靜脈血真空采血管預稀釋法在校正EDTA依賴性假性血小板減少癥血小板計數中的應用研究

袁磊　黃平香　王煒艷　潘錢　嚴桃群

【摘要】? 目的? ? 探討靜脈血真空采血管預稀釋法在校正乙二胺四乙酸（EDTA）依賴性假性血小板減少癥（EDTA-PTCP）的血小板（PLT）計數中的應用效果。方法? ? 選擇2021年7月—2022年5月分宜縣中醫院檢驗科根據實驗室復檢標準篩選出確診的假性血小板減少癥患者（PTCP）30例作為研究對象，采集入組患者血氧標本，并分別采用EDTA法、靜脈血真空采血管預稀釋法在不同時間段測定PLT計數，對獲得的數據進行分析。結果? ? EDTA法檢測PLT水平隨著時間的延長呈下降趨勢（P<0.05），而靜脈血真空采血管預稀釋法隨著時間的延長PLT測定值變化不明顯（P>0.05），靜脈血真空采血管預稀釋法檢測1 h、2 h及3 h的PLT水平均高于EDTA法（P<0.05）。兩種校正方法PLT差值不同時間點存在明顯差異，且隨著時間延長呈上升趨勢（P<0.05）。通過外周血涂片鏡檢，所有靜脈血真空采血管預稀釋法測定的全血標本隨著時間推移均發生血小板聚集，但聚集程度隨著時間的延長變化不明顯。結論? ? 與EDTA法檢測結果相比，靜脈血真空采血管預稀釋法獲得的PLT計數結果在3 h內穩定性相對較高，可用于EDTA-PTCP血小板計數測定中的校正，具有簡便、準確度高等優點，該檢查方法對檢驗員專業技能要求較低，可在基層醫院推廣。

【關鍵詞】? 乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少癥； 血小板計數； 真空采血管預稀釋法； 應用分析

中圖分類號：R446.11+2? ? ? ? 文獻標識碼：A

文章編號：1672-1721（2023）16-0089-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.16.030

乙二胺四乙酸（EDTA）是臨床上血液分析儀測定過程中首選的抗凝劑，不會對細胞的形態、數目和大小等產生影響[1]。但是，該抗凝劑實際使用過程中亦存在少許病例在檢測過程誘導血小板在體外發生聚集，導致血液分析儀測定的血小板計數低于真實值的現象[2]。EDTA依賴性假性血小板減少癥（EDTA-PTCP）臨床上雖然發生率較低，但是會增加臨床診斷難度，造成血小板輸注過度，影響患者身心健康[3]。因此，積極采取有效的措施快速糾正EDTA-PTCP，對提高臨床輸血安全性具有重要的意義。目前，臨床上校正EDTA-PTCP方法較多，包括[4]：稀釋模式法、微量離心法、更換抗凝劑法等；但實際使用過程中存在諸多不便，部分方法校正不徹底，導致臨床使用受到限制。真空采血管預稀釋法是一種新型的校正方法，可解決原稀釋模式上末梢血不方便、標本不可靠及操作環節多等弊端，具有較強的可操作性[5]。本研究旨在探討靜脈血真空采血管預稀釋法在校正EDTA-PTCP患者血小板（PLT）計數中的應用效果，報道如下。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 臨床資料? ? 選擇2021年7月—2022年5月分宜縣中醫院檢驗科根據實驗室復檢標準篩選出確診的PTCP患者30例作為研究對象，男18例，女12例，年齡18～86歲，平均年齡（59.18±7.43）歲；體重指數（BMI）18～29 kg/m²，平均（22.67±4.23）kg/m²；合并癥：高血壓3例，糖尿病2例，高脂血癥4例。本研究獲得醫學倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2? ? 納入及排除標準? ? 納入標準：（1）符合假性血小板減少癥診斷標準[6]，經實驗室復檢確診；（2）血常規儀器結果顯示血小板減少，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝后血小板聚集；（3）病情穩定，未見皮膚紫癜、鼻出血及牙齦出血等癥狀。

排除標準：（1）二次抽血監測后血小板聚集現象得到糾正者（由于抽血不當引起）；（2）血涂片檢查可見小紅細胞、大血小板或伴有紅細胞碎片者（血小板計數原因非單純抗凝劑引起）；（3）檢查前行放化療、生物免疫治療者或對本研究結果可能產生影響者。

1.3? ? 方法? ? 采集入組患者血氧標本，并分別采用EDTA法、靜脈血真空采血管預稀釋法在不同時間段測定PLT計數，具體方法如下。（1）儀器及設備。Olympus血液細胞分析儀，購自于日本奧林巴斯公司（采用廠家配套試劑）；DETA-K2抗凝管，購自于江西科倫醫療器械有限公司；雙目顯微鏡，型號：BX41，購自于日本奧林巴斯公司。（2）實驗方法：①給予患者胳膊上綁上止血帶，進一步確定靜脈血管的位置，對穿刺血管進行常規消毒，采用預稀釋的真空采血管完成血液的采集。血液標本采集過程中，一端連接患者，另一端連接真空采集管，達到預采血量后，迅速拔掉插在管塞上的采血針頭，并將采集的血液迅速顛倒5～8次，充分混合均勻后，獲得稀釋后的血液標本。②借助全自動血液細胞分析儀，對EDTA稀釋后的血液標本進行檢測，從而獲得血小板數量的測定值，測定值×血量體積校正因子U，從而最終獲得標本的血小板數目的真實值。③具體檢測方法。常規采用EDTA-K2抗凝管，對患者真空采集靜脈血2 mL，倒置放正混合8次后，采用Sysmex全自動血液分析儀，型號：xi-500i，在全血模式下完成PLT水平測定。同時，采用預稀釋真空采集管采集靜脈血1 mL，充分混合后，借助全自動血細胞分析儀BC-5300在全血模式下完成PLT水平測定，分別記錄患者1，2，3 h的PLT水平，并對獲得的數據進行分析。對每份標本完成涂片染色，并觀察血小板聚集情況。上述操作均嚴格遵循儀器和試劑盒相關說明書完成。

1.4? ? 統計學方法? ? 使用SPSS 24.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以x±s表示，行t檢驗和方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2? ? 結果

2.1? ? 不同校正方法不同時間點PLT水平比較? ? EDTA法檢測PLT水平隨著時間的延長呈下降趨勢（P<0.05）；而靜脈血真空采血管預稀釋法隨著時間的延長PLT測定值變化不明顯（P>0.05）；靜脈血真空采血管預稀釋法檢測1 h、2 h及3 h PLT水平均高于EDTA法（P<0.05），見表1。

2.2? ? 不同時間點兩種校正方法PLT計數差值比較? ? 兩種校正方法PLT差值不同時間點存在明顯差異，且隨著時間延長呈上升趨勢（P<0.05），見表2。

2.3? ? 外周血涂片鏡檢結果? ? 通過外周血涂片鏡檢顯示，所有靜脈血真空采血管預稀釋法測定的全血標本隨著時間推移均發生血小板聚集，但聚集程度隨著時間的延長變化不明顯，見圖1。

3? ? 討論

臨床血液常規檢查內容相對較多，包括紅細胞、白細胞、血小板等，常用儀器為全自動五分類血細胞分析儀，檢測過程中使用的抗凝劑為國際血液學標準化委員會推薦的EDTA，雖然能滿足臨床檢測需要，但是該抗凝劑使用時容易引起血小板聚集，導致血液分析過程中出現假性血小板減少現象（即EDTA-PTCP）。趙萌等[7]研究表明：血小板數量檢測是臨床實驗室常用的診斷指標，對于危重癥患者病情監測、治療具有重要的意義。假性血小板減少如不能及時發現，將會增加臨床誤漏診率，嚴重時可引起醫療糾紛。因此，臨床血液檢查過程中積極采取相應的措施校正，對提高檢查準確度有重要意義。

桑海強等[8]研究表明：PTCP在臨床上發生率較低，且多數患者是由于抗凝劑引起的血小板測定結果異常，加強血小板值檢測校正，對指導臨床診療具有重要意義。本研究中，EDTA法檢測PLT水平隨著時間的延長呈下降趨勢（P<0.05），而靜脈血真空采血管預稀釋法隨著時間的延長PLT測定值變化不明顯（P>0.05），靜脈血真空采血管預稀釋法檢測1 h、2 h及3 h PLT水平均高于EDTA法（P<0.05）。由此可見，靜脈血真空采血管預稀釋法檢測PLT計數穩定性較高，而EDTA法檢測時，隨著時間的延長將會造成PLT測定水平呈下降趨勢，影響診斷效果。靜脈血真空采血管預稀釋法臨床使用時能彌補常規采血時存在的不足，同時，該校正方法操作相對簡單，能實現靜脈全血的稀釋，亦可借助刻度線防止抗凝劑暴露血小板膜上糖蛋白中的自身抗體[9]。本研究中，EDTA法與靜脈血真空采血管預稀釋法的PLT差值不同時間點存在明顯差異，且隨著時間延長呈上升趨勢（P<0.05）。由此可見，靜脈血真空采血管預稀釋法校正穩定性較強，對于血小板具有良好的保護作用，能避免遮蔽抗原的暴露，通過1∶10固定比例，有助于降低抗體滴度，從而能拮抗抗凝劑誘發的血小板聚集。但是，無論何種校正方法，隨著靜脈血采集時間的延長，均會對血小板檢測結果產生影響。因此，血液標本采集后應盡早完成PLT檢測，避免長時間放置而影響檢測結果。

靜脈血真空采血管預稀釋法能降低真空采血管中凝血因子的濃度，避免凝血因子持續增加引起的靜脈血液標本稀釋，從而影響測定結果；該方法能抑制凝血因子產生的鏈式活性反應，避免采集的血液標本在真空管中凝固[10]。同時，PLT檢測時通過采血管上的精密刻度，能提高靜脈采血量的準確性[11]。本研究中，通過外周血涂片鏡檢，所有靜脈血真空采血管預稀釋法測定的全血標本隨著時間推移均發生血小板聚集，但聚集程度隨著時間的延長變化不明顯。由此可見，靜脈血真空采血管預稀釋法測定血小板計數具有較強的穩定性。Zhang H等[12]研究表明：靜脈血真空采血管預稀釋法校正EDTA-PTCP血小板計數時，患者一次血液采集即可完成對標本的保存、離心、檢測等步驟，能避免多次、重復采集。同時，靜脈血真空采血管預稀釋法具有操作簡單、可靠等優點，能保證檢測結果的科學性、合理性，且該稀釋法對儀器及設備要求較低，適合基層醫院使用。

綜上所述，與EDTA法檢測結果相比，靜脈血真空采血管預稀釋法測定的PLT計數結果在3 h內穩定性相對較高，可用于EDTA-PTCP血小板計數測定中的校正，具有簡便、準確度高等優點，且該檢查方法對檢驗員專業技能要求較低，適合在基層醫院推廣。

參考文獻

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（收稿日期：2023-03-16）