。此外生雞內金消食、消積；生葛根生津、止渴；生山楂生津、消食；荷葉升發清陽、涼血止血。諸藥合用，具有消脂平肝、補腎健脾的功效，可針對性治療由多因素導致的肥胖。為進一步確認降濁合劑濃縮液對肥胖的作用，本研究進行了體內驗證。

體質量增加是判斷肥胖最直觀的外在特征，同時，肥胖者的脂肪持續堆積將增加血黏稠度，使動物出現精神狀態萎靡、皮膚光澤暗淡等不良外在表現。本研究通過對高脂飲食誘導的肥胖大鼠的外在特征觀察發現，干預8周后，正常組大鼠形體適中、自主活動正常，食欲佳，皮毛光澤、蓬松，大便質地硬，對外界反應敏捷，飲水量正常；模型組大鼠出現形體肥胖、活動度下降，食欲下降，皮毛無光澤、蓬松度差，便溏，對外界反應能力下降，飲水量減少等表現；與模型組相比，給藥組大鼠活動度較強，食欲可，皮毛光澤且蓬松度好，大便質地硬，對外界反應能力增強，飲水量較多。降濁合劑濃縮液可顯著改善肥胖大鼠的體質量、精神狀態及皮毛光澤度。基于此，從宏觀角度可初步判斷，降濁合劑濃縮液對治療肥胖具有一定效果。研究顯示，肥胖大鼠的肝臟細胞內明顯可見氣球樣空泡的單個大脂滴擠向細胞膜，可見明顯的脂肪細胞[15-16]。本研究通過對肥胖大鼠脂肪細胞病理變化觀察發現，高脂飼養的大鼠的白色、棕色脂肪細胞體積均明顯變大，而降濁合劑濃縮液可顯著抑制高脂飲食誘導的脂肪細胞體積增大，提示降濁合劑濃縮液可緩解高脂飲食誘導的脂肪組織變性。

GLU、TC、TG、LDL-C等升高是冠心病的危險因素，其水平可作為預測冠心病病情的常規指標，且與肥胖程度呈正相關[17]。在本研究中，通過檢測GLU、TC、TG、LDL-C水平探究降濁合劑濃縮液對高脂飲食誘導肥胖大鼠的糖脂影響，結果顯示，降濁合劑濃縮液可抑制高脂飲食導致的大鼠的GLU、TC、TG、LDL-C水平升高。提示降濁合劑可降低糖脂指標，側面降低冠心病的發病風險。

綜上所述，降濁合劑濃縮液可改善肥胖大鼠的體質量和皮毛光澤度，緩解脂肪組織變性，降低糖脂指標。

[參考文獻][1] 宮祎慧，?閆彩鳳.?肥胖患者脂肪分布和代謝與骨質疏松癥關系的研究進展[J].?中華肥胖與代謝病電子雜志，?2020，?6（1）：?55–57.

[5] 李俊晴，?雷夢媛，?楊艷艷，?等.?人體測量學指標預測心血管疾病危險因素的研究進展[J].?中國全科醫學，?2020，?23（35）：?4524–4529.