天然大蒜精油對感染球蟲蛋雛雞免疫指標的影響

許利軍 鄭金環 常麗云 徐 靜 宣鳳苓 侯建庫 侯 斐 陳 輝

（1.保定市畜牧工作站，河北 保定 071000；2.唐山師范學院生命科學系，河北 唐山 063000；3.河北省承德市興隆縣第一中學，河北 承德 067300；4.河北農業大學動物科技學院，河北 保定 071000；5.保定市順平縣農業農村局，河北 保定 072250）

雞球蟲病主要是由艾美耳屬球蟲（Eimeriacoccidia）感染腸道，從而引起雞腹瀉甚至死亡的寄生蟲性傳染病，其中以雛雞的發病率最高[1]。臨床中常使用化學藥物防治雞球蟲病，肉、蛋中能夠檢測到藥物殘留，降低了肉、蛋產品的質量和安全性，給人類健康帶來潛在的危害[2]。近年來，雞球蟲病免疫預防的研究工作取得了一定進展，但仍存在一些問題，因此需要尋找一種有效、健康、環保的制劑防治球蟲病。

大蒜精油具有天然性、多功能性、無毒副作用和無抗藥性等優點[3-4]，能夠促進動物采食，具有抗氧化[5-7]、抗菌消炎[8-9]、免疫調節[10-11]等功能，已廣泛應用于畜禽疾病預防和治療[12]。研究表明，大蒜精油可治療由各種細菌、病毒和腸道寄生蟲引起的疾病[13]。王建華等[14]研究發現，全程使用大蒜精油的肉雞未出現黃白痢、球蟲、腸毒綜合征等疾病。但柯淇勻等[15]使用大蒜素治療肉雞球蟲時，發現10 g/kg大蒜素對減少球蟲卵囊效果并不明顯。徐靜等[16]發現，在0～4周齡蛋雛雞飲水中添加大蒜精油能夠有效改善十二指腸環境，促進腸道對營養物質的吸收，提高蛋雛雞生產性能。王文利等[17]指出，在產蛋雞飼糧中添加不同水平的大蒜素能夠增加機體抗氧化能力，提高機體的免疫力。目前，天然大蒜精油在蛋雛雞中的應用較少，尤其是用于防治蛋雛雞腸道寄生蟲病鮮有報道。本試驗研究飲水中添加不同劑量天然大蒜精油對蛋雛雞感染球蟲后免疫指標的影響，以期為使用天然大蒜精油防治蛋雞球蟲病提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

柔嫩艾美耳球蟲卵囊由河北農業大學寄生蟲教研室保存；天然大蒜精油（大蒜素含量為7.5%）由達農威生物發酵工程技術（深圳）有限公司提供；地克珠利（20170504023）由合肥中龍神力動物藥業有限公司生產。

1 日齡農大3 號節糧蛋雛雞450 只。飼養蛋雛雞前，雞舍經甲醛、高錳酸鉀熏蒸消毒24 h，通風3 d。所用飼糧應為全價雛雞飼糧，且不含抗球蟲藥物，基礎日糧組成及營養水平見表1。

表1 基礎日糧組成及營養水平（風干基礎）

1.2 試驗設計

選擇健康狀況良好、體重相近的1 日齡蛋雛雞400 只，隨機分為5 組，每組4 個重復，每個重復20 只，即健康對照組（HC 組）、感染組（IN 組）以及天然大蒜精油低（L 組）、中（M 組）、高劑量組（H 組），大蒜精油組分別在飲水中添加0.04、0.06、0.08 mL/L大蒜精油，雛雞飼養至23日齡。16日齡時，經糞便檢查確認無球蟲感染后，除健康對照組外，其他各組分別口服柔嫩艾美爾球蟲卵囊5×104個/只。攻毒期為7 d（16～22 日齡），試驗期共23 d（1～23日齡）。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 生長性能

分別于雛雞16 日齡和23 日齡8：00，試驗雞空腹稱重，計算各組平日增重和相對增重率。

1.3.2 糞便卵囊計數

于雛雞20、21、22日齡收集糞便，按照McMaster's法計算卵囊數，以每克糞便卵囊數為單位。每天隨機取5個時間點收集新鮮糞便，攪拌均勻，進行卵囊計數，取2 g糞便，加58 mL飽和食鹽水攪拌均勻，使用60目銅篩過濾。濾液稀釋至60 mL，使用麥氏計數板計數，求平均值，平均值即為當天卵囊數。

1.3.3 免疫器官指數

分別于雛雞20、23 日齡，每組隨機選取5 只雞翅下靜脈采血，3 500 r/min分離血清，-20 ℃冷凍保存。雛雞采血后屠宰，剝離免疫器官（胸腺、脾臟和法氏囊），使用濾紙吸除血液，剝離脂肪，稱重記錄，計算免疫器官指數。

1.3.4 血清生化指標

使用酶標儀測定血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）、尿酸（UA）、總膽固醇（TC）、白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量。所有檢測指標均參照試劑盒（南京建成生物工程研究所）說明書。

1.4 數據統計與分析

數據采用Excel 2019 軟件進行初步整理，SPSS 21.0統計軟件進行單因素方差分析，Duncan's 法進行多重比較。結果以“平均值±標準差”表示，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 天然大蒜精油對蛋雛雞生長性能的影響（見表2）

由表2 可知，HC 組、M 組蛋雛雞的末重顯著高于IN 組、L 組和H 組（P＜0.05）。HC 組蛋雛雞的平均增重顯著高于其他組（P＜0.05），M組蛋雛雞的平均增重顯著高于IN 組、L 組和H 組（P＜0.05）。HC 組蛋雛雞的相對增重率最高，L組最低。結果表明，飲水中添加0.06 mL/L天然大蒜精油能夠緩解球蟲病給雞帶來的食欲不振等癥狀，減少生長性能的降低。

2.2 天然大蒜精油對蛋雛雞球蟲卵囊排出的影響（見表3）

表3 天然大蒜精油對蛋雛雞球蟲卵囊排出的影響

由表3 可知，20～22 日齡，HC 組均未檢出卵囊。20 日齡時，HC 組、M 組和H 組克卵囊數均顯著低于IN 組和L 組（P＜0.05），L 組顯著低于IN 組（P＜0.05）。21日齡時，HC組克卵囊數顯著低于IN組、L組、M組和H 組（P＜0.05），M 組顯著低于IN 組（P＜0.05）。22 日齡時，HC組、M組和H組克卵囊數均顯著低于IN組和L組（P＜0.05）；HC組顯著低于M組（P＜0.05）。HC組、L組、M組和H組卵囊總數均顯著低于IN組（P＜0.05），HC組、M組和H組均顯著低于L組（P＜0.05），HC組、M組均顯著低于H 組（P＜0.05），HC 組顯著低于M 組（P＜0.05）。IN 組和L 組卵囊值最高，均為40；HC 組卵囊值最低，為0。

結果表明，飲水中添加0.06 mL/L天然大蒜精油能夠減少球蟲卵囊的排出。

2.3 天然大蒜精油對蛋雛雞免疫器官指數的影響（見表4）

表4 天然大蒜精油對蛋雛雞免疫器官指數的影響 單位：%

由表4 可知，20 日齡時，M 組蛋雛雞胸腺指數顯著高于HC組、IN組、L組和H組（P＜0.05）。

2.4 天然大蒜精油對蛋雛雞血清生化指標的影響（見表5）

表5 天然大蒜精油對蛋雛雞血清生化指標的影響

由表5 可知，20 日齡時，M 組蛋雛雞血清IgM 含量顯著高于其他組（P＜0.05），H組血清IgM顯著高于HC組、IN 組和L 組（P＜0.05）；H 組蛋雛雞血清IgA 含量顯著高于其他組（P＜0.05），L 組和M 組顯著高于HC 和IN 組（P＜0.05）；M 組蛋雛雞血清IgG 含量顯著高于其他組（P＜0.05），L 組和H 組顯著高于HC 和IN 組（P＜0.05）；IN 組、L 組蛋雛雞血清UA 含量顯著高于HC 組（P＜0.05）；HC 組和M 組蛋雛雞血清ALB 含量顯著高于IN和L組（P＜0.05）。HC組、L組、M組和H組蛋雛雞血清TP含量顯著高于IN組（P＜0.05）；HC和H組蛋雛雞血清LDL-C含量顯著低于IN組、L組和M組（P＜0.05）。

23日齡時，M組蛋雛雞血清IgA含量顯著高于其他組（P＜0.05）。

結果表明，0.06 mL/L 天然大蒜精油組蛋雛雞血清IgM、IgG 和IgA 含量均較高，具有提高機體免疫力的趨勢。

3 討論

3.1 天然大蒜精油對蛋雛雞生長性能的影響

精神萎靡、食欲不振等是蛋雛雞感染球蟲后的典型癥狀，導致蛋雛雞營養不良、體重下降。大蒜精油由于氣味特殊，能夠誘導蛋雛雞進食，有效調節腸道功能，促進營養物質的消化吸收，改善患病蛋雛雞的體況[18]。本試驗結果顯示，健康對照組和0.06 mL/L天然大蒜精油組蛋雛雞的平均末重和平均增重均顯著高于其他各組，表明0.06 mL/L天然大蒜精油能夠緩解球蟲病引起的蛋雛雞食欲不振。

3.2 天然大蒜精油對蛋雛雞球蟲卵囊排出的影響

El-Latif等[19]使用1×104個艾美耳球蟲卵囊/只感染肉仔雞，在飲水中添加不同水平的大蒜素，14 d 后發現與其他組相比，10 g/L的大蒜素添加組卵囊總數明顯降低。本試驗結果顯示，與感染組相比，各組卵囊總數均極顯著降低，且以0.06 mL/L 天然大蒜精油組卵囊總數最低，表明飲水中添加不同濃度的天然大蒜精油能夠減少球蟲卵囊的排出，與上述試驗結果一致。可能是由于大蒜精油能夠通過滲透到卵囊壁，對球蟲卵囊產生抑制或殺滅作用[20]，從而減少卵囊的排出量。

3.3 天然大蒜精油對蛋雛雞免疫器官指數的影響

脾臟、法氏囊和胸腺是蛋雛雞重要的免疫器官，是T、B淋巴細胞產生、發育和成熟的場所，因此免疫器官的發育狀況直接影響蛋雛雞的免疫能力。研究表明，禽類免疫器官指數與機體免疫機能呈正相關關系[21]。夏倫斌等[22]指出，大蒜素可提高肉仔雞的免疫器官指數。本試驗結果顯示，天然大蒜精油不同劑量組免疫器官指數均高于感染組，表明天然大蒜精油具有提高蛋雛雞免疫機能的趨勢。

3.4 天然大蒜精油對蛋雛雞血清免疫球蛋白含量的影響

血清中免疫球蛋白含量反映了蛋雛雞機體的抗病力，其中IgM、IgA 和IgG 在免疫過程中發揮主要作用[23]。王文利等[17]發現，大蒜素能夠使畜禽機體免疫力增強，降低發病率。本試驗結果顯示，20日齡時，與感染組相比，添加0.06、0.08 mL/L 天然大蒜精油組蛋雛雞血清IgM、IgG和IgA含量均顯著升高；23日齡時，各組蛋雛雞血清IgM、IgG 含量差異不顯著，0.06 mL/L 天然大蒜精油組IgA 含量顯著高于其他組。本試驗結果表明，0.06 mL/L天然大蒜精油能使蛋雛雞機體特異性抗體含量升高，提高蛋雛雞免疫力。

3.5 天然大蒜精油對蛋雛雞血清生化指標的影響

UA 含量反映了蛋雛雞對蛋白質吸收利用的狀況，UA 含量較低時，雞體內環境相對穩定[24]，UA 含量升高則與腎小管功能障礙有關[25]。蛋雛雞感染球蟲后，由于腎小管功能出現障礙，尿酸含量也隨之發生變化。蛋雛雞感染1×105個球蟲卵囊后第4～6 d，UA 有明顯升高，在感染第7 d 尿酸值回歸正常[26]。本試驗發現，20 日齡時，感染組、0.04 mL/L天然大蒜精油組蛋雛雞尿酸含量顯著升高；23 日齡時，各組UA 含量差異均不顯著，與上述研究結果相似。趙瑞平[27]使用復方中草藥（青蒿、常山、仙鶴草、白頭翁、肉桂）治療雛雞柔嫩艾美耳球蟲病，發現感染第8 d，各組雛雞血清ALB 和TP 含量有顯著差異。但本試驗表明，20 日齡時，添加0.06、0.08 mL/L 天然大蒜精油組蛋雛雞血清ALB 和TP 含量高于感染組，23 日齡時，各組ALB 和TP 含量差異均不顯著，推測可能是由于選用雛雞品種及藥物不同所致。蛋雛雞感染球蟲后血清ALB和TP含量下降，由于病雞腸道功能受阻，從而引起肝臟蛋白質合成量降低。因此，本試驗表明天然大蒜精油能夠在一定程度上修復肝臟、腎臟受損功能。

4 結論

本研究表明，飲水中添加0.06 mL/L天然大蒜精油能夠有效減少卵囊排出量，具有抗球蟲效果；促進了免疫球蛋白的分泌和蛋白質的產生及利用，提高了蛋雛雞免疫能力。