不同劑量養(yǎng)心通脈有效部位方對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型大鼠心肌線粒體代謝相關(guān)酶及其轉(zhuǎn)運(yùn)的影響

尹夢(mèng)影，曹偉，胡鑫，鄭景輝，莫云秋

研究顯示，冠心病是心血管疾病的首要死亡原因，其主要治療方式是對(duì)心肌進(jìn)行早期再灌注［1-2］。而再灌注可導(dǎo)致心肌線粒體功能紊亂，進(jìn)而損傷心功能。心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI）指心肌血供短暫中斷后又迅速恢復(fù)正常，導(dǎo)致心肌能量代謝障礙、心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變等進(jìn)一步加重的現(xiàn)象［3］，故修復(fù)受損的線粒體是其重要的治療手段。養(yǎng)心通脈方是由我國著名中醫(yī)學(xué)家秦伯未先生運(yùn)用“扶養(yǎng)心氣，和通血脈”之法治療胸痹心痛的有效名方，而養(yǎng)心通脈有效部位方（active principle region of Yangxin Tongmai formula，apr-YTF）能促進(jìn)心肌線粒體的修復(fù)，其有效成分——人參皂苷、丹參酮ⅡA、總生物堿、人參多糖、復(fù)方多糖、總揮發(fā)油等與養(yǎng)心通脈方相似［4］。但與養(yǎng)心通脈方相比，apr-YTF中的活性成分更加豐富，其可以降低用藥劑量，提高抗MIRI的療效［5］。本研究旨在分析不同劑量apr-YTF對(duì)MIRI模型大鼠心肌線粒體代謝相關(guān)酶及其轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，以期為采用apr-YTF防治MIRI提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)時(shí)間 本實(shí)驗(yàn)時(shí)間為2020年6月至2021年6月。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性Wistar大鼠95只，體質(zhì)量為180～220 g，購自廣西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0013。大鼠在SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)中心常規(guī)飼養(yǎng)，飼養(yǎng)條件如下：5只大鼠為一籠，溫度控制在22～25 ℃，相對(duì)濕度為35%，大鼠自由飲水，常規(guī)飼料，不限制進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)室燈光為12 h/12 h日夜交替。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 apr-YTF由人參20 g、桂枝15 g、生地15 g、丹參25 g、澤瀉10 g組成，統(tǒng)一由廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院采購，藥材均為同一批次。將方劑放入圓底燒瓶?jī)?nèi)煎煮，首煎加8倍水，煮45 min；二煎加4倍水，煮30 min；攪拌均勻后用武火燒開，制成apr-YTF。冠心蘇合丸由北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司中藥廠生產(chǎn)（批號(hào)：Z11021184，每10丸8.5 mg）。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 病理組織切片機(jī)購自Thermo Fisher Scientific公司，光學(xué)顯微鏡購自O(shè)LYMPUS，動(dòng)物心電監(jiān)護(hù)儀購自美國SurgiVet公司，小動(dòng)物呼吸機(jī)、小動(dòng)物麻醉機(jī)及手術(shù)器械購自Harvard Bioscience公司，全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀購自上海涵飛醫(yī)療器械有限公司，KE-300S血液流變儀購自上海康美國際生化有限公司，Tecan Infinite 200Pro酶標(biāo)儀購自上海迪奧生物科技有限公司，1658033型電泳儀、電轉(zhuǎn)儀和電源購自美國Bio-Rad公司。

注射用青霉素鈉購自華北制藥股份有限公司，異氟烷購自深圳市瑞沃德生命科技有限公司，4%多聚甲醛通用型組織固定液購自Biosharpa；蘇木素、伊紅染色試劑購自上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司，肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzymes，CK-MB）、心肌肌鈣蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、磷酸果糖激酶1（phosphofructokinase 1，PFK1）、琥珀酸脫氫酶（succinate dehydrogenase，SDH）、腺苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體（adenine nucleotide translocator，ANT）、異枸櫞酸脫氫酶（isocitrate dehydrogenase，IDH）ELISA試劑盒及ATP含量生化試劑盒購自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司，腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2（tumor necrosis factor alpha-induced protein 2，TNFαIP2）抗體購自武漢貝茵萊生物科技有限公司（Bioswamp），MIRO1抗體購自NOVUS公司。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 分組及干預(yù)方法 將70只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組及apr-YTF低、中、高劑量組，每組10只。除空白對(duì)照組外，其他組大鼠構(gòu)建MIRI模型，具體方法為：將大鼠采用仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)，采用異氟烷進(jìn)行持續(xù)呼吸麻醉，待大鼠呼吸平穩(wěn)后，連接動(dòng)物心電監(jiān)護(hù)儀，實(shí)時(shí)觀測(cè)心電圖變化情況；將大鼠經(jīng)背位固定，充分暴露氣管后進(jìn)行氣管插管，并連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，大鼠呼吸頻率與呼吸機(jī)一致表明氣管插管成功；于胸前左側(cè)第3～4肋備皮消毒，逐層剝離并充分暴露心臟，于左心耳下緣用7-0 mm可吸收線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，結(jié)扎完成后將心臟迅速放回胸腔內(nèi)；結(jié)扎30 min后進(jìn)行再灌注2 h。心電圖導(dǎo)聯(lián)ST段弓背向上抬高說明造模成功。縫合胸壁，待大鼠呼吸頻率穩(wěn)定后暫停機(jī)械通氣以恢復(fù)其自主呼吸。如無異常，將大鼠放回干凈籠內(nèi)，密切觀察大鼠生命體征。術(shù)后常規(guī)應(yīng)用注射用青霉素鈉3 d以預(yù)防感染。造模期間，各組大鼠共死亡25只，為保證實(shí)驗(yàn)完整性，補(bǔ)充造模至每組10只。造模完成后，空白對(duì)照組及模型組大鼠正常飼養(yǎng)，陰性對(duì)照組大鼠給予0.9%氯化鈉溶液灌胃，陽性對(duì)照組大鼠給予冠心蘇合丸灌胃，apr-YTF低、中、高劑量組大鼠分別給予1.5、3.0、6.0 ml apr-YTF灌胃〔以成年人體質(zhì)量60 kg為標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物劑量換算方法計(jì)算給藥量，大鼠給藥量（g/kg）=成人給藥量（g/kg）×6.3〕，1次/d，不限制飲水、進(jìn)食，分籠飼養(yǎng)，共干預(yù)2周。

1.5.2 血液流變學(xué)指標(biāo)、血清心肌梗死標(biāo)志物水平檢測(cè)方法 造模24 h后，從空白對(duì)照組與模型組中隨機(jī)選取3只大鼠，采用5%水合氯醛（0.01 ml/g）腹腔注射進(jìn)行麻醉，待大鼠疼痛反射消失后采集其腹主動(dòng)脈血液5 ml，室溫靜置2 h后4 000 r/min離心15 min（離心半徑8.6 cm），取上清液備用。采用KE-300S血液流變儀檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)，包括全血低切、中切、高切黏度，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。采用ELISA檢測(cè)血清心肌梗死標(biāo)志物水平，包括CK-MB、cTnI、LDH水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.5.3 心肌組織病理學(xué)檢查 造模第14天，隨機(jī)選取各組大鼠3只，采用5%水合氯醛（0.01 ml/g）腹腔注射進(jìn)行麻醉；待大鼠疼痛反射消失后剪開胸腔，取出心臟，采用0.9%氯化鈉溶液沖洗干凈，使用4%多聚甲醛通用型組織固定液固定標(biāo)本；取適量心肌組織并采用10%多聚甲醛溶液浸泡過夜，采用PBS清洗，進(jìn)行乙醇梯度脫水、二甲苯透明，放入蠟塊浸漬，采用病理組織切片機(jī)將蠟塊切成3～5 μm的薄片，將切片放于熱水上，將石蠟融化展于玻片上，封固，采用蘇木素、伊紅染色試劑進(jìn)行染色；將玻片置于光學(xué)顯微鏡下，觀察心肌組織病理學(xué)變化情況。

1.5.4 線粒體代謝相關(guān)酶水平檢測(cè)方法 造模第14天，隨機(jī)選取各組大鼠6只，采用5%水合氯醛（0.01 ml/g）腹腔注射進(jìn)行麻醉，待大鼠疼痛反射消失后采集腹主動(dòng)脈血液5 ml；室溫靜置2 h后4 000 r/min離心15 min（離心半徑8.6 cm），取上清液備用。采用比色法檢測(cè)ATP水平，采用ELISA檢測(cè)PFK1、SDH、ANT、IDH水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.5.5 心肌組織中TNFαIP2、MIRO1表達(dá)水平檢測(cè)方法 造模第14天，隨機(jī)選取各組大鼠3只，采用5%水合氯醛（0.01 ml/g）腹腔注射進(jìn)行麻醉，待大鼠疼痛反射消失后剪開胸腔，取出心臟，用0.9%氯化鈉溶液沖洗干凈，使用4%多聚甲醛通用型組織固定液固定標(biāo)本；取適量左心室心肌組織，用液氮快速冷凍，于-80 ℃環(huán)境下保存?zhèn)溆茫徊捎肳estern blot法檢測(cè)心肌組織中TNFαIP2、MIRO1表達(dá)水平，方法如下：采用裂解液于冰上裂解心肌組織，研磨后14 000 r/min離心3 min（離心半徑10 cm），取上清液；進(jìn)行蛋白定量及變性、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、TBST洗滌，加入TNFαIP2及MIRO1一抗（1∶1 000）孵育過夜，加入二抗（1∶5 000）室溫孵育1 h，進(jìn)行ECL顯影；采用Image J軟件進(jìn)行條帶灰度分析，以目標(biāo)蛋白與β-actin的比值作為目標(biāo)蛋白表達(dá)水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Graphpad Prism 8.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血液流變學(xué)指標(biāo)、血清心肌梗死標(biāo)志物水平 模型組全血低切、中切黏度及血清CK-MB、cTnI、LDH水平高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；空白對(duì)照組與模型組全血高切黏度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 空白對(duì)照組與模型組血液流變學(xué)指標(biāo)、血清心肌梗死標(biāo)志物水平比較（±s，n=3）Table 1 Comparison of hemorheology indexes and serum myocardial infarction marker levels between blank control group and model group

表1 空白對(duì)照組與模型組血液流變學(xué)指標(biāo)、血清心肌梗死標(biāo)志物水平比較（±s，n=3）Table 1 Comparison of hemorheology indexes and serum myocardial infarction marker levels between blank control group and model group

注：CK-MB=肌酸激酶同工酶，cTnI=心肌肌鈣蛋白I，LDH=乳酸脫氫酶

組別血液流變學(xué)指標(biāo)（mPa·s）血清心肌梗死標(biāo)志物全血低切黏度全血中切黏度全血高切黏度CK-MB（ng/ml）cTnI（ng/L）LDH（ng/L）空白對(duì)照組27.7±2.26.3±0.44.6±0.316.1±2.2447.3±65.123.4±3.9模型組41.3±6.27.6±0.74.9±0.227.0±2.0662.9±56.332.9±1.5 t值4.6693.4701.86410.9807.5126.783 P值0.0160.0080.099＜0.001＜0.001＜0.001

2.2 心肌組織病理學(xué)檢查 空白對(duì)照組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)完整，心肌纖維組織整齊有序，細(xì)胞核形態(tài)正常；模型組大鼠心肌纖維斷裂，排列紊亂，大量細(xì)胞核分布于細(xì)胞外，心肌間質(zhì)中可見炎癥細(xì)胞浸潤、水腫；陰性對(duì)照組可見心肌纖維斷裂；與模型組相比，陽性對(duì)照組及apr-YTF低、中、高劑量組心肌水腫明顯減輕，炎癥細(xì)胞數(shù)量明顯減少，見圖1。

圖1 七組大鼠心肌組織病理學(xué)檢查結(jié)果（HE染色，×20）Figure 1 Histopathology examination results of myocardium in seven groups

2.3 線粒體代謝相關(guān)酶水平 七組ATP、PFK1、SDH、ANT、IDH水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組ATP水平低于空白對(duì)照組，模型組、陰性對(duì)照組PFK1、SDH、ANT、IDH水平高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組及apr-YTF低、中、高劑量組ATP水平高于模型組，陽性對(duì)照組及apr-YTF中、高劑量組PFK1、ANT、IDH水平低于模型組，陽性對(duì)照組及apr-YTF低、中、高劑量組SDH水平低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；apr-YTF低劑量組ATP、ANT水平高于陽性對(duì)照組，apr-YTF低、中劑量組PFK1、IDH水平高于陽性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；apr-YTF中劑量組ATP水平低于apr-YTF低劑量組，apr-YTF中、高劑量組PFK1、ANT、IDH水平低于apr-YTF低劑量組，apr-YTF高劑量組SDH水平低于apr-YTF低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 七組線粒體代謝相關(guān)酶水平比較（±s，n=6）Table 2 Comparison of mitochondrial metabolism-related enzyme levels in seven groups

表2 七組線粒體代謝相關(guān)酶水平比較（±s，n=6）Table 2 Comparison of mitochondrial metabolism-related enzyme levels in seven groups

注：PFK1=磷酸果糖激酶1，SDH=琥珀酸脫氫酶，ANT=腺苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體，IDH=異枸櫞酸脫氫酶，apr-YTF=養(yǎng)心通脈有效部位方；a表示與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；b表示與模型組比較，P＜0.05；c表示與陽性對(duì)照組比較，P＜0.05；d表示與apr-YTF低劑量組比較，P＜0.05

組別ATP（U/mg）PFK1（U/L）SDH（U/mg）ANT（pg/ml）IDH（U/L）空白對(duì)照組2.6±0.656.2±13.6154.0±17.4127.7±15.216.3±2.5模型組0.7±0.1a202.0±28.0a276.7±26.7a338.2±40.8a64.7±7.5a陰性對(duì)照組3.3±0.6b202.6±14.5a272.8±49.4a344.9±20.2a67.3±3.6a陽性對(duì)照組1.6±0.8b101.9±41.5b198.4±34.9b198.2±51.7b32.3±13.2b apr-YTF低劑量組2.5±0.7bc176.7±27.4c226.9±39.5b308.8±41.8c58.5±9.1c apr-YTF中劑量組1.7±0.4bd137.8±25.6bcd206.2±37.6b243.7±37.6bd43.6±8.6bcd apr-YTF高劑量組1.8±0.7b125.1±31.9bd181.3±31.3bd228.9±50.0bd41.7±10.3bd F值23.4946.6220.2750.2056.22 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.4 心肌組織中TNFαIP2、MIRO1表達(dá)水平 七組心肌組織中TNFαIP2、MIRO1表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組、陰性對(duì)照組心肌組織中TNFαIP2表達(dá)水平高于空白對(duì)照組，心肌組織中MIRO1表達(dá)水平低于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；陽性對(duì)照組及apr-YTF中、高劑量組心肌組織中TNFαIP2表達(dá)水平低于模型組，陽性對(duì)照組及apr-YTF低、中、高劑量組心肌組織中MIRO1表達(dá)水平高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；apr-YTF低劑量組心肌組織中TNFαIP2表達(dá)水平高于陽性對(duì)照組，apr-YTF低、中、高劑量組心肌組織中MIRO1表達(dá)水平低于陽性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；apr-YTF中、高劑量組心肌組織中TNFαIP2表達(dá)水平低于apr-YTF低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 七組心肌組織中TNFαIP2、MIRO1表達(dá)水平比較（±s，n=3）Table 3 Comparison of expression levels of TNFαIP2 and MIRO1 in myocardial tissue in seven groups

表3 七組心肌組織中TNFαIP2、MIRO1表達(dá)水平比較（±s，n=3）Table 3 Comparison of expression levels of TNFαIP2 and MIRO1 in myocardial tissue in seven groups

注：TNFαIP2=腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2；a表示與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；b表示與模型組比較，P＜0.05；c表示與陽性對(duì)照組比較，P＜0.05；d表示與apr-YTF低劑量組比較，P＜0.05

組別TNFαIP2MIRO1空白對(duì)照組0.37±0.110.99±0.07模型組1.11±0.08a0.75±0.11a陰性對(duì)照組0.99±0.15a0.72±0.08a陽性對(duì)照組0.64±0.06b1.23±0.07b apr-YTF低劑量組1.10±0.11c0.98±0.05bc apr-YTF中劑量組0.52±0.03bd1.05±0.06bc apr-YTF高劑量組0.49±0.04bd1.06±0.02bc F值35.1420.09 P值＜0.001＜0.001

3 討論

線粒體是決定心肌細(xì)胞生存率的重要因素，而心肌缺血缺氧會(huì)損傷線粒體功能，進(jìn)而影響心肌細(xì)胞的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，因而線粒體功能與MIRI息息相關(guān)［6］。MIRI期間心肌的缺血缺氧會(huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞內(nèi)的線粒體產(chǎn)生大量的活性氧（reactive oxygen species，ROS），從而導(dǎo)致鈣超載、氧化應(yīng)激等［7］，在這些因素協(xié)同作用下機(jī)體發(fā)生線粒體膜電位紊亂、細(xì)胞中ATP生成減少、糖酵解反應(yīng)增強(qiáng)以及氧化磷酸化解偶聯(lián)［8］，其實(shí)質(zhì)是三大物質(zhì)代謝紊亂導(dǎo)致心肌能量發(fā)生改變，主要表現(xiàn)為脂肪酸的β氧化轉(zhuǎn)向糖酵解，導(dǎo)致心肌障礙、心臟超微結(jié)構(gòu)及功能的異常［9］。研究表明，心肌能量代謝被破壞以及線粒體功能障礙與心肌重塑相關(guān)，而減少缺血再灌注對(duì)線粒體的損傷是提高心肌缺血患者治療效果、改善其預(yù)后的重要措施［10］。養(yǎng)心通絡(luò)方具有“扶養(yǎng)心氣，和通血脈”的作用，其最早在1989年被用于治療冠心病心絞痛［11］。臨床研究表明，養(yǎng)心通絡(luò)方治療冠心病心絞痛的有效率較高［4］。本課題組前期研究表明，apr-YTF不僅具有明顯的抗心肌缺血、加快血液流動(dòng)速率、抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，而且對(duì)于線粒體損傷有一定的修復(fù)作用［12］。本研究旨在分析不同劑量apr-YTF對(duì)MIRI模型大鼠心肌線粒體代謝相關(guān)酶及其轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。

在血液流變學(xué)中，血漿黏度指標(biāo)中的任何一項(xiàng)高于參考范圍即可判定為血液流變學(xué)異常。心肌受損后機(jī)體的泵血功能會(huì)發(fā)生改變，血流速度減慢并處于高凝狀態(tài)［13］。血清CK-MB、cTnI、LDH是反映心肌壞死的標(biāo)志物，對(duì)于判斷病情的嚴(yán)重程度和預(yù)后極為重要。研究表明，MIRI模型大鼠心肌細(xì)胞膜的通透性增大，從而釋放大量CK-MB、LDH和cTnI到血清中，進(jìn)而加重大鼠心肌缺血缺氧［14］。本研究結(jié)果顯示，模型組全血低切、中切黏度及血清CK-MB、cTnI、LDH水平高于空白對(duì)照組，提示模型組大鼠血液處于高凝狀態(tài)，且心肌受損，再次驗(yàn)證MIRI模型構(gòu)建成功。

本研究心肌組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，空白對(duì)照組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)完整，心肌纖維組織整齊有序，細(xì)胞核形態(tài)正常；模型組大鼠心肌纖維斷裂，排列紊亂，大量細(xì)胞核分布于細(xì)胞外，心肌間質(zhì)中可見炎癥細(xì)胞浸潤、水腫；陰性對(duì)照組可見心肌纖維斷裂；與模型組相比，陽性對(duì)照組及apr-YTF低、中、高劑量組心肌水腫明顯減輕，炎癥細(xì)胞數(shù)量明顯減少；提示apr-YTF可減輕MIRI模型大鼠的心肌損傷程度。

研究顯示，心肌長時(shí)間缺氧可導(dǎo)致線粒體相關(guān)代謝酶活性降低、ATP耗竭及心肌收縮功能受損；無氧條件下機(jī)體主要通過糖酵解產(chǎn)生ATP，因此，在心肌缺血缺氧期間，心肌的能量來源主要依靠糖酵解［15］。而PFK是糖酵解過程中的關(guān)鍵酶［16］。SDH和IDH是有氧氧化的關(guān)鍵酶，不僅可反映有氧氧化水平，還可反映心肌線粒體相關(guān)代謝酶活性［17］。ANT在線粒體能量生成及利用的過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其影響著整個(gè)細(xì)胞能量代謝的全過程［18］。本研究結(jié)果顯示，模型組ATP水平低于空白對(duì)照組，PFK1、SDH、ANT、IDH水平高于空白對(duì)照組，提示MIRI模型大鼠存在線粒體能量代謝功能障礙。本研究結(jié)果還顯示，陽性對(duì)照組及apr-YTF低、中、高劑量組ATP水平高于模型組，SDH水平低于模型組；陽性對(duì)照組及apr-YTF中、高劑量組PFK1、ANT、IDH水平低于模型組；提示不同劑量apr-YTF均可有效減輕MIRI模型大鼠線粒體能量代謝功能障礙。此外，apr-YTF中、高劑量組PFK1、ANT、IDH水平低于apr-YTF低劑量組，apr-YTF高劑量組SDH水平低于apr-YTF低劑量組，而apr-YTF中、高劑量組ATP、PFK1、SDH、ANT、IDH水平比較差異無統(tǒng)計(jì)意義，提示中劑量（3.0 ml）、高劑量（6.0 ml）apr-YTF減輕MIRI模型大鼠線粒體能量代謝功能障礙的效果相似，且優(yōu)于低劑量（1.5 ml）apr-YTF。

心肌缺血再灌注時(shí)過度的氧化應(yīng)激可使細(xì)胞內(nèi)ROS增多和細(xì)胞膜的通透性增大，從而導(dǎo)致線粒體功能障礙［16］。心肌發(fā)生急性炎癥反應(yīng)時(shí)會(huì)釋放大量的TNFαIP2，同時(shí)產(chǎn)生大量的ROS自由基，從而損傷線粒體內(nèi)膜［19］。MIRO1為線粒體銜接蛋白，定位于線粒體外膜上，線粒體損傷后MIRO1發(fā)生磷酸化和泛素降解使受損的線粒體與微管分離，從而誘導(dǎo)線粒體功能障礙［20］。本研究結(jié)果顯示，模型組心肌組織中TNFαIP2表達(dá)水平高于空白對(duì)照組，MIRO1表達(dá)水平低于空白對(duì)照組，提示MIRI模型大鼠可能存在線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)障礙；陽性對(duì)照組及apr-YTF中、高劑量組心肌組織中TNFαIP2表達(dá)水平低于模型組，陽性對(duì)照組及apr-YTF低、中、高劑量組心肌組織中MIRO1表達(dá)水平高于模型組，apr-YTF中、高劑量組心肌組織中TNFαIP2表達(dá)水平低于apr-YTF低劑量組，而apr-YTF中、高劑量組心肌組織中TNFαIP2、MIRO1表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示不同劑量apr-YTF均可有效減輕MIRI模型大鼠線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，且中劑量（3.0 ml）、高劑量（6.0 ml）apr-YTF的效果相似，均優(yōu)于低劑量（1.5 ml）apr-YTF。

綜上所述，不同劑量apr-YTF均可有效改善MIRI模型大鼠心肌線粒體代謝相關(guān)酶，進(jìn)而減輕線粒體能量代謝功能障礙，其還可減輕線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)障礙；且中劑量（3.0 ml）、高劑量（6.0 ml）apr-YTF的效果相似，均優(yōu)于低劑量（1.5 ml）apr-YTF。但本研究為基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，樣本量較小，尚需要大樣本量的臨床試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證本研究結(jié)論。

作者貢獻(xiàn)：尹夢(mèng)影進(jìn)行研究的構(gòu)思與設(shè)計(jì)、實(shí)施與可行性分析，論文撰寫及修訂，數(shù)據(jù)分析；曹偉、胡鑫進(jìn)行數(shù)據(jù)收集；鄭景輝、莫云秋負(fù)責(zé)質(zhì)量控制及審校；莫云秋對(duì)文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。