新生兒溶血病檢測結果及其影響因素分析

程路玲，汪邦山

新生兒溶血?。╤aemolytic disease of newborn，HDN）是母嬰血型不合引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病，以Rh 和ABO 血型不合引起的HDN（Rh?HDN 和ABO?HDN）最為常見［1-2］。HDN 主要通過血型鑒定和溶血三項試驗（抗人球蛋白試驗、血清游離抗體試驗和紅細胞抗體釋放試驗）進行確診［3］。微柱凝膠卡式法是一種新型免疫檢測方法，能夠同時檢測出IgM 和IgG 抗體，靈敏度較高，近年來在HDN 血清學檢測中的應用也逐漸增多［4-5］。本研究選取合肥市第一人民醫院收治的有疑似溶血癥狀的患兒92 例，采用微柱凝膠卡進行檢測，分析檢測結果及其相關影響因素。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2020 年1?12 月安徽省合肥市第一人民醫院收治的92 例疑似HDN 的新生兒，存在高膽紅素血癥，主要癥狀為黃疸、貧血，其中男45 例，女47 例，出生時間0～15 d，中位出生時間為4.5 d。本研究通過安徽省合肥市第一人民醫院倫理委員會審批。

1.2 檢測方法

采集患兒及其母親抗凝全血，3 000 r/min 離心10 min，分離紅細胞與血清。使用微柱凝膠檢測卡（ABO?Rh 血型檢測卡及抗人球蛋白卡）、配套專用設備及相關試劑（強生公司）進行檢測。（1）血型檢測：新生兒母親ABO 及Rh 血型應用成人ABO?Rh 血型檢測卡進行檢測，新生兒ABO 及Rh 血型應用新生兒ABO?Rh 血型檢測卡進行檢測。（2）抗人球蛋白試驗（直接法）：將新生兒的適量紅細胞應用生理鹽水進行洗滌，共進行3 次，完畢后將上清液去除，加入生理鹽水制備成1% 紅細胞懸浮液。在檢測卡的小孔內加入50 μl 的1%紅細胞懸浮液，離心5 min，完畢后觀察結果。（3）血清游離抗體試驗：在抗人球蛋白卡兌入50 μl 的0.8%標準ABO紅細胞，再加入患兒50 μl 血漿，在孵育箱孵育15 min，離心后觀察。（4）紅細胞抗體釋放試驗：取壓積紅細胞，用生理鹽水洗滌3 次，再加入相當于1/2 壓積紅細胞的生理鹽水與之混合，制備成紅細胞懸液，放在56 ℃水浴箱孵育10 min。完畢后取出離心，留下上層的放散液，在抗人球蛋白卡中加入50 μL 的0.8% 標準ABO 紅細胞，再加入50 μL 放散液，孵育15 min，離心后觀察結果。（5）對于存在ABO?HDN 的患兒或血清游離抗體試驗結果“++”以上的患兒進行抗體的特異性鑒定，同時對紅細胞表面是否有與之相對應的抗原進行鑒定。

1.3 結果判讀

血型鑒定和抗人球蛋白試驗（直接法）結果出現凝集即為陽性，血清游離抗體試驗和紅細胞抗體釋放試驗檢出可以與新生兒紅細胞出現反應的抗體即為陽性。以抗體釋放試驗陽性為金標準診斷［6-7］。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0.2 軟件進行統計學分析。出生時間為計量資料，經Shapiro?Wilk 檢驗顯示不服從正態分布，以范圍和中位數表示；計數資料以百分比表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患兒性別與HDN 檢出率的關系

92 例疑似HDN 患兒中，共檢出HDN 45 例，檢出率為48.91%。其中男性患兒HDN 檢出率為33.33%（15/45），女性患兒HDN 檢出率為63.83%（30/47），女性患兒HDN 檢出率高于男性患兒（χ2=8.556，P=0.003）。

2.2 患兒日齡與HDN 檢出率的關系

根據出生日齡，將疑似HDN 患兒分為≤1 d 組、2 d 組、3 d 組、4 d 組、5 d 組、≥6 d 組，6 組患兒的HDN 檢出率分別為71.43%（5/7）、76.92%（10/13）、69.23%（9/13）、53.85%（7/13）、41.67%（5/12）、26.47%（9/34），可見日齡對新生兒HDN的檢出率具有影響，隨著患兒的日齡增加，HDN 的檢出率逐步降低（χ2=15.471，P<0.05）。

2.3 HDN 患兒日齡與溶血三項試驗靈敏度的關系

以紅細胞抗體釋放試驗為金標準，血清游離抗體試驗檢測HDN 的靈敏度為80.00%（36/45），抗人球蛋白試驗（直接法）檢測HDN 的靈敏度為48.89%（22/45）。按日齡進行分組后，統計學分析結果表明，日齡對抗人球蛋白試驗（直接法）檢測靈敏度有影響（χ2=11.556，P<0.05）。見表1。

表1 不同日齡HDN 患兒與溶血三項試驗靈敏度的關系［例（%）］

2.4 ABO 血型抗體檢出情況

共檢出ABO?HDN 患兒43 例，其中IgG 抗A 抗體引起HDN 有20 例（46.51%），IgG 抗B 抗體引起HDN 有23 例（53.49%）。

3 討論

母嬰血型不合為HDN 的主要原因［8］。HDN 溶血三項試驗中，抗人球蛋白試驗（直接法）和紅細胞抗體釋放試驗能對患兒紅細胞結合血型抗體進行檢測，血清游離抗體試驗主要對患兒血清中的母體血型抗體進行檢測，通過溶血三項試驗與血型鑒定可以準確診斷HDN［9］。本研究結果顯示疑似HDN 的92 例新生兒中，HDN 檢出率為48.91%（45/92），并且女性患兒HDN 檢出率比男性患兒高（63.83%vs33.33%，P=0.003），與部分文獻結果［10-11］一致。日齡≤1 d組、2 d 組、3 d 組、4 d 組、5 d 組、≥6 d 組患兒的HDN 檢出率分 別 為 71.43%、76.92%、69.23%、53.85%、41.67%、26.47%，HDN 的檢出率隨著患兒的日齡增加逐步降低（P<0.05），表明患兒的日齡越小HDN 的檢出率越高。患兒出生24 h 之內，體內會存在一定數量的致敏紅細胞、游離抗體，隨著時間增加，致敏紅細胞逐漸被破壞，游離抗體消失［12］。因此，為確保檢測所得結果準確性，需要在新生兒發現存在高膽紅素血癥的同時，盡早進行血型鑒定和溶血三項試驗檢測。

本研究以紅細胞抗體釋放試驗為金標準，血清游離抗體試驗和抗人球蛋白試驗（直接法）檢測HDN 的靈敏度分別為80.00% 和48.89%，抗人球蛋白試驗（直接法）的靈敏度較低，并且患兒日齡對抗人球蛋白試驗（直接法）的檢出率有影響（P<0.05）?？谷饲虻鞍自囼灒ㄖ苯臃ǎ┰谂R床診斷HDN中價值顯著，借助該方法可以區分ABO?HDN 與其他類型HDN［13］。對于ABO 血型不合所致的HDN，抗人球蛋白試驗（直接法）一般呈陰性或弱陽性，因此檢測靈敏度較低，且隨著日齡的增加、抗體逐漸被中和，其靈敏度進一步降低；而其他血型尤其是Rh 血型不合所致的HDN，抗人球蛋白試驗（直接法）結果的陽性強度多數在“+”以上，并且強度越高代表HDN 病情程度越重［14］。

ABO?HDN 是最常見的HDN 類型［12］。本研究中ABO溶血患兒共有43 例，其中由IgG 抗A 抗體引起的有20 例，IgG 抗B 抗體引起的有23 例。本研究病例數較少，未對Rh分型HDN 進行分析。Rh 血型系統的抗原免疫原性按照強弱順序應為D>E>c>C>e，對D 抗原進行檢測為臨床常規項，臨床相關實踐之中多考慮RhD?HDN，而容易忽略Rh 其他分型的HDN［15］。在二孩、三孩政策的推動下，Rh 其他分型HDN 出現的可能性逐漸增加［16］。結合相關研究結果，針對存在流產、輸血史以及死胎的產婦，或是存在HDN 病史者，均需要接受不規則抗體、Rh 血型分型檢測，避免出現HDN的漏檢［17-18］。

綜上所述，母嬰血型不合是HDN 的主要病因，患兒性別和日齡會對HDN 檢出率造成影響。為避免出現抗體漏檢，導致HDN 診斷出現臨床錯誤，應盡早對疑似HDN 患兒進行血型鑒定及抗體篩查。