QoI 類殺菌劑應用與抗性機制研究進展

趙健欽，金京，陳杰

(浙江農林大學 浙江省綠色農藥 2011 協同創新中心，浙江 臨安 311300)

1 甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑概況

甲氧基丙烯酸酯類(QoIs)殺菌劑是繼苯并咪唑類、三唑類后第3 個里程碑式的殺菌劑類別[1]，被廣泛用于防治作物病害[2]。該殺菌劑擁有廣譜、滲透、快速分布等特點和較好的環境相容性，可用于莖葉噴霧、種子處理，也可進行土壤處理。其在植物體內的傳導活性較強，不僅能阻止真菌在植物體內侵入和擴展，而且能明顯地降低初侵染和再侵染的孢子基數以達到防治病害的目的。該類殺菌劑具有良好的內吸性和熏蒸作用，被葉片吸收后可在木質部中隨水流在運輸系統中流動(即內吸性)，此外其可在葉片表面的氣相中流動，當其隨著氣相進入葉片后又可在木質部中流動(即熏蒸作用)，使得活性成分能夠有效再分配和充分傳遞。甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑耐雨水沖刷性能好、持效期長，因此其活性不受應用環境影響，在晴雨天氣均能提供良好的保護和治療作用。該類殺菌劑對卵菌綱、藻菌綱、子囊菌綱和半知菌綱病害，如白粉病、銹病、穎枯病、網斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性，且使用劑量低，適用于禾谷類、果樹和蔬菜等多種作物[3]。在我國，QoI 類殺菌劑在各類糧食作物和經濟作物病害防治上均有登記[4]。

1.1 作用機理

國際殺菌劑抗性委員會(FRAC)基于交叉抗性模式和作用方式將甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑歸類于C3 (Group 11)(圖1)。該類殺菌劑是以天然源物質為基礎，經結構修飾和化學優化而具有農藥活性，主要作用于真菌線粒體，與線粒體上細胞色素b 的Qo 位點結合，阻斷細胞色素b 和細胞色素c1之間的電子傳遞，阻止NADH 的氧化和ATP 的合成，抑制真菌呼吸作用、破壞其內部的能量循環從而抑制真菌生長(圖2)[5]。

圖1 基于交叉抗性模式和作用方式的殺菌劑劃分

圖2 甲氧基丙烯酸酯衍生物靶標

1.2 種類及應用

目前已開發的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑多達20 余種，廣泛應用于草坪、蔬菜、水果、谷類、核果類等植物[9]。各品種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的主要化合物結構存在著一定的差異，因而其內吸傳導性、生物活性、防治對象及適用作物存在不同。目前商品化的主要品種有：

嘧菌酯(azoxystrobin)由先正達開發并于1997 年上市，1999 年獲中國行政保護。根據作物和病害的不同該殺菌劑施用劑量為25～400 g a.i./hm2，通常使用劑量為100～375 g a.i./hm2，如在25 g a.i./100L劑量下，對葡萄霜霉病有很好的預防作用，在12.5 g a.i./100L 劑量下，對葡萄白粉病和蘋果黑星病有很好的防治效果，在200 g a.i./hm2劑量下，對馬鈴薯疫病具有預防作用[7]。嘧菌酯是先正達殺菌劑產品線的重要組成部分，一度占據全球殺菌劑年銷售額榜首，年銷售峰值超過10 億美元。2019 年，該殺菌劑全球銷售額14.89億美元，2014—2019 年復合年增長率為4.15%，近年來占據的全球市場份額始終保持在前10 位[10-11]。

吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)由巴斯夫公司2000 年研發并于2002 年上市，該殺菌劑應用范圍較廣，現已在全球100 個多國家登記，用于100 多種作物，其中在我國登記的作物有80 余種[4]。研究表明吡唑醚菌酯對多種病原菌有效，例如谷物葉枯病菌(Septoria tritici)和條紋病菌(Pyrenophora teres)，大豆褐紋病菌(Septoria glycines) 、 紫斑病菌(Cercospora kikuchii) 和銹病病菌(Phakopsora pachyrhizi)，荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchii)，葡萄白粉病菌(Uncinula necator)，番石榴葉斑病菌(Pestalotiopsis disseminatum)[12-16]等。吡唑醚菌酯在食用作物上的用量為50～250 g a.i./hm2，草坪上的用量為280～560 g a. i./hm2。巴斯夫已在我國推出18 個基于吡唑醚菌酯的高效殺菌和對植物具有保健作用的施樂健?系列產品，包括百泰、凱潤、健達等，這些產品對幾乎所有作物具有病害防治作用及植物保健作用。同時，吡唑醚菌酯作為“有病治病，無病健體”理念的典范，是美國環保署、歐盟和中國就“植物健康作用”登記的第一個產品[17-18]。2019 年吡唑醚菌酯全球銷售額10.15 億美元，2014—2019 年復合年增長率為0.30%。

肟菌酯(trifloxystrobin)于1999 年在南非和瑞士上市，被認為是第2 代甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，對白粉病、葉斑病有特效[7]。大豆是肟菌酯的第一大用藥作物，2015 年，大豆用肟菌酯的銷售額為3.10 億美元，占其全球市場的47.7%；2016 年，大豆用肟菌酯銷售額為3.03 億美元，占其全球市場的47.3%[19]。自上市以來，肟菌酯全球市場總體呈增長趨勢。2015 年，由于全球大豆病害抗性的加劇、氣候條件不利以及轉基因作物的大量種植等多方面因素，導致肟菌酯銷售額略有下降，但在2018 年農化市場逐漸復蘇，2019 年肟菌酯全球銷售額為8.42 億美元，2014—2019 年復合年增長率為4.68%[11]。肟菌酯適配性強，具有較多混配產品，三唑類殺菌劑是其最好的配伍類型。肟菌酯可與三唑類殺菌劑三唑醇、苯醚甲環唑、丙環唑、環丙唑醇、戊唑醇、三唑酮等進行混配，還可與琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌劑氟唑菌苯胺、氟吡菌酰胺、啶酰菌胺等進行混配[4]。

氟嘧菌酯(fluoxastrobin)由拜耳公司于1994 年發現并于2004 年在歐洲首先上市。作為全新一代QoI類殺菌劑，具有優于嘧菌酯、肟菌酯和吡唑醚菌酯等同類產品的內吸活性、跨層傳導和木質部傳導性。該殺菌劑可有效防治100 余種真菌病害，對種傳和土傳病害腥黑穗病、黑穗病等，小麥葉部病害均具有優異防效。田間藥效試驗結果表明，氟嘧菌酯對小麥葉枯病、穎枯病和銹病，大麥云紋病、條紋病和銹病等的防效均達到或超過醚菌酯[20]，但對大麥白粉病或網斑病等氣傳病害的防效較差[7]。氟嘧菌酯使用量一般為75～200 g a.i./hm2，用作禾谷類作物的種子處理劑時，用量為5～l0 g a.i./100kg。由于該殺菌劑制劑產品可與眾多產品配伍，且目前專利到期，國內多家企業已啟動該產品的登記和上市工作，并獲批開展氟嘧菌酯單劑和復配制劑的田間試驗，因此氟嘧菌酯在未來存在著巨大的市場潛力，很可能成為繼嘧菌酯后又一優良產品。2018 年氟嘧菌酯全球銷售額2.45 億美元，2013—2018 年的復合年增長率為3.9%[20]。

啶氧菌酯(picoxystrobin)由先正達2001 年在歐洲首次推出，2006 年由杜邦公司收購后，先后在拉美、北美市場登記，在我國于2012 年7 月獲得臨時登記并于同年11 月獲正式登記。啶氧菌酯是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑中內吸活性最強的殺菌劑，與嘧菌酯和吡唑醚菌酯等比較，對小麥葉枯病、網斑病和云紋病有更強的治療效果[21-23]，據報道，該藥劑比嘧菌酯和肟菌酯等具有更好的治療活性[7,24]，且啶氧菌酯在小宗作物上的表現絲毫不輸其同類藥劑，在我國的主要登記也是集中在小宗作物上用來替代嘧菌酯。使用啶氧菌酯防治谷物病害時，谷物的產量和質量明顯提高，在生長期無病害發生，綠葉始終保持完好。冬小麥大田試驗表明，用啶氧菌酯處理的小麥比用肟菌酯處理的平均增產0.2t/hm2[7]。在歐洲小麥試驗田進行的試驗中，用啶氧菌酯處理過的小麥產量與對照相比增產22%，比使用醚菌酯和三唑類殺菌劑氟環唑(epoxiconazole)混劑處理的增產0.4 t/hm2，這表明啶氧菌酯在小麥病害防治中效果好且增產顯著[7,25]。

2006 年，杜邦公司收購啶氧菌酯后，通過一系列新增登記以及開發復配產品等方式來提升銷售額，其與環丙唑醇和苯并烯氟菌唑的復配產品熱銷于拉美地區，用于防治大豆、谷物和玉米病害。2019 年，隨著新復配產品的增多，啶氧菌酯的全球銷售額上升至4.85 億美元，2014—2019 年復合年增長率為6.74%[26]。2018 年起啶氧菌酯不再在歐洲國家繼續登記，但這并未影響其在全球其他地區的銷售，其在國內乃至整個亞洲的市場份額還在不斷上升，國內廠家正在進一步挖掘啶氧菌酯的市場潛能，啶氧菌酯的開發和利用仍處于上升趨勢[11,25]。

2 甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑抗性發生現狀

甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑作用位點單一，屬于高抗藥性風險類殺菌劑[27]，在實際應用過程中極易產生抗藥性。隨著生產上頻繁使用和用藥量不斷上升，導致各類病原菌抗性問題日趨嚴重，給全球糧食安全問題提出了嚴峻考驗。

采用SPSS 21.0統計軟件進行數據的統計，P＜0.05代表干預前后效果差異明顯，計量資料和計量數據分別使用t檢驗和x2檢驗。

2.1 子囊真菌對QoI 類殺菌劑抗性發生現狀

在QoI 類殺菌劑上市僅2 年后，1998 年首次在德國的谷物類作物中發現小麥白粉病菌(Blumeria graminis)的QoI 類殺菌劑耐藥菌株，隨著全球該類殺菌劑的用量增加和使用范圍擴大，抗性報道逐漸增多[28-29]。Sierotzki 等[30]2000 年在歐洲小麥白粉病菌中發現抗性菌株，而在之后的十幾年間，小麥白粉病菌的抗藥性在世界范圍內仍在不斷蔓延。2008年Sedláková等[31]報道德國、法國、比利時、丹麥和英國均發現了小麥白粉病菌對肟菌酯不同程度的抗性，在德國最高抗性菌株分布達到70%～90%。2017 年在澳大利亞的小麥田中同樣也發現了小麥白粉病菌抗性菌株[32]。2021 年Cowger 等[33]在美國中部和東部15 個州共分離出381 株小麥白粉病菌，它們對吡唑醚菌酯敏感度適中，RF 最大值為11.2(抗性因子RF 指殺菌劑對目標菌株與敏感菌株的EC50之比)。

以小麥白粉病為代表的氣傳病害傳播速度較快，目前，在其他白粉病中也陸續檢測到QoIs 抗性。1999 年美國紐約256 株葡萄白粉病菌(Erysiphe necator)中有2%能夠在嘧菌酯2 mg/L 的劑量下存活[34]。Wong 等[35]2002 年研究發現QoI 類殺菌劑對美國葡萄白粉病菌存在不同程度的抗性，其中肟菌酯抗性最高(EC50：0.015 mg/L)，其余依次為嘧菌酯(EC50：0.013mg/L)、吡唑醚菌酯(EC50：0.00442mg/L)。僅過了10 年，Miles 等[36]于2012 年在對美國密歇根州的12 株葡萄白粉病菌株的研究中發現1株抗性突變體，其能在添加100 mg/L肟菌酯的培養基上正常生長，該菌株對肟菌酯的抗藥性是Wong 等在2002年所報道抗性的6 667 倍。當前，世界各地均有不同程度的葡萄白粉病菌對QoI 類殺菌劑的抗藥性發生，在歐洲已有多國出現QoIs 抗性報道[37-38]，Hall等[39]2016 年測得吡唑醚菌酯對澳大利亞72 個葡萄白粉病菌株的EC50值范圍為0.000 5～14.4 mg/L，其中42%的菌株EC50值在1 mg/L 以上。2008—2013年采集自歐洲和澳大利亞的239 株蘋果白粉病菌(Podosphaera leucotricha)對吡唑醚菌酯較敏感，EC50值范圍為1.39～2.07 mg/L，沒有發現抗藥性菌株[40]。Heick等[41]2015—2018 年在丹麥和瑞典采集的43 株甜菜白粉病菌(Erysiphe betae) 中監測到25 個對吡唑醚菌酯的抗性菌株。

Frederick 等[42]研究發現紐約和美國東部的果園蘋果黑星病菌(Venturia inaequalis)對QoI 類殺菌劑抗性較低，67%的供試菌株對QoI 類殺菌劑肟菌酯表現為敏感，僅有28%表現為抗性。直到2020 年，Jaklová等[43]從捷克多地采集的蘋果黑星病菌中發現，抗性菌株多達95%。2021 年，Turan 等[44]在意大利北方對49 個蘋果黑星病菌樣品進行敏感性測定，結果顯示，70%以上菌株對肟菌酯表現出抗藥性，EC50值大于0.12 mg/L。由此可見，全球范圍內蘋果黑星病菌對QoI 類殺菌劑的抗性水平在迅速升高。

2.2 半知真菌對QoI 類殺菌劑抗性發生現狀

2013 年，日本采集的376 個甜菜褐斑病菌(Cercospora beticola) 中有15 個對嘧菌酯和醚菌酯都有抗性[45]。2015 年，Piszczek 等[46]從波蘭采集的甜菜褐斑病供試菌株中，有56%在添加1 mg/L 嘧菌酯的PDA 培養基中能正常生長，抗性株最高EC50值大于100 mg/L。2018 年，Zakariae 等[47]從摩洛哥采集的甜菜褐斑病供試菌株中至少70%的菌株對嘧菌酯具有抗性，EC50值大于10 mg/L。日本和波蘭甜菜褐斑病菌抗性均為首次報道。段亞冰等[48]在溫室中采集到的黃瓜褐斑病菌(Corynespora cassiicola)對QoIs 類殺菌劑的抗性高達100%。2014—2018 年采集自阿根廷布宜諾斯艾利斯的82 個小麥褐斑病(Pyrenophora tritici repentis)均為QoIs抗性菌株，以1 mg/L 的嘧菌酯、肟菌酯和唑菌胺酯處理，病菌孢子生長不受抑制。而100 mg/L 的嘧菌酯、肟菌酯和唑菌胺酯對病原菌也無法完全抑制[49]。

2.3 鞭毛真菌對QoI 類殺菌劑抗性發生現狀

2001 年，整個歐洲采用合理的QoI 類殺菌劑施用方案，并對抗藥性進行了嚴密監測，因此，當時歐洲對葡萄霜霉病的控制整體較好，暫無葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)對QoI 類殺菌劑產生抗性的報道[2]。然而，僅在一年后在法國和意大利就檢測到霜霉病菌對其產生抗性[5]。2005年，王巖等[50]研究結果表明，烯肟菌酯對我國北京、天津、河北、內蒙古、湖北等地采集的52 株黃瓜霜霉病菌EC50范圍為0.003 0～0.031 3 mg/L，平均EC50為(0.010 1±0.003 1) mg/L，具有較高的抗性風險。2021 年，Campbell 等[51]在美國佐治亞州3 個葡萄園采集的39 株葡萄霜霉病菌對嘧菌酯和吡唑醚菌酯全部表現出抗性。隨著QoI 類殺菌劑在生產上的頻繁使用和用藥量不斷上升，抗藥性問題呈現加重趨勢，延緩和治理QoI 類殺菌劑的抗性、延長藥劑使用壽命已經成為一個迫切需要解決的科學問題。韓秀英等[52]研究表明，嘧菌酯對19 株我國山東、河北、武漢等地采集的黃瓜霜霉病菌的EC50范圍為0.000 12～0.009 34 mg/L，同時建立了黃瓜霜霉病菌對嘧菌酯的敏感基線。趙建江等[53]研究發現番茄葉霉病菌對嘧菌酯存在較高的抗性風險。

3 甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑抗性分子機制

3.1 靶標位點氨基酸取代

在大多數情況下，QoI 類殺菌劑抗性是由線粒體細胞色素b(cytb)基因的點突變產生。由于細胞色素b 由突變率很高的線粒體基因組編碼，因此病原菌極易因該基因的突變而導致耐藥性發生，在田間極易產生抗藥性。

病原菌對QoI 類藥劑產生抗性的原因主要與cytb基因的127～147 位和275～296 位間的氨基酸區域有關，主要表現為第143 位的甘氨酸變為丙氨酸(G143A)[2]，和第129 位的苯丙氨酸變為亮氨酸(F129L)[54]。這種氨基酸轉換導致病原菌對殺菌劑的敏感性顯著降低，并且沒有或幾乎沒有適合度損失，根據病原體和檢測系統的不同，抗性系數(RF)為100～1 000。具F129L 的菌株大都表現中低抗性，相比之下G143A 分離株基本表現出完全高抗性[55]且出現的頻率更高，例如在歐洲、澳大利亞和美國多個州，從小麥白粉病菌、小麥葉斑病菌、小麥穎枯病菌、大豆灰斑病菌中均鑒定出G143A 突變[29,32,56-58]，目前，Neves 等[59]建立了一種基于G143A 突變的PCR 檢測方法，可以成功區分QoI敏感和耐藥菌株。準確監測這一突變將有助于減緩QoI 抗性的傳播，并對這一病原菌系統中的殺菌劑抗性管理具有重要意義。此外，在小麥黃斑葉枯病菌(Pyrenophora tritici repentis) 中還發現了G137R的位點突變[55]，Cosseboom 等[60]在葡萄晚季腐爛病菌中發現了包含S108A 和A194V 的突變，但這2 種突變的抗性都較低。Zhou 等[61]在荔枝露疫病菌的抗性株中發現G142A、G142S、Y131C、F128S 等突變，通過分子對接技術分析表明，由于藥劑自身結構的差異及與口袋腔作用力變化強弱的程度不同，F128S、Y131C 突變株對于不同的殺菌劑具有RF＞500 和RF＜100 不同程度的抗性。

3.2 旁路氧化途徑

除了cytb基因中靶標位點氨基酸的取代，其他機制也可能誘導病原真菌對QoIs 的耐藥性。交替氧化途徑過程中的關鍵酶AOX 是一種單亞基(非血紅素)含雙鐵的單分子膜蛋白，廣泛存在于植物、真菌和原生線粒體中，其在呼吸過程中充當復合物III 和IV 的旁路，形成一種不同于細胞色素系統的電子傳遞系統，在植物病原體線粒體內形成另一種呼吸途徑，即線粒體的電子通過繞過細胞色素bc1復合物QoI 的抑制位點而轉移，這種旁路有效克服了QoI 類殺菌劑對復合物III 的抑制作用[62]。

在亞致死濃度的QoI 殺菌劑壓力下，交替呼吸可能是植物病原真菌從敏感到全面抗性轉變的重要途徑。AOX 有誘導表現型和組成型2 種形式，前者多發生在以細胞色素為介質的呼吸途徑被阻斷或線粒體蛋白的合成受到抑制的情況下，AOX 被誘導表達，后者則是不受呼吸途徑的影響，不需要其他因子的誘導即可表達，一般對甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的敏感性比誘導型的敏感性差。在植物體外，AOX 活性可以被旁路氧化酶抑制劑水楊肟酸(SHAM)抑制，SHAM 是一種相對活性較低的AOX抑制劑，其作為一種抗真菌藥物被觀察到在體外與QoI 類殺菌劑具有協同增效作用[63-64]。楊維等[65]在含SHAM 培養基中測定肟菌酯對香蕉黑斑病菌菌絲生長的抑制，結果表明水楊肟酸存在時，肟菌酯對菌絲生長的抑制比肟菌酯單獨作用效果明顯，但在抗藥菌株中，未觀察到明顯區別，說明交替氧化途徑在敏感菌株中更為重要[36,55]。

3.3 外排轉運體機制

ABC(ATP-binding cassette)和MFS(major facilitator superfamily)復合體蛋白是最具代表性的保護病原菌免受殺菌劑影響的外排轉運體[66-67]，可轉運多種底物，介導各種有毒底物從細胞外流，防止毒素積累。合成殺菌劑通常被認為是對真菌種群的毒素，其功效因此會受到真菌體內藥物外排轉運體活性的影響[55,68]。植物病原菌ABC 轉運蛋白的研究主要集中在參與植物對殺菌劑的多重抗性，如灰霉病菌中的BcATRB 和BcATRD 以及青霉菌中的PMR1和PMR5[69]。已有大量研究報道了ABC 轉運體在病原菌多藥抗性(multi-drug resistance)中發揮著重要作用。研究者在構巢曲霉中第一次檢測到由atrB基因編碼的ABC 轉運體與QoI 類殺菌劑抗性存在相關性，發現該基因過表達可以保護病原菌免受幾乎所有供試殺菌劑的抑制作用[55]。MFS 轉運蛋白在病原菌的多藥抗性中也發揮著重要作用，小麥葉枯病菌的多藥抗性相關研究指出，Mgmfs1基因的啟動子序列可發生519 bp 的插入突變，致使該基因編碼的轉運蛋白過量表達，從而導致其產生多藥抗性[55]。有報道稱通過插入編碼基因的啟動子可誘導轉運蛋白MFS1 的過表達，由此引起病原菌產生多重耐藥性[66]。

4 植物病原菌對QoI 類殺菌劑抗藥性治理

甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑在全世界受到廣泛的應用，已超越三唑類成為全球第一大殺菌劑類型，可防治不同作物的多種病害。抗性數據分析表明，該類殺菌劑存在著較高的抗性風險[20]。不合理使用藥劑會使抗藥性突變菌株在較短時間內形成抗藥性群體，導致殺菌劑失效，從而造成嚴重損失，如在西班牙的穆爾西亞瓜類種植區，僅在2008 年瓜類白粉病菌(Podosphaera fusca)中多達74%的菌株對QoI 類殺菌劑已產生了抗性[55]。因此，治理抗藥性必須合理規范藥劑的使用。

抗性風險管理需要多方合作，包括但不限于3 個方面：降低殺菌劑本身固有風險、規范殺菌劑施用者操作以及農業相關部門的積極管理。殺菌劑抗性行動委員會(FRAC)將病原菌固有風險和殺菌劑固有風險劃分為高、中、低3 個等級(1=低，2=中，3=高)，將農藝風險等級同樣劃分為3 個等級(0.25=低，0.5=中，1=高)，結合病原菌固有風險、藥劑固有風險和農藝風險等級，以3 者的乘積作為相對應病原菌對殺菌劑的抗性風險等級(聯合風險)，其中理論抗性風險劃分標準：0～1=低等風險，1～3=中低風險，3～6=中風險，6=中高風險，9=高風險(表1)[27]。因此，首先應盡量減少利用甲氧基丙烯酸酯等高風險類殺菌劑防治同樣為高風險的病原菌，如白粉病菌、灰霉病菌、霜霉病菌等，避免產生較高的聯合風險[6]。其次，殺菌劑的輪換和混配使用是延緩抗性的有效手段之一，避免長期單一使用某一產品或某一類藥劑，必須采用科學的混配用藥和輪換用藥防治措施，即與不同作用機理或不存在交互抗性的殺菌劑混用或輪換用藥，例如圖1中C3 (Group 11)的殺菌劑之間存在交互抗性，而C3 (Group 11A)中的殺菌劑與存在G143A 突變的C3(Group 11)中的殺菌劑無交叉抗性，因而可使用C3(Group 11A)中的殺菌劑與之進行混配使用[70]。

表1 殺菌劑固有抗性風險和病原菌固有抗藥性風險等級[27]

在此基礎上，可進一步研制開發具有增效作用或具有協同作用的殺菌劑混劑，根據抗藥病原群體形成的主要影響因素，針對性地設計抗藥性治理策略。綜合考慮所有與抗藥性發生相關的影響因子，抗藥性的治理也應當從施藥者因素出發。進一步建立完善一系列正確的施藥操作規范，加大全方位宣傳教育，落實到每一位相關從業者，使其明確科學合理用藥的重要性，不得私自加大施藥量。企業與產品銷售所在地方縣級農業管理部門應積極合作，組織開展對農藥經營者和農藥施用者進行抗藥性治理、科學用藥及實際操作性知識培訓。例如，施藥者應在病害早期施用殺菌劑，避免在病害嚴重發生時期噴施高劑量的藥劑，一則達不到有效的防治，二則在高濃度藥劑的定向選擇下，加速了田間抗性群體的產生和發展。同時，施藥者還需掌握一定的農業防治措施，如利用非同一寄主作物進行輪作或休耕，改變播期，降低田間濕度，注意田園清潔，及時移除、深埋或焚燒修剪或摘除病花、病果、病葉等作物組織等。同時，選用物理防治、生物防治等其他有利于減輕病害發生和危害的非化學防治措施，例如選用抗病品種，增強植物對病害的抗病性[71-72]。該措施旨在精準有效防控病害，減少農藥用量，防止病害突發性流行危害，促進農業增產與農民增收。此外，為延緩該類藥劑抗藥性突變體的產生速度，對于已有報道顯示對甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑產生抗藥性的作物病害，農業農村部農藥登記管理部門應適當控制防治該病害具有交互抗性的藥劑登記數量，并組織登記同類產品的企業開展抗藥性監測。在登記藥劑的產品標簽上標注抗性風險等級，并標明相應的抗性風險管理措施、生長季該產品的使用次數、不能與其他哪類藥劑混用或輪用等信息。在殺菌劑推廣應用之前，藥企必須具有抗藥性風險評估報告，預測病原菌產生抗藥性的潛在風險，并在產品標簽上標注抗性風險級別。這有助于在田間出現實際抗藥性導致藥劑防效下降之前，指導生產中及早采用預防性的抗藥性治理。

與此同時，日本殺菌劑抗藥性行動委員會(Japan FRAC)建議，在梨上每年最多使用2 次QoI 類殺菌劑，每個季節使用吡菌苯威的次數也需要少于3 次[73]；歐洲農業政策指出，從2014 年起，所有歐盟成員國都應實施蟲害綜合治理(IPM)，以減少農藥的影響和使用[74]。此外，開展病原菌對QoI 類殺菌劑的抗性監測和鑒定工作在病害防治中十分重要。大量文獻強調細胞色素b 靶標位點氨基酸取代在QoI 類殺菌劑抗性中的作用，但隨著近年來對QoI 類抗性機制的認識不斷深入，越來越多的研究將QoI 類抗藥現象歸因于不同于靶標位點氨基酸取代的機制，例如交替呼吸、外排轉運體和其他等未知機制。因此檢測病原菌群體抗藥性不能僅僅依據cytb靶標位點氨基酸取代，還需建立殺菌劑和防治對象的敏感性基線和抗性監測方法，根據監測結果，明確病原菌對殺菌劑抗藥性的產生和發展情況，在實踐中進一步調整、補充和完善抗性治理策略，通過改變殺菌劑的應用方案，從而有助于防止對QoI 類耐藥的病原體群體的進一步發展[75-76]。