淺析農藥殘留檢測過程中提高數據準確度的方法探析

●曹志玲（灤平縣農業農村局 河北 承德 068250）

《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》（NY/T 761—2008）方法標準是利用氣相色譜法來測定蔬菜和水果中農藥殘留，分為試樣制備、提取凈化、測定等步驟，檢測者應在檢測過程的每一個環節都掌握方法要領，注重細節處理，才能做到數據的準確可靠[1]。

1 原理

1.1 有機磷類農藥殘留檢測原理

試樣中有機磷類農藥殘留用乙腈提取，提取溶液經過過濾、濃縮后，用丙酮定容，注入氣相色譜儀，農藥組分經毛細管柱分離，用火焰廣度檢測器（FPD 磷濾光片）檢測。保留時間定性、外標法定量。

1.2 有機氯類、擬除蟲菊酯類農藥殘留檢測原理

試樣中有機氯、擬除蟲菊酯類農藥殘留用乙腈提取，提取液經過過濾、濃縮后，采用固相萃取柱分離，凈化，淋洗液經濃縮后，被注入氣相色譜，農藥組分經毛細管柱分離，用電子捕獲檢測器（ECD）檢測。保留時間定性，外標法定量。

2 試劑與材料

按照NY/T 761—2008 標準，在檢測有機磷和有機氯及擬除蟲菊酯類農藥殘留時，要使用GB/T 6682 中規定的至少二級的水，乙腈、丙酮、正己烷都應選用色譜純。在使用試劑前，檢測人員應對乙腈、丙酮、正己烷等試劑做有效性驗證。通過上機檢測，確認純度級別能夠滿足實驗要求，對檢測物質的成分沒有干擾的試劑才能用于檢測實驗，提高檢測數據的準確度。

在實驗中，還要用到氯化鈉。使用前要將氯化鈉在干燥箱中140℃烘烤4 h，才能起到良好的鹽析和分層作用，從而確保實驗數據的準確度。

3 農藥標準溶液的配制

按照NY/T 761—2008 標準，檢測員需要配制低濃度（一般為0.05～0.10 mg/L）的農藥混合標準溶液，配制方法如下：

將1 mL 100 mg/L 的農藥標準品全部轉移液至10 mL 容量瓶中，用丙酮或正己烷定容，得到10 mg/L 單一標準儲備液。每種10 mg/L 單一標準儲備液各1 mL，轉移至同一10 mL 容量瓶中，用丙酮或正己烷定容，得到1 mg/L 混合標準中間液，再將混合標準中間液按照實驗需要逐級稀釋，配制成實驗所需的上機標準混合工作液[2]。

在配制標準混合工作液時，檢測者要根據各農藥在儀器上產生的響應值，按照NY/T761—2008 標準要求，對不同的農藥進行分組，配制成不同組分的混合標準上機工作液，這樣能夠避免響應值接近的農藥組分在同一組而無法區分，從而確保檢測數據的準確度。

在實驗操作中，對于辣椒、韭菜等一些基質干擾比較強的蔬菜，檢測者應配制基質標，使用基質標對待測物質進行標量，這樣可以排除試樣基質組分對待測組分的干擾，盡可能提高檢測結果的準確度。配制基質標的方法如下：

移取1 mL 1 mg/L 混合標準儲備液至10 mL容量瓶中，用待測物質空白溶液定容，得到0.1 mg/L 混合標準工作液，移入自動進樣瓶中，上機檢測，簡稱基質標，可根據實際操作的需要配制不同濃度的基質標。

4 試樣制備

用于農藥殘留檢測的試樣應是新鮮植物性農產品樣品，應按照NY/T 761—2008 標準方法制備，具體方法如下：

在采樣地點依據地形和樣品批次量的多少分別采用對角線采樣法、棋盤采樣法、蛇形（S）采樣法和梅花點采樣法等常用采樣法選取不少于3 kg 的整顆樣品，這些方法可以確保采取的樣品具有代表性，確保檢測數據的準確度。

將采取的樣品去除根及腐爛萎蔫部分，保留可食部分，將樣品切成小塊后采用四分法縮分，一般不少于1 kg。四分法縮分時，要保證充分混勻，取縮分后的樣品放入勻漿機勻漿，制成待測樣，按每份不少于100 g 分裝入潔凈的容器，密封并標識，待測。處理完每份樣品后要對處理器具進行清洗，防止樣品間的互相干擾。

制備好的待測樣品應分為待檢樣和留樣，放置于-20～16℃的冰柜中保存，保存環境應安裝監控設備，防止樣品腐爛變質而影響檢測數據。

5 提取

用天平稱取25 g 樣品置于勻漿杯中，加入50 mL 乙腈，在勻漿機中高速勻漿2min 后用濾紙過濾到裝有5～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中。天平開機自檢完成并穩定后才能開始稱樣。在稱樣時，為了保證樣品的均勻一致性，要將容器內的樣品攪拌均勻后稱取，將樣品置于勻漿杯的底部，不沾上口，不得外灑。氯化鈉的量要合適，含水量大的試樣氯化鈉用量較大。勻漿機在使用前要用丙酮和蒸餾水依次清洗，勻漿時要保證勻漿的速率和時間，轉速以15 000 r/min 為宜，使樣品和乙腈充分混勻，注意控制刀頭探入液體的深度，既要做到充分勻漿，又不能使液體濺出。勻漿后要用自來水、丙酮、蒸餾水依次清洗刀頭，避免污染下一樣品。

待濾液收集40～50 mL 后，蓋上瓶塞，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分離。震蕩時要保證一批樣品的震蕩幅度和頻率的一致性，震蕩后具塞量筒底部要有少量氯化鈉存留，確保鹽析充分。靜置時間要充足，保證足夠的提取時間，使乙腈相和水相完全分離，確保提取完全，保證檢測數據的準確度。

在提取過程中，有些試樣因含脂肪、色素、糖、果膠等物質較多，常常發生乳化現象，有的甚至變成糊狀，影響檢測結果，往往造成檢測數值偏低。因此，要防止和處理好樣液乳化，若發生乳化，需加水或離心處理。

6 凈化

6.1 有機磷類農藥殘留檢測凈化過程

從具塞量筒中用移液管吸取10 mL 上層乙腈溶液，置于150 mL 燒杯中，將燒杯置于80℃水浴鍋中用氮氣吹至近干，加入2 mL 丙酮，蓋上鋁箔，備用。將備用液安全轉移至15 mL 刻度離心管中，再用約3 mL 的丙酮分3 次沖洗燒杯，并將液體全部轉移至離心管中，最后用丙酮定容至5 mL。渦旋混勻，轉移至兩個2 mL 進樣瓶中，待上機檢測。若定容后的樣品溶液過于混濁，要用0.2 μm 濾膜過濾后再進行測定。

6.2 有機氯及擬除蟲菊酯類農藥殘留檢測凈化過程

從具塞量筒中用移液管吸取10 mL 上層乙腈溶液，置于150 mL 燒杯中，將燒杯置于80℃水浴鍋中用氮氣吹至近干，加入2 mL 正己烷，蓋上鋁箔，待凈化。

按1∶9 的比例配制丙酮、正己烷混合液，將弗羅里矽柱依次用5 mL 混合液、5 mL 正己烷預淋洗，條件化。當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化液，用15 mL 刻度離心管接收洗脫液，再用5 mL 混合液沖洗燒杯后淋洗弗羅里矽柱，并重復淋洗一次。將盛有淋洗液的刻度離心管置于氮吹儀上，在50℃條件下，氮吹至少5 mL，用正己烷定容至5 mL。渦旋混勻，轉移至兩個2 mL 進樣瓶中，待上機檢測[3]。

6.3 提取過程需要注意的事項

用移液管移取上層乙腈溶液時，要先潤洗移液管2～3 次。氮吹時，氣針距離液面的高度在1.5 cm 左右為宜，要控制氮氣氣流的流量，切記氣流過大。同時控制氣針的高度和氣流的流量，保持液面微微抖動為宜，切記液體濺出，造成液體損耗。某些農藥組分若完全吹干會導致回收率偏高或過低，因此氮吹一定要做到近干即可，吹至燒杯內保留一定液體或底部濕潤為宜。氮吹完畢要立即加入丙酮或正己烷復溶，并蓋上鋁箔防止揮發。

6.4 凈化過程需注意的事項

在有機氯、擬除蟲菊酯類農藥殘留檢測實驗固相萃取時，要選用適宜的弗羅里矽柱，預淋洗液要棄去。預淋洗和淋洗時要控制柱內的液面，既要保證柱床不干，又要貼近柱床。添加淋洗液時要做到平穩，不外漏、不飛濺、不外溢，避免液體的損耗影響檢測結果。要控制淋洗速度，不能過快或過慢，影響萃取效率。淋洗到最后，當液面接近篩板時，用吸耳球擠壓，收集全部淋洗液，但不要過度。

7 上機檢測

7.1 有機磷類農藥殘留用FPD 檢測器進行測定

按照NY/T 761—2008 標準要求，色譜柱選用長度30 m，內徑0.25 mm 的Rtx-opp 柱，設定進樣口溫度220℃，檢測器溫度250℃，柱溫：初始溫度150℃，保持2 min[4]。升溫程序：以8℃/min升到250℃。載氣為純度≥99.999%的氮氣，流速10 mL/min；助燃器為純度≥99.999%的氫氣，流速70 mL/min；助燃器為空氣，流速100 mL/min。進樣方式為不分流進樣。自動進樣器分別吸取1 μL 的標準混合溶液和凈化后的待上機樣品溶液注入色譜儀中，以保留時間定性，以樣品溶液峰面積與標準溶液峰面積比較定量。

7.2 有機氯及擬除蟲菊酯類農藥殘留用ECD 檢測器進行檢測

按照NY/T 761—2008 標準要求，色譜柱選用長度30 m，內徑0.25 mm 的Rtx-CLP 柱，設定進樣口溫度200℃，檢測器溫度320℃，柱溫：初始溫度150℃，保持2 min。升溫程序：以6℃/min升到270℃。載氣為純度≥99.999%的氮氣，流速1 mL/min；輔助氣為純度≥99.999%的氮氣，流速60 mL/min。進樣方式為分流進樣，分流比為10∶1。自動進樣器分別吸取1.0 μL 的標準混合溶液和凈化后的待上機樣品溶液注入色譜儀中，以保留時間定性，以樣品溶液峰面積與標準溶液峰面積比較定量。

7.3 儀器性能對檢測結果的影響

在上機檢測過程中，儀器性能對檢測結果有極大地影響，首先氣相色譜儀的襯管對定量結果有直接影響，要及時清潔更換；其次新換或長期不用的色譜柱在使用前應進行充分的老化，要按照程序升溫過程對儀器進行升溫，待儀器穩定后再進行樣品的測定，儀器的穩定性可通過測定標準溶液來考察。

8 結果計算

按照NY/T 761—2008 標準采用外標法定量時，采用單點定量要使用與樣品中所含農藥殘留相近濃度的標準溶液進行定量，數據才會準確。在對樣品濃度的峰面積進行計算時，要合理選取積分基線，充分利用軟件的數據比較功能。部分有機磷類農藥如氧樂果等基質效應較大，選用基質標溶液進行定量可以有效去除基質效應，極大提高檢測數據的準確度。