依托泊苷輸液在不同儲存條件下的穩定性考察*

鈔艷惠,聶會娟,張瑞,荊自偉,康健,劉勝利,孫丙軍,杜書章

(1.鄭州大學第一附屬醫院藥學部,鄭州 450052;2.沈陽藥科大學藥學院,沈陽 110016)

依托泊苷注射液說明書要求,本品最終稀釋濃度不應超過0.25 mgmL-1,且稀釋以后應立即使用,靜脈滴注時間不少于30 min,而對成品輸液的儲存條件及穩定存放的時間并未明確提及。我院靜脈藥物配置中心對高危藥品實行集中調配、集中配送制度。從藥品調配結束到送至相應病區,約需要2 h。成品輸液送至病區后,受病情變化等各種因素的影響,患者有時并不能立即使用。1991年由Wilson首創的EPOCH方案(依托泊苷、長春新堿和多柔比星,96 h持續靜脈輸注)[1],是美國國家綜合癌癥網絡(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)《非霍奇金淋巴瘤臨床實踐指南》和我國國家衛生健康委員會《彌漫大B細胞淋巴瘤診斷與治療指南》推薦的具有適應證患者的一線治療方案。我院血液科已經將EPOCH方案用于治療具有適應證的患者。3種抗腫瘤藥,分別使用3個通路,同時持續泵入24 h,連用4 d,而24 h內依托泊苷輸液的穩定性變化如何尚未可知。不同廠家制備工藝不同,可能導致藥品稀釋后穩定性的差異。目前,筆者尚未見關于依托泊苷注射液[齊魯制藥(海南)有限公司)]高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)法含量測定和稀釋后穩定性的文獻報道。本研究設置成品輸液濃度為0.04、0.1、0.2、0.25、0.4 mgmL-1,設置儲存條件為室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏,在各時間點觀察輸液外觀變化,并使用pH計、高效液相色譜儀測定pH值和含量,以考察依托泊苷成品輸液在不同儲存條件下的穩定性,為臨床合理用藥提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀,Waters ACQUITY Xevo UPLC-MS/MS(美國 Waters 公司);Adventurer 電子分析天平(美國奧豪斯公司,感量:0.01 mg);LDZ5-2 型低速自動平衡離心機(北京醫用離心機廠);PHS-2C型精密酸度計(上海雷磁儀器廠);色譜柱:Silversil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)。

1.2試藥 依托泊苷注射液[齊魯制藥(海南)有限公司,規格:5 mL：0.1 g,批號:BB1K1015)];依托泊苷對照品(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,批號:E121713,含量:98%);0.9%氯化鈉注射液(上海百特醫療用品有限公司,批號:S2207135);乙腈(天津市康科德科技有限公司,批號:220214,含量≥99.9%);去離子水(杭州娃哈哈集團有限公司)。

2 方法與結果

2.1依托泊苷含量測定方法的建立

2.1.1色譜條件 流動相:乙腈-水(40：60);流速:1.0 mLmin-1;檢測波長:230 nm;液相柱:C18反相硅膠色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),柱溫:40 ℃,進樣量:50 μL。

2.1.2空白對照溶液的配制 于10 mL量瓶中加入無水乙醇200 μL超聲,500 μL聚山梨酯-80渦旋超聲,甲醇定容至刻度,搖勻,濾過;精密量取續濾液1 mL,置于50 mL量瓶中,0.9% 氯化鈉注射液定容至刻度,搖勻,經孔徑0.22 μm微孔濾膜濾過,取續濾液作為空白對照溶液。

2.1.3依托泊苷對照品溶液的配制 精密稱取依托泊苷對照品10.0 mg于10 mL量瓶中,按照“2.1.2節”下步驟操作,得依托泊苷對照品液。

2.1.4依托泊苷供試品溶液的配制 精密量取依托泊苷注射液0.5 mL于10 mL量瓶中,按照“2.1.2節”下步驟操作,得依托泊苷供試品溶液。

2.1.5專屬性的考察 按照“2.1.1節”下色譜條件,分別進樣空白對照溶液、依托泊苷對照品溶液,記錄色譜圖。結果如圖1所示,依托泊苷峰型良好,空白對照溶液對依托泊苷的含量測定無影響。

1.依托泊苷。

2.1.6線性與范圍 制備2、5、10、20、50、100、200 μgmL-1的依托泊苷對照品溶液,進樣50 μL,記錄峰面積。以峰面積(A)對濃度(C,μgmL-1)進行線性回歸(圖2),得線性回歸方程為A=68 164C+72 315,R2=0.999 9。表明依托泊苷濃度在2～200 μgmL-1范圍內線性良好。

圖2 依托泊苷標準曲線

2.1.7儀器精密度實驗 依托泊苷對照品溶液連續進樣50 μL,6次,記錄峰面積。計算得RSD=1.19%,表明依托泊苷HPLC含量測定方法的精密度良好。

2.1.8方法準確度實驗 平行制備6份依托泊苷對照品溶液,分別進樣50 μL,記錄峰面積。計算得濃度RSD=0.67%,表明依托泊苷HPLC含量測定方法的準確度良好。

2.1.9回收率考察 平行制備含有依托泊苷對照品溶液80%、100%和120%樣品9份,低、中、高濃度各3份,分別進樣50 μL,計算回收率。結果見表1,低、中、高濃度的平均回收率在98%～102%,RSD≤2%,符合要求。

表1 依托泊苷含量測定方法的回收率

2.2依托泊苷輸液穩定性的考察

2.2.1不同濃度依托泊苷輸液的配制 分別取依托泊苷注射液1.0、2.5、5.0、6.25、10.0 mL加入0.9%氯化鈉注射液輸液袋中,配制成終濃度分別為0.04、0.1、0.2、0.25、0.4 mgmL-1的依托泊苷成品輸液,并排出多余空氣,輕柔搖勻,避免產生氣泡。配制好的依托泊苷輸液分別于室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏條件下,在0、1、2、4、6、8、10、12、24 h時,肉眼觀察輸液外觀澄清度及顏色是否有變化,并拍照記錄;pH計測定pH值;使用建立的HPLC法測定含量。

2.2.2外觀 當濃度≤0.25 mgmL-1時,依托泊苷輸液在3種儲存條件下,24 h內外觀均澄清透明,且無顏色、氣體、沉淀、渾濁產生;當濃度為0.4 mgmL-1時,依托泊苷輸液在3種儲存條件下,均出現不同程度的渾濁和沉淀。室溫遮光條件下12 h時開始出現渾濁;室溫不遮光條件下,6 h時開始出現渾濁;2～8 ℃冷藏條件下,4 h時開始出現渾濁;離心后觀察會更明顯。

2.2.3pH值 不同濃度的依托泊苷輸液分別于室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏條件下放置,在各時間點時,使用pH計測定pH值。結果見表2—4,各濃度依托泊苷輸液在3種儲存條件下24 h內pH值穩定。

表2 不同濃度依托泊苷輸液在室溫遮光條件下的pH值

表3 不同濃度依托泊苷輸液在室溫不遮光條件下的pH值

表4 不同濃度依托泊苷輸液在2～8 ℃冷藏條件下的pH值

2.2.4含量 不同濃度的依托泊苷輸液分別于室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏條件下放置,在各時間點時,取樣,10 000 r·min-1離心10 min后,用孔徑0.22 μm的微孔濾膜過濾,取續濾液按照“2.1.1節”下色譜條件進樣,記錄峰面積。以0時刻時的含量為100%,計算不同時刻各濃度依托泊苷輸液的含量變化,結果見表5—7,當濃度≤0.25 mgmL-1時,依托泊苷輸液在3種儲存條件下24 h內含量幾乎無變化,均在95%～105%。當濃度為0.4 mgmL-1時,依托泊苷輸液在室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃條件下,24 h時含量分別下降至67.07%、61.00%和38.29%。

表5 不同濃度依托泊苷輸液在室溫遮光條件含量變化

表6 不同濃度依托泊苷輸液在室溫不遮光條件下含量變化

表7 不同濃度依托泊苷輸液在2～8 ℃冷藏條件下含量的變化

3 討論

3.1方法學 本研究建立了依托泊苷注射液的含量測定方法。研究過程中的藥物濃度經稀釋均可在HPLC法的線性范圍濃度內,色譜條件的選擇主要是根據《中華人民共和國藥典》2020版以及閱讀文獻并經后期優化而來,即流動相:乙腈-水(40：60);流速:1.0 mL·min-1;檢測波長:230 nm;液相柱:C18反相硅膠色譜柱(4.6 mm×250 mm),柱溫:40 ℃,進樣量:50 μL。在該條件下,依托泊苷可與溶劑峰分離,峰型良好,保留時間為5.1 min,HPLC含量測定方法的專屬性、準確度、精密度、加樣回收率均符合要求,在2～200 μgmL-1范圍內線性良好。

3.2配伍穩定性 依托泊苷注射液說明書規定成品輸液濃度不得超過0.25 mgmL-1,而原研說明書中規定的配伍濃度為0.2～0.4 mgmL-1,若超過0.4 mgmL-1將會產生析出物沉淀。結合臨床常用濃度,本研究設置了0.04、0.1、0.2、0.25和0.4 mgmL-1共5個濃度。考慮到臨床使用輸液時通常在室溫條件下進行,且經常詢問輸液是否需要遮光,本研究設置了室溫遮光和室溫不遮光儲存條件。一般情況下,溫度越低,藥物降解速度越慢,成品輸液穩定性越好。為了研究溫度對依托泊苷輸液穩定性的影響,本研究設置了2～8 ℃冷藏的儲存條件。

有研究[2-6]考察了依托泊苷與其他藥物配伍在同一輸液袋中的穩定性,結果表明,依托泊苷濃度不超過0.25 mg·mL-1的混合輸液室溫下24 h內含量穩定。但是使用的均是江蘇恒瑞醫藥股份有限公司提供的依托泊苷注射液。KLASEN等[7]的研究使用的是以色列梯瓦制藥工業有限公司提供的依托泊苷注射液,結果表明,當稀釋溶劑為0.9%氯化鈉注射液,室溫下0.1和0.4 mg·mL-1的依托泊苷輸液24 h內含量穩定,0.6 mg·mL-1的依托泊苷輸液8 h內含量穩定。本研究使用的是依托泊苷注射液[齊魯制藥(海南有限公司)],結果表明,室溫下0.4 mg·mL-1的依托泊苷輸液24 h時含量降至約60%。出現這種結果可能是因為不同廠家的制劑,在制備過程中,添加的輔料、采用工藝不同。本研究的局限在于僅考察了依托泊苷輸液的化學穩定性,配制的輸液24 h內的微生物穩定性如何還有待考察。

3.3研究價值 當依托泊苷輸液的配伍濃度不超過0.25 mgmL-1時,室溫遮光、室溫不遮光和2～8 ℃冷藏條件下,24 h內外觀、pH值和含量均穩定,可以不局限于說明書規定的“稀釋后立即使用”。雖然靜脈用藥調配中心調配的輸液屬于微生物污染低風險,但是有文獻報道[8-9],配制好的輸液瓶口無論是否經過處理,暴露于病區治療室環境后,均會有不同程度的細菌污染,因此,建議不能立即使用的患者可以將配制好的輸液暫時存放在靜脈藥物配置中心的潔凈環境中,從而減少輸液污染的風險。對于使用EPOCH方案化療的患者,建議每天更換一次輸液,以保證輸液的質量。當依托泊苷輸液的配伍濃度超過0.25 mgmL-1時,依托泊苷的穩定性不太好,容易析出沉淀,因此非必要不建議依托泊苷的配伍濃度超過0.25 mgmL-1。若使用時濃度必須超過0.25 mgmL-1,如某些需要限液的患者,也應注意最大配伍濃度不要超過0.4 mgmL-1,且輸液配制后應盡快使用。