金錢草、聚花過路黃對(duì)大鼠腎結(jié)石防治的藥效比較研究

李飛艷 羅曉云 劉群群 劉園園 尹升

【摘 要】 目的：比較金錢草、聚花過路黃對(duì)大鼠腎結(jié)石形成的影響。方法：參照《中國藥典》金錢草片的制備方法制備金錢草、聚花過路黃煎液。連續(xù)4周以乙二醇聯(lián)合氯化銨灌胃，制備腎結(jié)石模型大鼠，藥物組大鼠以4.0 g/kg的劑量灌胃上述兩種藥物，術(shù)前禁食24 h，酶標(biāo)法檢測血清、腎組織中的鈣離子濃度，變色酸比色法測血清、腎組織中的草酸濃度，做腎病理切片，觀察草酸鈣結(jié)晶的形成情況等。結(jié)果：與空白組比較，模型組、兩個(gè)藥物組大鼠腎組織中鈣離子、草酸濃度顯著增高（P<0.01），血清中草酸濃度顯著降低（P<0.01），模型組、金錢草組大鼠血清中鈣離子濃度顯著降低（P<0.01，P<0.05），聚花過路黃組大鼠血清中鈣離子無顯著性差異；與模型組比較，兩個(gè)藥物組大鼠腎組織中鈣離子、草酸濃度顯著降低（P<0.01），聚花過路黃組大鼠血清中鈣離子、草酸濃度升高顯著（P<0.05）；與金錢草組比較，聚花過路黃組腎組織與血清中鈣離子、草酸濃度均無顯著差異。與空白組相比，模型組、兩個(gè)藥物組腎組織切片均可見明顯草酸鈣結(jié)晶簇集或散在；與模型組比較，兩個(gè)藥物組腎組織中草酸鈣結(jié)晶分布較少。結(jié)論：金錢草、聚花過路黃對(duì)乙二醇聯(lián)合氯化銨制備的腎草酸鈣結(jié)石模型大鼠有相似的防治效果。

【關(guān)鍵詞】 金錢草；聚花過路黃；腎結(jié)石；大鼠；草酸鈣

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2023）15-0033-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.13.zgmzmjyyzz202315008

Abstract：Objective To study the effects of Lysimachia christinae and Lysimachia congestiflora on rat kidney stone formation. Methods The liquid medicine of Lysimachia christinae and Lysimachia congestiflora was prepared according to the Jinqiancaotablets in Chinese Pharmacopoeia. To establish kidney stone model， SD rats were given ethylene glycol and ammonium chloride for 4 weeks. The rats in the two administration groups were given the above liquid medicine （4.0 g/kg） by gavage every day， fasting for 24h before the surgery. Enzyme labeling method was used to detect the concentration of calcium ions in serum and kidney tissues， Chromotropic acid colorimetry was used todetect the concentration ofoxalic acidin in serum and kidney tissues. HE staining was performed to observe pathological changes and calcium oxalate deposition. Results Compared with normal group， calcium ion and oxalic acid concentration in renal tissue of rats in the model group andtwo medication groups were significantly increased （P<0.01）， the concentration of oxalic acid in serum decreased significantly （P<0.01），the concentration of calcium ionin serumof rats in the model group and Jinqiancao groupwere significantlydecreased（P<0.01，P<0.05），there was no significant difference in Juhuaguoluhuang group. Compared with model group， calcium ion and oxalic acid concentration in renal tissue of rats in thetwo medication groups were significantly decreased （P<0.01），calcium ion and oxalic acid concentration inserum of Juhuaguoluhuang group was significantly increased（P<0.05）;Compared with Jinqiancao group， there were no significant differences in the concentration of calcium and oxalic acid in renal tissue and serumofJuhuaguoluhuang group.Compared with normal group， kidney tissues in model group and twomedication groups showed obvious clusters or scattered calcium oxalate crystals， while compared with the model group， the kidney tissue crystals of rats in the medication groups were significantly reduced. Conclusion Lysimachia christinae and Lysimachia congestiflora have similar preventive and therapeutic effects on renal calcium oxalate stone model rats prepared by ethylene glycol combined with ammonium chloride.

Keywords：Lysimachia Christinae；Lysimachia Congestiflora；Kidney Stone；Rat；Calcium Oxalate

金錢草為2020年版《中國藥典》收載的中藥品種［1］，為報(bào)春花科植物過路黃Lysimachia christinae Hance的干燥全草，金錢草為排石要藥，具有利濕退黃、利尿通淋、解毒消腫的功效，廣泛用于濕熱黃疸、肝膽結(jié)石和泌尿道結(jié)石等的治療［2-4］，主治熱淋、沙淋、尿澀作痛、黃疸尿赤、肝膽及尿路結(jié)石［5］，尿結(jié)石屬于中醫(yī)淋癥中的石淋，中醫(yī)認(rèn)為石淋為下焦?jié)駸崽N(yùn)結(jié)、氣滯血瘀、或濕熱久留耗傷腎陰或腎陽所致［6］。文獻(xiàn)［7］報(bào)道大劑量單用金錢草煎湯代茶飲可治療石淋。聚花過路黃為《中藥大辭典》收載的品種［8］，藥名“風(fēng)寒草”，在2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中也以“風(fēng)寒草”收載［9］，為報(bào)春花科植物聚花過路黃Lysimachia congestiflora Hemsl.的干燥全草，有祛風(fēng)散寒、化痰止咳、解毒利濕、消積排石的功效，用于治療風(fēng)寒頭痛、咳嗽、痰多、尿路結(jié)石等，關(guān)于其藥效及臨床應(yīng)用的文獻(xiàn)報(bào)道極少，僅限于聚花過路黃對(duì)動(dòng)物腦缺血、體外抗炎、對(duì)動(dòng)物膽汁、尿液排出、胃蛋白酶等消化功能的影響方面［10-13］。

因金錢草與聚花過路黃的原植物來源于同科同屬，形態(tài)相似，常易被誤認(rèn)誤采、誤售誤用，導(dǎo)致在臨床應(yīng)用中出現(xiàn)了聚花過路黃誤做金錢草使用的現(xiàn)象，金錢草作為排石要藥在臨床大量使用，該現(xiàn)象已經(jīng)引起了行業(yè)相關(guān)專家的高度重視，并對(duì)在臨床上聚花過路黃誤用為金錢草的原因、及兩者的鑒定方法與區(qū)別特征進(jìn)行了報(bào)道［14-17］，在此現(xiàn)象未引起全行業(yè)足夠重視及制定更好的防范措施之前，比較研究兩藥在結(jié)石防治效果方面的影響很有必要。關(guān)于誤用后對(duì)結(jié)石的防治效果會(huì)產(chǎn)生何影響，尚未見相關(guān)報(bào)道，現(xiàn)將團(tuán)隊(duì)成員對(duì)兩者在腎結(jié)石防治的藥效對(duì)比研究結(jié)果報(bào)道如下，以期為聚花過路黃在臨床正確用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受試藥物 金錢草（產(chǎn)地：四川；批號(hào)：1711012，由江西樟樹天齊堂中藥飲片有限公司提供），按照2020年版《中國藥典》鑒定為正品；聚花過路黃，購于湖南邵東廉橋中藥材市場，經(jīng)鑒定符合2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定。

金錢草煎液，參照2020年版《中國藥典》收載的金錢草片中金錢草煎液的制作方法，金錢草置于不銹鋼鍋中，加純凈水浸泡60 min，煎煮3次，第一、二、三煎加水量分別為藥量的7倍、3倍、3倍，每次煎煮60 min，趁熱以紗布過濾，合并3次濾液，減壓濃縮至0.5 g/mL的藥液備用，臨用前加純凈水稀釋成所需濃度。聚花過路黃煎液的制備同金錢草煎液。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠，40只，雄性，體質(zhì)量（200±20）g，購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，質(zhì)量合格證號(hào)43004700042552，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，使用證號(hào)00087067。

1.3 腎結(jié)石模型大鼠制備 模型組及兩個(gè)藥物組動(dòng)物參照文獻(xiàn)方法［18-21］制備腎草酸鈣結(jié)石模型大鼠，以1%的乙二醇液替代飲用水，自由飲用，并每日每只動(dòng)物灌胃2%的氯化銨溶液2 mL，連續(xù)4周。

1.4 分組及給藥 動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組，即空白組、模型組、金錢草組（簡稱“JQC組”）、聚花過路黃組（簡稱“JHGLH組”），每組10只。空白組動(dòng)物以1 mL/100 g（體質(zhì)量）純凈水灌胃，自由飲水；兩個(gè)藥物組在灌胃2%氯化銨的同時(shí)以相應(yīng)的藥物按1 mL/100g（體質(zhì)量）給藥，大鼠用藥劑量以生藥計(jì)為4.0 g/kg（體質(zhì)量），1日1次；模型組以2%氯化銨灌胃。各組以正常基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)4周。

1.5 檢測指標(biāo)及方法 末次用藥后，自由飲水，禁食24 h，腹腔注射25%的烏拉坦0.5 mL/100 g（體質(zhì)量）實(shí)施麻醉，剖腹，分離腹主動(dòng)脈，真空管采血，血液于室溫靜置2 h后，3500 r·min-1離心10 min，取上層血清，測血清中鈣與草酸濃度；取雙腎，右腎稱重后加入1 moL/L的HCL，用高速分散器于冰浴中制備勻漿液，勻漿液于3000 r·min-1離心20 min，取上清液，測腎組織中鈣離子與草酸濃度；左腎置于多聚甲醛中固定，做常規(guī)石蠟包埋切片、HE染色，顯微鏡觀察腎組織中草酸鈣結(jié)晶的形狀、大小、數(shù)量等情況。

血清與腎組織中鈣含量的測定采用酶標(biāo)法，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作；草酸濃度的測定依據(jù)文獻(xiàn)方法，采用變色酸比色法［22-24］，紫外可見分光光度計(jì)于570 nm波長處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算草酸濃度，計(jì)算公式：樣品草酸濃度（mg/L）=標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的 μg數(shù)×1000/（0.5×0.99×1000）。

1.6 檢測試劑 鈣測試盒，批號(hào)20180320，由南京建成生物工程研究所提供。氯化銨，分析純，批號(hào)20171031，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司提供；乙二醇，分析純，批號(hào)20171130，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司提供；變色酸（C10H8O8S2），分析純，上海邁坤化工公司提供；溴麝香草酚藍(lán)（溴百里酚藍(lán)），分析純，批號(hào)20180109，上海邁坤化工公司提供；無水硫酸鈣，批號(hào)20170601，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司提供。

1.7 儀器 Thermo Fisher Scientific酶標(biāo)儀，規(guī)格型號(hào)1510-05118，賽默飛世爾科技有限公司提供；SP-1901UV型紫外可見分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司提供；S10手提式高速分散器，寧波新芝生物科技公司提供。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS26統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均值加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組之間進(jìn)行獨(dú)立t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腎組織與血清中草酸、鈣離子的濃度 與空白組比較，模型組、兩個(gè)用藥組大鼠腎組織中鈣離子濃度顯著增高（P<0.01），模型組、金錢草組（JQC組）大鼠血清中鈣離子濃度顯著降低（P<0.01，P<0.05），聚花過路黃組（JHGLH組）大鼠血清中鈣離子無顯著性差異；與模型組比較，兩個(gè)用藥組大鼠腎組織中鈣離子濃度顯著降低（P<0.01），JHGLH組血鈣離子濃度顯著增高（P<0.05），JQC組血鈣離子濃度無顯著性差異；與JQC組比較，JHGLH組大鼠腎組織與血清中鈣離子濃度均無顯著差異。結(jié)果詳見表1。

與空白組相比，模型組、兩個(gè)藥物組大鼠腎組織中的草酸濃度顯著升高（P<0.01），血清中草酸濃度顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，兩個(gè)用藥組大鼠腎組織中的草酸濃度顯著降低（P<0.01），血清中草酸濃度有增高趨勢，其中JHGLH組升高顯著（P<0.05）；與JQC組比較，JHGLH組大鼠血清、腎組織中的草酸濃度均無明顯差異。結(jié)果詳見表1。

2.2 腎組織切片 空白組動(dòng)物腎組織中未發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，腎小球、腎小管清晰可見（如圖1所示），模型組及兩個(gè)用藥組腎組織內(nèi)均可見明顯結(jié)晶，結(jié)石率為100%；模型組動(dòng)物腎小管擴(kuò)張，形狀不規(guī)則，管內(nèi)充斥多種形狀的結(jié)晶，以聚集成簇晶狀者多見（黑色箭頭所示）。如圖2所示；JQC組腎小管擴(kuò)張，管內(nèi)草酸鈣結(jié)晶以砂晶、柱晶多見（黑色箭頭所示），結(jié)晶分布比模型組少。如圖3所示；JHGLH組腎小管擴(kuò)張明顯，管內(nèi)結(jié)晶簇集狀者居多（黑色箭頭所示），結(jié)晶分布比模型組少。如圖4所示。

3 討論

乙二醇法是制備腎草酸鈣結(jié)石模型大鼠的常用方法［18-21］，乙二醇作為草酸的前體物質(zhì)，進(jìn)入體內(nèi)后，在羥乙酸氧化酶、乳酸脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)化為草酸，經(jīng)吸收入血液循環(huán)，使血中草酸濃度增加，同時(shí)加服氯化銨，造成對(duì)腎小管的損傷，可提高血鈣水平，增加草酸鈣結(jié)石的形成，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組大鼠腎組織中草酸和鈣的含量明顯升高，腎組織切片均可見有大量草酸鈣結(jié)晶形成，成石率為100%，造模成功進(jìn)一步驗(yàn)證了乙二醇制備腎草酸鈣結(jié)石模型的可行性。模型組、兩個(gè)用藥組大鼠血清中的鈣離子、草酸濃度并未因?yàn)椴菟徂D(zhuǎn)化增加以及氯化銨對(duì)腎小管的損傷而明顯增加，反而明顯降低，推斷可能為大量草酸鈣結(jié)晶在腎組織的形成消耗了游離的草酸與鈣離子的緣故。

與模型組動(dòng)物比較，金錢草組動(dòng)物血清中鈣離子、草酸有不同程度增加，腎組織中草酸鈣結(jié)晶分布較少，與臨床使用金錢草防治腎結(jié)石的效果相吻合，聚花過路黃組與金錢草組相比，無論是腎組織、血清中的草酸與鈣離子濃度還是腎組織切片中草酸鈣結(jié)晶的分布范圍都無明顯差異，因而認(rèn)為聚花過路黃防治腎結(jié)石與金錢草有相似效果。

現(xiàn)代研究［25］認(rèn)為金錢草治療腎結(jié)石的機(jī)制主要有增加尿流量、減少腎中草酸鈣結(jié)晶的堆積、抑制草酸鈣形成等，王亞婷等［26］通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究金錢草治療腎結(jié)石的分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)金錢草抗腎結(jié)石的機(jī)制涉及NF-κB結(jié)合、熱休克蛋白結(jié)合、核受體活性、轉(zhuǎn)錄因子活性，直接的配體調(diào)節(jié)序列特異性DNA結(jié)合、類固醇結(jié)合、組蛋白激酶活性等。本研究表明聚花過路黃能通過抑制草酸與鈣離子結(jié)合，而達(dá)到防治腎結(jié)石的作用，結(jié)合文獻(xiàn)［12］報(bào)道聚花過路黃能增加尿流量，表明聚花過路黃與金錢草一樣具有增加尿流量、抑制草酸鈣結(jié)晶形成的機(jī)制，是否還具有腎保護(hù)等其他機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2022-11-14 編輯：陶希睿）

基金項(xiàng)目：湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（編號(hào)201741）。

作者簡介：李飛艷（1972—），女，漢族，碩士研究生，副教授，研究方向?yàn)橹兴幩幚怼⒅兴幷鎮(zhèn)舞b定。E-mail：719656319@qq.com