熊果酸藥物的研究進展★

侯夢珠，李春玉，趙冬梅，王麗敏，趙塔娜

（1.佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007；2.佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154007）

纖維化是各種實質臟器疾病的終末狀態。纖維化為臟器實質細胞的減少和細胞外基質不斷增加的過程，臟器功能不斷下降。纖維化的發生大大降低了人們的生活質量，近年來隨著對纖維化發生機制不斷進行深入研究，很多研究者發現中藥提取物在防治纖維化的過程中起到重要作用。隨著熊果酸合成提取技術的不斷進步，目前越來越多有關熊果酸的功效被發現，有許多研究顯示熊果酸具有抗纖維化的活性成分，能明顯減緩纖維化的發展進程，改善臟器功能。

1 熊果酸的概述和作用機制

熊果酸（ursolic acid，UA），又名羅蘇酸，是一種天然三萜羧酸化合物，它的分子式為C30H48O3，結構式見圖1。熊果酸在植物界中分布廣泛，如車前、山茱萸、山楂、白花蛇舌草、夏枯草中都含有熊果酸，它一般以游離形式或與糖結合成苷的形式分布植物中。熊果酸的生物學效應很多，如可以降低血糖、消炎、鎮靜、抗纖維化及抗潰瘍等。目前越來越多有關熊果酸抗纖維化的研究，其大多都是熊果酸通過作用于不同的信號轉導通路，阻止信號通路將信號傳送至靶細胞，并減少炎性細胞浸潤和纖維組織增生，達到抗纖維化的作用。

圖1 熊果酸結構

2 熊果酸的功效

熊果酸具有抗炎、抗氧化的作用，熊果酸可以通過抑制腎臟的氧化應激機制來延緩腎臟纖維化的發生。核因子E2-相關因子2（Nrf2），又稱GA 結合蛋白轉錄因子，Nrf2 在人體細胞的抗氧化應激反應和炎癥中起重要作用，具有基本亮氨酸結構。Kelch 樣ECH相關蛋白1（Keap1）是Nrf2 的負調控因子，研究中可以通過降低Keap1 表達，激活Nrf2 信號[1]。Nrf2 核轉錄因子參與谷胱甘肽和硫氧還蛋白抗氧化系統成分的轉錄，通過激活下游的保護性蛋白如HO-1、NQO1、谷胱甘肽S 轉移酶等在抗氧化的過程中起著至關重要的作用[2]。Jun Pei 等實驗表明，熊果酸可以通過降低Keap1 的表達，增加Nrf2 和HO-1 的表達，進而激活Nrf2/HO-1 信號通路，對單側輸尿管梗阻大鼠的腎臟起到保護作用，延緩了腎臟纖維化的進展過程。酶和磷酸酶是熊果酸的主要作用靶點，如在肝臟中熊果酸能夠影響蛋白酶的表達水平，靶向肝臟細胞，平衡機體的氧化及抗氧化，減輕肝臟的損傷。肝纖維化的主要原因是肝星狀細胞（hepatic stellate cell，HSC）的激活和轉化，在肝纖維化的發展過程中還存在很多重要的促纖維化因子，如血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）就參與了肝星狀細胞的激活和轉化，在肝纖維化的發生中起重要作用。NADPH 氧化酶（NADPHoxidase，NOX）可以介導AngⅡ、TGF-β、瘦素等多種促纖維化因子在肝星狀細胞內的信號轉導，可以作為抗肝纖維化的重要靶點。AngⅡ可以通過激活肝星狀細胞上NADPH 氧化酶產生大量活性氧，增加了AP-1 的DNA 結合活性，能以氧化還原方式調節Akt 和MAPK 磷酸化，并促進Ⅰ型膠原、TGF-β1和其他炎癥細胞因子的表達。陳濤等[3]研究表明熊果酸可以通過抑制NADPH 氧化酶的活性，進而抑制因為瘦素和AngⅡ這兩種促肝纖維化因子引起的肝星狀細胞的增殖和合成，阻斷纖維化有關的信號通路，最終減緩纖維化的進展。

3 熊果酸的合成提取進展

熊果酸一般是從杜鵑花科常綠蔓生灌木熊果中提取的五環三萜類化合物，因為它較高的實用價值，現如今越來越受到科學界的關注，其提取方法也逐漸被人們所重視。索氏提取、破碎提取、回流提取是熊果酸傳統的提取方法，隨著科學技術的進步，出現了許多新型的提取方法，如超聲波提取、超臨界流體萃取、溶劑提取等[4]。索氏提取法有著不容忽視的缺點，它的雜質不宜去除，且耗費時間長，現如今有一種全新的提取方法為半仿生提取法，半仿生提取法模擬了人體服用藥物后，經人體腸道消化吸收的情景，在整體與分子學兩種藥物研究方法的基礎上，還結合了生物藥劑學的理論，這個方法可以精準的分離物質[5]。王冬梅等[6]采用超聲波輔助提取法對山黃皮果進行提取，先稱取定量干燥后的山黃皮果渣粉，然后按照一定料液比加入乙醇溶液，最后用超聲波細胞破碎提取一定時間，結果顯示溶劑用量的過高或過低都會導致熊果酸的提取量下降，只要在一定范圍內，熊果酸的提取量會隨著溶劑量的升高而升高，當料液比為1∶25（g∶mL）時，熊果酸的提取量達到了最高，為4.67 mg/g；而乙醇濃度應控制在與熊果酸極性相似時，提取量最高，可達到5.02 mg/g；超聲時間和功率對熊果酸的提取量也有影響，當超聲時間過長時，熊果酸會發生分解，這是因為超聲波的熱效應和機械效應雙重作用，而超聲功率在增加到一定值后，熊果酸的提取量變化就不再明顯，在超聲時間為50 min，超聲功率為250 W 時，熊果酸的提取量最高分別為4.75mg/g和5.06 mg/g。范保瑞等[7]使用半仿生法對夏枯草中的熊果酸進行提取，分別以水和乙醇為提取溶劑，研究發現以乙醇作為提取溶劑時得到的熊果酸含量較高，這可能與熊果酸相對分子質量較大，極性小的性質有關，它可溶于極性較低的溶劑如甲醇、乙醇，不溶于水，微溶于苯和乙醚。隨著對熊果酸的廣泛研究，熊果酸衍生物也進入大家的視野。研究表明，在C-3 和/或C-28 位點，經羥基乙酰化、官能團、或酰胺/酯修飾的UA 衍生物生物活性良好[8]。曾有報道研究證明，N-芐基吲哚類化合物有很強的抗腫瘤活性，其通過抑制RNA 聚合酶Ⅱ的磷酸化而具有很強的抗腫瘤活性。田寧等[9]以熊果酸為先導物通過把N-芐基吲哚片段引入熊果酸的C-2 位，研究不同目標化合物的體外抗肝癌活性，選擇出高效低毒的抗肝癌化合物，研究證明化合物4c 的活性最為理想，將之與RNA 聚合酶Ⅱ蛋白進行分子對接，為后續的抗癌及活性研究提供幫助。Pereira 等采用DIC/DMAP 法合成了16 種酯類化合物，并用紅外和核磁共振光譜進行表征，將所有熊果酸酯對細菌蠟樣芽孢桿菌、白色假絲酵母菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌進行評價，實驗結果表明，3 β-（3，4-二甲氧基苯甲酰基）熊果酸和3β-煙酰熊果酸對白色念珠菌的生長抑制率分別為93.1%和95.9%，具有良好的抗真菌活性。Popov 等[10]合成了以酰肼和1，3，4-噁二唑-2-硫酮為末端取代基的熊果酸通過乙烯連接的新型雜化衍生物，研究表明，含有酰肼和1，3，4-噁二唑基團的熊果酸，具有較高的抗氧化活性。各種研究表明隨著社會對熊果酸的關注，熊果酸的實用價值被發現，其合成提取技術正在快速的進步中。

4 結語

熊果酸在自然界中廣泛分布，其藥理活性一直是研究的重點，其抗纖維化方面的實驗也越來越多。提高提取效率和生物利用率也一直被研究人員關注，隨著對熊果酸藥理作用和纖維化發病機制的不斷探索，研究經驗的持續積累，藥物的提取和臨床應用相信會更加成熟。