健步消腫止痛油成分分析與評價*

陳土榮，吳啟端，吳雪茹

（1. 廣州中醫藥大學第三附屬醫院，廣東 廣州 510378； 2. 廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣東 廣州 510405）

健步消腫止痛油是廣州中醫藥大學第三附屬醫院（下文以我院代稱）的院內制劑，有活血化瘀、舒筋通絡、消腫止痛功效。臨床治療跌打損傷、慢性勞損、筋傷、扭挫傷，以及骨質增生、骨質疏松等引起的疼痛腫脹、瘀斑等癥20 余年，其組成藥物略有調整。本研究中根據目前組方藥物特點［1］，采用氣相色譜- 質譜聯用（GC-MS）法分析其主要成分，并考察在不同條件下主要成分的變化，系統評價其內在質量和穩定性，為健步消腫止痛油的質量評價提供參考?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890A-5975C 型氣質聯用儀（美國Agilent公司）；AE-200 型分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.1 mg）；0.45μm針筒式微孔濾膜過濾器（天津市騰達過濾器件廠）。

1.2 試藥

健步消腫止痛油（批號分別為20180701，20180901，20181001，記為樣品1，2，3），薄荷腦（南通薄荷廠有限公司，批號為180102），丁香油（湛江市睿致香料有限公司，批號為20180601），冰片（株洲松本藥業有限公司，批號為180201），桉油（佛山市南海中南藥化廠，批號為170901），松節油（湖南爾康制藥股份有限公司，批號為060620180502），均由我院制劑室提供；無水乙醇為色譜純，無水硫酸鈉為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 試驗條件

色譜柱為DB-1ms石英毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25μm），進樣口溫度為250 ℃，接口溫度為260 ℃，載氣為氦氣，流速為1.0 mL/min，柱壓為80 kPa，分流比為20∶1，進樣量為1.0 μL；升溫程序：初始溫度為60 ℃，以5 ℃/ min 的速率升至75 ℃，以2 ℃/ min 的速率升至81 ℃，以1 ℃/min的速率升至83 ℃，以5 ℃/min的速率升至103 ℃，以30 ℃/min 的速率升至200 ℃，保持2 min。電子轟擊離子源（70 eV），雙燈絲；電離電壓為1.2 kV，掃描范圍40～400 aum，掃描間歇0.5 s。

2.2 供試品溶液制備

取樣品約50 mg，精密稱定，置5 mL容量瓶中，加無水乙醇定容，再加適量無水硫酸鈉適量，用0.45μm 針筒式微孔濾膜過濾器濾過，取續濾液，即得。

2.3 方法學考察

精密度試驗：取同一批供試品溶液（樣品批號為20180901）適量，按2.1項下試驗條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果各成分峰面積的RSD均小于3.0%（n=6），表明方法精密度良好。

穩定性試驗：取同一批供試品溶液（樣品批號為20180901）適量，分別于室溫下放置0，2，4，6，8，12，24 h時按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄峰面積。結果各成分峰面積的RSD均小于3.0%（n=7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內基本穩定。

重復性試驗：取樣品（批號為20180901）適量，共6份，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下試驗條件進樣測定，記錄峰面積。結果各成分的RSD均小于3.0%（n=6），表明方法重復性良好。

2.4 樣品檢測

取樣品（批號為20180701）適量，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下試驗條件進樣測定，部分成分GC - MS 總離子流圖見圖1（峰號1 - 21 對應表1 中的化合物1-21）。經譜庫檢索，結合質譜數據與人工圖譜解析，鑒定樣品中的21 個成分，與原料藥對比，確定其來源。采用峰面積歸一化法計算各成分的相對百分含量。其中，平均相對百分含量＞1%的主要成分有11個，分別為α-蒎烯、β-蒎烯、α-松油烯、β-水芹烯、1，8-桉葉素、異龍腦、龍腦、薄荷醇、丁香酚、石竹烯、傘花烴。21 個成分總相對百分含量＞98%，11 個主要成分總相對百分含量＞95%。詳見表1。

表1 樣品中21個成分的相對百分含量及其來源Tab.1 Relative percentage content and source of 21 components in samples

圖1 總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram

2.5 穩定性研究

室溫敞口放置：取3批樣品各1瓶，分別于室溫敞口放置0，6，12，24，48 h 時取樣，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下試驗條件測定。結果11 個主要成分的相對百分含量的RSD均小于5.0%（n=5）。詳見表2。

表2 室溫敞口放置下樣品主要成分相對百分含量（%）Tab.2 Relative percentage content of main components in samples under the condition of exposure at room temperature（%）

加熱破壞與光照破壞：取3 批樣品各50 mg，置5 mL 容量瓶中，于60 ℃加熱2 h，按2.2 項下方法制備加熱破壞供試品溶液，按2.1 項下試驗條件進樣測定。另取3 批樣品各50 mg，置5 mL 容量瓶中，分別于紫外燈下254 nm和366 nm波長處各照射2 h，按“加熱破壞”方法制備供試品溶液和進樣測定。結果0 h、加熱和光照后，11 個主要成分的相對百分含量的RSD均小于5.0%。詳見表3。

表3 加熱破壞與光照破壞條件下樣品主要成分相對百分含量（%）Tab.3 Relative percentage content of main components in samples under heating and lighting damage（%）

長期穩定性：將3 批樣品在上市包裝條件下室溫存放36 個月，每2～3 個月取樣1 次，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，計算其平均相對百分含量。結果共檢測14 次，11 個主要成分中9 個無明顯變化，α- 松油烯逐漸減少，傘花烴逐漸增加，3 批樣品中二者總平均相對百分含量分別為（2.366 ± 0.048）% 、（2.325 ± 0.047）% 、（0.769 ±0.027）%，RSD分別為2.01%，2.01%，3.48%。提示2 種成分相對百分含量互相消長，合計無明顯變化。詳見表4 和圖2。

表4 樣品36個月內主要成分相對百分含量（%）Tab.4 Relative percentage content of main components of samples within 36 months（%）

圖2 36個月內3批樣品中α-松油烯和傘花烴相對百分含量變化趨勢Fig.2 Trends of relative percentage content change of α - terpinene and cymene in three batches of samples within 36 months

3 討論

健步消腫止痛油含丁香油、薄荷腦、冰片、桉油、松節油等藥物。松節油的主要成分為α-蒎烯，能增進局部血液循環、緩解腫脹和輕微止痛作用，穿透力強，能滲入深部組織而引起刺激，進而促進血液循環。故松節油在臨床中常作為皮膚刺激藥，用于治療肌肉痛或關節痛等［2］。薄荷腦具有多種藥理活性，能選擇性地刺激人體皮膚或黏膜的冷覺感受器，產生冷覺反射和冷感。有研究表明，低溫有利于抑制炎性反應［3］。薄荷腦外用可抗炎、止痛、止癢、抗菌、促進血液循環、減輕浮腫等［4-9］。桉油主要成分為1，8 - 桉葉素，具有促進透皮吸收、抗炎、抗氧化、抗微生物、抗腫瘤等藥理作用，對機體的呼吸系統、神經系統、循環系統和消化系統均有一定的保護作用［10］。冰片主要成分是龍腦和異龍腦，具有開竅醒神、消腫止痛、抗菌、抗炎等功效［11］。丁香油具有抗菌、消炎和止痛等功效［12］。上述藥物合用，可發揮抗炎、消腫、止痛作用。臨床可有效治療腰腿痛、肩頸痛、風濕痛、關節痛、跌打腫痛、肌肉勞損等癥。

本研究中根據健步消腫止痛油組方，采用GC-MS法分析其成分，鑒定其中的21個化學成分，其總相對百分含量＞98%。主要成分有11個，其總相對百分含量＞95%。其中薄荷醇占27%，α- 蒎烯占25%，1，8 - 桉葉素、龍腦、丁香酚各占10%，異龍腦占6%。其余5 個成分相對百分含量均低于2%。通過室溫敞口放置、加熱破壞、光照破壞、室溫放置36個月考察樣品的穩定性，結果前3種條件下，樣品中主要成分相對百分含量均無明顯變化。室溫下放置36 個月后，其中9 個主要成分相對百分含量無明顯變化，α- 松油烯和傘花烴互相消長，但總量無明顯變化。研究中發現，α- 松油烯和傘花烴轉化速率與二者的比值有關，比值越大轉化越慢；且單一原料藥中未見二者轉化的現象。推測可能是其他藥物成分促成這2 個成分的轉化，具體原因有待進一步研究。

綜上所述，本研究中所建立的方法操作簡便，結果穩定可靠，可為健步消腫止痛油的質量評價提供參考；健步消腫止痛油的主要成分在室溫放置（短期、長期）、加熱、光照條件下基本穩定。