河源市源城區(qū)2 468例兒童呼吸道感染病原體核酸檢測結果分析

陳運恒 邱 莉 廖翠芳 駱 紅

廣東省河源市婦幼保健院（河源 517000）

呼吸道感染是河源地區(qū)住院患兒最常見的疾病之一，急性呼吸道感染是兒童最常見的感染性疾病，急性下呼吸道感染是5歲以下兒童死亡的主要原因［1］，嚴重威脅兒童生命健康，給家庭和社會造成了嚴重的經濟及疾病負擔。近三年來，新型冠狀病毒的全面爆發(fā)，嚴重威脅著人民生命健康，特別是免疫功能低下的老年人及兒童，事實證明呼吸道核酸檢測對呼吸道疾病的早發(fā)現、早診斷發(fā)揮著重要作用［2］。因此，盡早地明確呼吸道感染的病原體對臨床診斷、疾病的防控、抗生素的合理應用具有重要意義，本次研究使用PCR技術和多重微球雜交技術，對廣東省河源市源城區(qū)長安街河源市婦幼保健院2020年3月—2022年2月因呼吸道感染住院患兒呼吸道分泌物進行6種常見病原體檢測，現分析報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2020年3月—2022年2月在河源市婦幼保健院兒科因呼吸道感染住院的2 468例患兒。男1 493例，女975例，年齡29日～12歲，按《諸福棠實用兒科學》［3］診斷標準確診為呼吸道感染。本研究所涉及患兒均匿名報道，研究方案經河源市婦幼保健院醫(yī)學倫理委員會批準（批件號：YXLL-202304）。

1.2 方法

1.2.1 標本的采集、保存和運送 患兒入院時由兒科住院部經專業(yè)培訓的護士用一次性無菌拭子擦拭兩側腭弓、咽及扁桃體，將咽拭子置入無菌管中，密封送檢。標本采集后2小時內送到實驗室，如無法送到可4 ℃暫存48小時以內，超過48小時則需-20 ℃低溫冷凍保藏。避免反復凍融，造成假陰性。

1.2.2 標本檢測 采用廣州市達安臨床檢驗中心提供的呼吸道病原體核酸檢測試劑盒，本試劑盒使用PCR技術和多重微球雜交技術，針對呼吸道病原體設計PCR引物探針，PCR擴增分兩管進行。通過PCR獲得標記的產物后與微球上探針雜交，加入顯色劑，上機檢測。根據病原體對應探針的信號的高低對檢測結果進行判斷。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSSAU軟件進行統(tǒng)計學分析。定性資料組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 呼吸道病原體檢出的總體情況

2 468 例標本中檢測出1 302例陽性，檢出率為52.8%。單一病原體感染檢出率有高至低依次為：呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）、肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae，Sp）、流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae，Hi）、他莫拉菌（Moraxella catarrhalis，MC）、肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）、腺病毒（adenovirus，ADV），混合感染檢出率為12.4%（307/2 468），二種病原體混合感染多見，其中以Sp合并RSV感染最多見，占混合感染中43.3%（133/307）。三種病原體同時感染檢出41例，排在前三位的病原體分別是：Sp、MC、RSV16例，Hi、Sp、RSV 10例，Hi、Sp、MC10例。兩例為四種病原體混合感染，分別為Hi、Sp、MC、RSV，Hi、Sp、MC、MP。其他混合感染組合樣式多樣，無明顯規(guī)律。見表1。

表1 6種呼吸道病原體核酸檢測結果

2.2 呼吸道病原體檢出情況

嬰兒組（29日～1歲）、幼兒組（1～3歲）、學齡前組（3～6歲）、學齡組（6～12歲）。嬰兒組和幼兒組中RSV檢出率最高，但幼兒組Sp檢出率較嬰兒組明顯增高。學齡前組則以Sp檢出率最高，RSV較前兩組明顯減少，Hi檢出率在這個年齡組較其他組高。學齡組Sp檢出率在4個年齡組中占比最高，混合感染在各年齡組均排在前三。不同年齡組呼吸道病原體檢出率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。在呼吸道感染住院患兒中，年齡29日～3歲共1 829例，嬰兒組和幼兒組中以病毒感染為主，其中RSV檢出率最高，混合感染次之，而年長兒以細菌感染為主。ADV、MP在各年齡組差異不大。見表2 。

表2 不同年齡組呼吸道核酸6項檢出情況 ［例（%）］

2.3 各季節(jié)呼吸道病原體檢出情況

按季節(jié)分；春季（3～5月）、夏季（6～8月）、秋季（9～11月）、冬季（12～次年2月）。春季混合感染的檢出率最高，單一病原體感染春季Sp檢出率稍高于RSV，Hi在春季檢出率占比較其他季節(jié)高。夏季則RSV檢出率高于Sp，該季節(jié)MC、ADV的檢出率占比均高于其他季節(jié)。秋季和冬季均是RSV檢出率最高，冬季Sp檢出率僅次RSV，MP全年散發(fā)，占比均較低。我院呼吸道感染住院患兒多集中在秋冬季節(jié)，不同季節(jié)呼吸道病原體的檢出率不同，RSV在秋季節(jié)檢出率遠遠高于其他病原體。不同季節(jié)樣本的病原體分布比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同季節(jié)呼吸核酸6項檢出情況 ［例（%）］

2.4 呼吸道病原體在不同性別的分布情況

2 468 例呼吸道感染患兒中，男1 493例，檢出率54.0%，女975例，檢出率50.8%，不同性別組的各病原體檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表4。

表4 不同性別的呼吸道核酸6項的檢出情況 ［例（%）］

3 討 論

呼吸道疾病感染病原體多種多樣，主要有細菌、病毒、支原體、衣原體等，病原學檢測方法也有很多種，包括分離培養(yǎng)、抗原檢測、抗體檢測和核酸檢測等［2］。分離培養(yǎng)為呼吸道感染病原體檢測的“金標準”［4］，但耗時長、敏感性低，不能及時為臨床診療提供依據；抗體檢測因存在窗口期易導致假陰性結果；抗原檢測常采用直接免疫熒光法，特異性較高，但靈敏度偏低，并且容易引起假陽性結果［5］。呼吸道核酸檢測是對病原體的DNA或RNA進行檢測，這種基于分子生物學的技術，具有更高的靈敏度、特異度［2］。

本次回顧性研究河源市婦幼保健院兒科住院部2020年3月—2022年2月因呼吸道感染住院的患兒2 468例，呼吸道病原體檢出率為52.8%，稍高于國內不同地區(qū)多位學者報道的呼吸道病原檢測陽性率，如福建為43.26%［6］，蘇州為30.74%［7］，北京為50.45%［8］，可能與不同地區(qū)在收集病例、采樣、檢測方法、氣候、病原學流行特點等方面存在差異有關。結果顯示，兒童呼吸道感染最主要病原體是病毒，檢出率為21.3%，這與國內張曉麗［9］、黃艷智［10］報道一致。而RSV檢出率最高，占所有陽性病例的40.4%（526/1 302），研究顯示河源市源城區(qū)住院兒童呼吸道感染的主要病毒是RSV。全球每年5歲以下因RSV感染住院的兒童大約有270萬～380萬，其中約4.8萬～7.5萬人死亡［11］。其次是細菌感染，以Sp病原體檢出率最高，MP感染的呼吸道疾病呈散發(fā)發(fā)病。

研究顯示在2 468例中有1 829例為29日～3歲的患兒，嬰幼兒為呼吸道感染疾病的主要人群，這與該年齡組患兒的自身免疫、呼吸系統(tǒng)發(fā)育不完善、對病原體的抵抗力差有很大關系。不同年齡組呼吸道感染的病原體檢出率不同，嬰兒組和幼兒組病原體檢出率最高的是RSV，分別為57.45%、32.86%，提示在我院呼吸道感染的嬰幼兒以RSV感染為主。混合感染在嬰兒組、幼兒組、學齡前組、學齡組陽性率依次為20.92%、28.13%、24.90%、9.26%，混合感染有多種模式，有一種細菌+一種病毒、二種細菌+一種病毒、三種細菌+一種病毒、一種細菌+MP+一種病毒等等，最多見的是Sp+RSV。混合感染的增多與模式多樣化是否與河源市源城地區(qū)的流行病學、生活環(huán)境、臨床習慣性用藥等有關聯(lián)？目前對混合感染和疾病嚴重程度的相關性的研究有限，一些報道顯示多病原體合并感染可能增加疾病的嚴重程度［12-14］，而有些研究卻表示多種病原體合并感染的臨床癥狀之間沒有顯著性差異［15］，由于本檢測采集標本為口咽部拭子，故對細菌陽性結果的判斷還需臨床醫(yī)師根據患兒臨床表現進行綜合評估。判斷是定植菌或致病菌，謹慎選擇抗生素治療。

結果表明，因呼吸道感染住院的患兒多集中在秋冬季節(jié)，其中秋季6種呼吸道病原體檢出率均高于其他三季，提示該季節(jié)為呼吸道感染的高發(fā)季節(jié)，應做好防控工作。RSV在秋冬季節(jié)檢出率明顯高于春夏季，與池細俤等［16］報道一致，春季混合感染的檢出率最高，ADV在夏季中檢出率最高，占全年80%，其他病原體全年呈散發(fā)流行。

綜上所述，秋冬季節(jié)是河源市源城區(qū)呼吸道感染的高發(fā)季，多見于嬰幼兒群體，而RSV為秋冬季節(jié)嬰幼兒的主要病原體，Sp次之。呼吸道核酸檢測為我們進一步了解本地區(qū)呼吸道感染患兒的流行病學情況提供了可靠的依據，促進了我院提高臨床診療水平，規(guī)范抗生素的合理應用，有助相關疾病的防控工作。