P16蛋白在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及臨床意義

晁遠(yuǎn)　李美波　宋安輝

【摘要】? 目的? ? 分析在宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌中P16蛋白表達(dá)水平與臨床意義。方法? ? 收集2019年5月—2020年12月惠州市第六人民醫(yī)院上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌、宮頸炎患者共142例，根據(jù)疾病類型分組，宮頸炎組21例、宮頸癌組63例、宮頸上皮內(nèi)瘤變組58例，經(jīng)免疫組化染色，檢測所有受試者P16水平，分析P16表達(dá)水平與宮頸病變的關(guān)系。結(jié)果? ? 本組142例受試者中，P16陽性檢出97例（68.31%），陰性檢出45例（31.69%）；宮頸炎組患者P16陽性檢出率0.00%，顯著低于CIN組的70.69%、宮頸癌組的88.89%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CINⅠ級患者P16陽性檢出率52.94%，顯著低于CINⅡ級組（68.75%）與CINⅢ級組（84.00%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨著HR-HPV載量等級升高，P16蛋白陽性表達(dá)率越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HR-HPV載量陽性表達(dá)在宮頸炎組中占28.57%，顯著低于CINⅠ級組（70.59%）、CIN Ⅱ級組與Ⅲ級組（80.49%）、宮頸癌組（95.24%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Spearman分析，在宮頸炎、CIN Ⅰ級組中HR-HPV載量與P16呈正相關(guān)（P<0.01）；而在宮頸癌、CINⅡ級與Ⅲ級組中，HR-HPV載量與P16表達(dá)并無明顯相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論? ? CIN病變程度、宮頸癌與病灶組織中P16蛋白表達(dá)存在相關(guān)性，P16可作為臨床診斷重要的生物學(xué)標(biāo)記。

【關(guān)鍵詞】 宮頸上皮內(nèi)瘤變；宮頸癌；P16蛋白；相關(guān)性

Expression and clinical significance of P16 protein in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia

Chao Yuan，Li Meibo， Song Anhui. The Sixth People's Hospital of Huizhou City，Huizhou，Guangdong? 516000

【Abstract】? Objective? ? To analyze the expression level and clinical significance of P16 protein in cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer. Methods? ? This study collected a total of 142 patients with intraepithelial neoplasia， cervical cancer， and cervicitis admitted to our department from May 2019 to December 2020. According to the type of disease， 21 cases were in the cervicitis group， 63 cases in the cervical cancer group， and cervical epithelium. In 58 cases of internal neoplasia，the P16 level of all subjects was detected by immunohistochemical staining， and the relationship between P16 expression level and cervical lesions was analyzed. Results? ? Among the 142 subjects in this group， 97 cases （68.31%） were detected as positive for P16 and 45 cases （31.69%） were detected as negative. In the cervicitis group， P16 positive was 14.29%， which was significantly lower than CIN70.69. It was lower than 92.06% of cervical cancer， the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive detection rate of P16 in CIN level Ⅰ patients was 52.94%， which was significantly lower than that of CIN level Ⅱ （68.75%） and CIN level Ⅲ （84.00%） patients， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression rate of P16 protein increased with the level of HR-HPV load， and the higher the positive expression， the difference was statistically significant （ P<0.05）. Spearman analysis showed that HR-HPV load was positively correlated with P16 in cervicitis and CIN grade Ⅰ tissues （P<0.01）; while in cervical cancer， CIN grade Ⅱ and grade Ⅲ tissues， HR-HPV load and P16 expression were not There is no obvious correlation （P>0.05）. Conclusion? ? There is a correlation between the degree of CIN lesions， cervical cancer and the expression of P16 protein in the lesion tissue. P16 can be used as an important biological marker for clinical diagnosis and is worthy of promotion.

【Key Words】? Cervical neoplasia；Cervical cancer；P16protein；Cervicitis

中圖分類號：R683.42? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? 文章編號：1672-1721（2023）01-0081-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.01.027

宮頸癌約90%因人乳頭瘤病毒（HPV）感染引起，長期持續(xù)高危HPV感染是造成高級別宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）的關(guān)鍵因素，并隨著病情進(jìn)展，最終形成癌變，對患者生命安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅[1] 。P16基因具備負(fù)調(diào)控細(xì)胞周期作用，屬于細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）抑制因子；HR-HPV陽性的CIN的進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)與P16蛋白異常表達(dá)存在相關(guān)性[2-3]。目前，P16蛋白在宮頸組織病理診斷中得到大力推廣，但在不同宮頸病變中的表達(dá)仍需要進(jìn)一步探索分析[4]。本研究選擇上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌、宮頸炎患者共142例，檢測各種病變組織中P16表達(dá)，報(bào)道如下。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 一般資料? ? 收集2019年5月—2020年12月惠州市第六人民醫(yī)院CIN、宮頸癌、宮頸炎患者共142例，年齡20～75歲，平均年齡（48.65±11.34）歲，其中CIN 58例、宮頸癌63例、宮頸炎21例。本研究經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）入選者對研究知情，自愿參與；（2）有性生活史；（3）無放化療、宮頸手術(shù)史；（4）患者年齡≥18歲；（5）無服用免疫抑制劑史，未注射過HPV疫苗。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠期、哺乳期女性；（2）合并有其他惡性疾病、腫瘤等；（3）心肝腎等臟器功能不全；（4）合并有陰道毛滴蟲、外陰道假絲酵母菌等病原體感染；（5）接受全子宮切除術(shù)或?qū)m頸環(huán)切術(shù)。

1.2? ? 方法? ? 設(shè)備與試劑：采用福州邁新公司免疫組織化檢測試劑、抗P16鼠單克隆抗體試劑；日本OLYMPUS BX53生物顯微鏡；德國Leica RM2235 輪轉(zhuǎn)石蠟切片機(jī)；德國Leica CV5030全自動染色機(jī)；全自動密閉式組織脫水機(jī)（江蘇微凱 WQT-200）；德國萊斯康公司3ML LED光學(xué)電子陰道鏡。

經(jīng)陰道鏡切取受試者宮頸組織標(biāo)本，根據(jù)試劑盒操作方法進(jìn)行染色，制作切片，觀察。

1.3? ? 結(jié)果判斷? ? 通過免疫組化SP法檢測P16蛋白，陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核、細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。在40×10倍光鏡下，于病變細(xì)胞密集位置選取5個(gè)視野觀察，每個(gè)視野計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞，P16蛋白陽性強(qiáng)度根據(jù)陽性細(xì)胞分布、數(shù)量等評估，強(qiáng)陽性（+++）陽性細(xì)胞比例>50%；中等陽性（++）陽性細(xì)胞比例26%～50%，弱陽性（+）陽性細(xì)胞比例5%～25%；陰性（-）陽性細(xì)胞比例不足5%[5]。

檢測HPV病毒載量：樣本檢測中HPV-DNA含量情況：根據(jù)樣本相對發(fā)光單位、與標(biāo)準(zhǔn)陽性參照臨界值比作為反映標(biāo)準(zhǔn)，采用第二代雜交捕獲法，可檢測出HR-HPV DNA病毒載量共13種，如HPV31，35等，當(dāng)兩者比值<1視為陰性，≥1視為陽性，陽性可將其分為>1 000、100～1 000、及1～100[6]。

1.4? ? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? ? 將數(shù)據(jù)納入SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ²檢驗(yàn)，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 不同宮頸病變患者P16檢測結(jié)果比較? ? 142例患者中P16陽性檢出97例（68.31%），陰性檢出45例（31.69%）；宮頸炎組患者P16陽性檢出率為0.00%，顯著低于CIN組的70.69%、宮頸癌組的88.89%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2? ? CIN不同病變程度P16陽性結(jié)果比較? ? CIN Ⅰ級組患者P16陽性檢出率52.94%，顯著低于CIN Ⅱ級組（68.75%）與CIN Ⅲ級組（84.00%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3? ? 不同宮頸病變組織中HR-HPV載量分布與P16表達(dá)比較? ? 隨著HR-HPV載量等級升高，P16蛋白陽性表達(dá)率越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ²=41.054，P<0.001）。HR-HPV載量陽性表達(dá)在宮頸炎組占28.57%，顯著低于CINⅠ級組（70.59%）、CIN Ⅱ級組與Ⅲ級組（80.49%）、宮頸癌組（95.24%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ²=69.021，P<0.001），見表3。

2.4? ? 不同宮頸病變HR-HPV載量與P16的相關(guān)性? ? 在宮頸炎組織中HR-HPV載量與P16表達(dá)水平呈正相關(guān)性（P<0.05）；CINⅠ級組中HR-HPV載量與P16呈正相關(guān)（P<0.05）；而在宮頸癌、CIN Ⅱ級與Ⅲ級組中，HR-HPV載量與P16表達(dá)并無明顯相關(guān)性（P>0.05），見表4。

3? ? 討論

CIN是臨床婦科常見疾病，屬于宮頸癌的癌前病變，及時(shí)發(fā)現(xiàn)癌前病變，早期干預(yù)是降低宮頸癌病死率的關(guān)鍵。大量研究證實(shí)，宮頸癌、CIN的發(fā)生發(fā)展，與HR-HPV反復(fù)感染存在明顯的相關(guān)性[7-9]。因此，可作為臨床診斷、治療宮頸癌、CIN的關(guān)鍵性依據(jù)。根據(jù)美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）指南，對于CINⅡ級、Ⅲ級患者采取手術(shù)治療，CIN Ⅰ級患者以隨訪觀察為主。但隨著臨床研究深入，有學(xué)者指出，CINⅡ級與CINⅠ級生物學(xué)行為更為相似，且最終癌變率相對較低[10]。因此，低于CIN Ⅱ級患者盲目采取手術(shù)切除治療，可能存在過度治療風(fēng)險(xiǎn)，對預(yù)后造成不利影響。因此，需要尋求一種更為準(zhǔn)確、有效、簡單的檢測方法，提高手術(shù)治療合理性。

在宮頸癌發(fā)生中HR-HPV反復(fù)感染是其必要條件，但HR-HPV病毒載量與CIN之間關(guān)系仍存在爭議[11]。本研究顯示，隨著HR-HPV載量等級升高，P16蛋白陽性表達(dá)率越高（P<0.05）。HR-HPV載量陽性表達(dá)在宮頸炎組占28.57%，顯著低于CINⅠ組、CIN Ⅱ級與Ⅲ級組、宮頸癌組（P<0.05），說明宮頸癌、CIN的發(fā)生進(jìn)展與HR-HPV感染密切相關(guān)，并隨著病情嚴(yán)重程度增加，HR-HPV感染陽性率升高。此外也有研究報(bào)道，受到宿主DNA、病毒型別等因素影響，可能在宮頸癌早期HR-HPV病毒載量出現(xiàn)下降情況[12]。故將HR-HPV單獨(dú)作為預(yù)測指標(biāo)診斷宮頸癌、CIN病變可能存在一定誤差，需要進(jìn)一步證實(shí)。

本研究顯示，宮頸炎組患者P16陽性檢出率0.00%，顯著低于CIN的70.69%、宮頸癌的88.89%（P<0.05）。同時(shí)，CINⅠ級患者P16陽性檢出率52.94%，顯著低于CINⅡ級（68.75%）與CIN Ⅲ級（84.00%）（P<0.05）。說明P16蛋白表達(dá)與宮頸組織病變嚴(yán)重程度存在相關(guān)性。P16基因可通過抑制CDK4活性，使Rb蛋白磷酸化阻斷，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖、分裂；P16基因位于人類染色體9P21，起到負(fù)調(diào)控細(xì)胞周期的作用。本次研究結(jié)果顯示，在宮頸炎組織、CINⅠ級組中HR-HPV載量與P16呈正相關(guān)（P<0.01）；而在宮頸癌、CIN Ⅱ級與Ⅲ級組織中，HR-HPV載量與P16表達(dá)并無明顯相關(guān)性（P>0.05），提示在宮頸病變組織中HR-HPV病毒高載量下，發(fā)病早期可引起宮頸部分免疫反應(yīng)，導(dǎo)致P16表達(dá)快速升高。

綜上所述，在宮頸癌、CIN病灶組織中P16表達(dá)顯著升高，其可作為臨床診斷重要的生物學(xué)標(biāo)記。

參考文獻(xiàn)

[1]? ? 項(xiàng)媛媛，王苗苗，謝艷，等.P16蛋白，HPV L-1殼蛋白在CIN和早期宮頸癌組織中的表達(dá)及其篩查價(jià)值[J].中國婦幼健康研究，2017，28（7）：778-780.

[2]? ? 馬雪梅，魏璇，郭興巧，等.在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌組織中P16蛋白與HPV感染的關(guān)系[J].中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2017，20（7）：769-772.

[3]? ? 李貝，倪瀟瀟，康妮，等.宮頸病變組織中C-myc基因和P16蛋白表達(dá)及其與高危型人乳頭瘤病毒感染的相關(guān)性研究[J].中國臨床醫(yī)生雜志，2020，48（3）：355-357.

[4]? ? 姚秀華，黃卓敏，王耀楷，等.年輕婦女宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變，宮頸癌組織中P16InK4a和Ki-67的表達(dá)及其預(yù)測作用[J].中國計(jì)劃生育學(xué)雜志，2016，24（2）：111-113.

[5]? ? 王連云，張普，耿筱虹，等.多腫瘤抑制基因1、生存素和基質(zhì)金屬蛋白酶在宮頸病變中的表達(dá)及臨床意義[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2018，28（18）：2229-2232.

[6]? ? 呂定豐，翁幸鐾，張哲，等.宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中人乳頭狀瘤病毒感染與P16基因表達(dá)的關(guān)系[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2016，26（1）：78-80.

[7]? ? 劉小艷，安瑩花，王娜，等.腫瘤標(biāo)志物，抑癌基因P16和HPV-L1蛋白檢查在宮頸癌和癌前病變診斷中的意義[J].中國腫瘤臨床與康復(fù)，2020，27（4）：70-73.

[8]? ? 王海瑞，廖光東，陳汶，等. P16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值[J].中華腫瘤雜志，2017，39（8）：636-640.

[9]? ? 侯麗娟，翟建軍. PAR1、PAR4在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2017，46（7）：967-969，972.

[10]? ? 陸曉紅.宮頸新柏氏技術(shù)抹片異常患者陰道鏡下活檢結(jié)合檢測p16、p53及Ki-67的臨床意義[J].中國婦幼保健，2018，33（23）：5385-5387.

[11]? ? 郁明霞，徐軍，席曉薇. P16ink4a、Ki67蛋白聯(lián)合檢測在HPV持續(xù)感染的宮頸病變早期診斷中的臨床意義[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，16（10）：970-973.

[12]? ? 徐英，張鋒英，王茜，等.宮頸癌組織P16 INK4A，端粒酶，人宮頸癌癌基因表達(dá)及其與臨床病理的相關(guān)性研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2019，16（20）：37-41.

（收稿日期：2022-10-19）