塞內(nèi)卡病毒病及其防控

文│金雪蕾（山東省博興縣畜牧獸醫(yī)服務中心）

高凱（山東省博興縣龐家鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）

A型塞內(nèi)卡病毒是2002年培養(yǎng)腺病毒5型載體時偶然發(fā)現(xiàn)的，當時被命名為Seneca Valley病毒001。病毒名字來源于Seneca Creek州立公園，靠近發(fā)現(xiàn)病毒的實驗室Neotropix，Inc.。可能是通過胎牛血清或豬胰蛋白酶引入細胞培養(yǎng)的，后者被認為更有可能。對Seneca Valley病毒001的主要研究是將其作為一種溶瘤病毒用于治療不同類型的人類癌癥，Seneca Valley病毒001在醫(yī)學領域被稱為NTX-010。

豬特發(fā)性水皰病（porcine idiopathic vesicular disease）被用來指代罕見的病例，豬的皮膚、鼻子、口腔和冠狀動脈帶上出現(xiàn)侵蝕和水皰，病因不明。這種病例已在全世界被廣泛報道，包括美國、澳大利亞、新西蘭和意大利等。經(jīng)調(diào)查，排除了常見水皰性疾病，如口蹄疫、水皰性口腔炎和水皰性皮疹等。來自加拿大和美國的研究表明，塞內(nèi)卡病可能與豬特發(fā)性水皰病有關。感染塞內(nèi)卡病毒的母豬和育肥豬主要在鼻子和冠狀動脈帶上出現(xiàn)皮膚囊泡病變。

一、分子特征

塞內(nèi)卡病毒具有Picornaviridae科病毒共有的一些特征，病毒粒子直徑約為25～30納米，呈二十面體對稱的無包膜衣殼，基因大小約為7.3kb，為線性單鏈RNA基因組。塞內(nèi)卡病毒基因組在5’UTR部分有666個核苷酸，在3’UTR部分有71個核苷酸，還有一個poly（A）尾。塞內(nèi)卡病毒基因組有一個大的單一開放閱讀框，編碼約2180個氨基酸的蛋白。多蛋白遵循Picornaviridae科病毒基因組標準的L-4-3-4布局，并通過病毒編碼的蛋白酶加工成成熟的蛋白。塞內(nèi)卡病毒基因組由前導蛋白（L肽）和3個主要蛋白區(qū)組成，被命名為P1區(qū)、P2區(qū)和P3區(qū)。與同樣含有L肽的Cardiovirus、Apothovirus、Erbovirus、Kobuvirus、Teschovirus和Sapelovirus屬病毒不同，塞內(nèi)卡病毒的L肽可能具有獨特的功能，尚待確定。P1區(qū)被切割成結構多肽VP0、VP3和VP1，它們構成病毒衣殼；位于VP0內(nèi)的成熟位點產(chǎn)生VP2和VP4多肽；VP1、VP2和VP3分別在病毒衣殼的外表面表達，而VP4位于其內(nèi)表面。P2和P3基因組區(qū)編碼參與蛋白質(zhì)加工的非結構多肽（2Apro、3Cpro和3CDpro）與病毒復制有關的非結構多肽（2B、2C、3AB、3BVPg、3CDpro和3Dpol）。P2區(qū)包括2A、2B和2C，2A蛋白是一種由9個氨基酸組成的短肽；2B蛋白的一級序列與所有其他已知的Picornaviridae科病毒不同，可能在增強膜通透性方面發(fā)揮作用，其作用類似于病毒通道蛋白；2C蛋白是一種參與RNA合成的解旋酶樣多肽。P3區(qū)包括3A、3B、3C和3D多肽，3A的功能尚不清楚，3B區(qū)編碼蛋白的作用類似于病毒RNA合成的引物，3C是一種蛋白酶，3D多肽是RNA依賴性RNA聚合酶的主要成分。

二、發(fā)病表現(xiàn)和宿主免疫反應

研究人員分別在9周齡和4個月齡的豬身上使用A型塞內(nèi)卡病毒株進行實驗感染，結果顯示了塞內(nèi)卡病毒與豬水皰病存在明確關聯(lián)。在這兩項研究中，A型塞內(nèi)卡病毒的潛伏期為4～5天，扁桃體被認為是感染急性期塞內(nèi)卡病毒復制的主要部位之一。病毒血癥期短，持續(xù)約7天，在接種后第三天血清中塞內(nèi)卡病毒載量達到峰值。接種病毒的豬在鼻子、嘴唇、舌頭和蹄，特別是在冠狀動脈帶和趾間間隙出現(xiàn)水皰樣病變，其他臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱、嗜睡、跛行和厭食。水皰性病變最初表現(xiàn)為變白的腫脹區(qū)域，后來發(fā)展為囊泡，囊泡迅速破裂，形成潰瘍，潰瘍可能被血清纖維蛋白滲出物覆蓋。與其他水皰性疾病一樣，潰瘍一般在7天內(nèi)開始修復，上皮細胞的再生通常在2周內(nèi)完成。短暫的厭食、發(fā)熱和跛行一般出現(xiàn)在水皰性病變之前。

實驗感染豬的組織剖驗后可見扁桃體、脾、淋巴結和肺部病變，包括淋巴組織中的輕度至中度淋巴增生，偶爾伴有彌漫性充血，肺部有淋巴細胞、漿細胞和巨噬細胞的多灶性輕微血管周圍積聚。在疾病的急性期，在肺、縱隔和腸系膜淋巴結、肝、脾、小腸和大腸以及扁桃體中廣泛存在病毒RNA和感染性顆粒。除肺、心臟和肝外，康復豬的不同器官中的塞內(nèi)卡病毒核酸檢測均呈陽性，但在感染后期沒有從這些組織中分離出活的病毒。

塞內(nèi)卡病毒感染后可通過豬的口腔和鼻腔分泌物、糞便和尿液等排泄物進行傳播，既可以通過同一豬舍中動物之間的接觸直接傳播，也可以通過污染環(huán)境設施等進行間接傳播。

在臨床上以及在實驗室攻毒的育肥豬中，塞內(nèi)卡病毒A感染誘導早期免疫反應。抗體滴度的增加與疾病嚴重程度、組織中病毒載量、病毒血癥和病毒脫落同時發(fā)生。塞內(nèi)卡病毒A特異性免疫球蛋白（IgM）的最大濃度可持續(xù)約10天，特異性IgG反應較晚，21天后才出現(xiàn)強烈的陽性反應。

三、診斷

目前有多種檢測技術可用于診斷塞內(nèi)卡病毒感染。分子檢測技術尤其是qRT-PCR，是水皰病診斷的黃金標準，快速、敏感和特異，可從不同的生物樣本中檢測塞內(nèi)卡病毒基因組。通過分子檢測技術診斷的缺點是由于病毒感染的進展不同而導致檢測結果不一致，不同生物樣品中的病毒載量存在差異。因此在實際檢測中，應收集多種組織樣品，包括血清、扁桃體、糞便、口腔和膀胱液，通過分子檢測技術進行塞內(nèi)卡病的篩查。A型塞內(nèi)卡病毒對上皮細胞有很強的嗜性，但也可以在其他組織中檢測到，包括心肌和腦干。

目前可用的其他診斷技術包括免疫組織化學和原位雜交，分別鑒定組織樣本中特定病毒抗原和核酸的檢測方法，這兩種技術都已被成功應用。盡管單純的組織病理學評估對于塞內(nèi)卡病毒感染的診斷并不是最終的，但該技術的發(fā)現(xiàn)可以指導組織和器官樣本的選擇，再用于免疫組織化學和原位雜交確診。

可用于豬中塞內(nèi)卡病毒篩查的抗體檢測方法是間接和競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、免疫熒光法檢測和間接免疫熒光抗體試驗。抗體檢測方法的主要優(yōu)勢是能夠在大規(guī)模診斷計劃、流行病學研究和流行病學監(jiān)測中處理大批量樣本。

無論診斷方法如何，豬的塞內(nèi)卡病在臨床上與病毒性水皰感染，特別是和口蹄疫難以區(qū)。但總體而言，塞內(nèi)卡病毒感染的臨床表現(xiàn)比口蹄疫輕，很少觀察到發(fā)燒和跛行。

四、防控措施

目前還沒有針對塞內(nèi)卡病毒感染的疫苗或特效治療方法。因此，應采取嚴格的生物安全措施避免將病原體引入豬群以及已確定感染的豬群，以避免不同病毒毒株在豬群中混合傳播。嚴格控制車輛、設備、人員、動物和食物進入生豬生產(chǎn)單位。在引入動物的情況下，應從沒有傳染源的地區(qū)和農(nóng)場購買豬，并在入群之前進行隔離。其他措施包括控制老鼠和家蠅，并限制其他動物進入養(yǎng)殖區(qū)。

由A型塞內(nèi)卡病毒感染引起的臨床癥狀與口蹄疫癥狀非常相似，因此應采取控制口蹄疫病毒傳播的控制措施和消毒方案。包括使用2%氫氧化鈉、2%乙酸、3%次氯酸鈉、酚類衍生物（4%對叔芳基氨基苯酚、10%鄰芐基對氯苯酚、12%鄰苯基苯酚）和季銨醛化合物（26%烷基二甲基芐基氯化銨、7%戊二醛）等。過氧化氫已被證明為廣譜消毒劑，可對抗細菌、真菌和病毒，對牛病毒性腹瀉病毒等Picornaviridae科病毒有良好的殺病毒活性，也被證明對口蹄疫病毒和塞內(nèi)卡病毒有效。

五、流行病學

塞內(nèi)卡病毒感染引起的疾病的發(fā)病率和死亡率與豬種類而異。在斷奶仔豬中的發(fā)病率約為0.5%～5%，在育肥豬和育種豬中的患病率約為5%～30%，在母豬的發(fā)病率明顯較高，但死亡率非常低（約為0.2%），豬在臨床癥狀緩解后很快就恢復了。新生豬的發(fā)病率和死亡率要高得多，尤其是1～4日齡的仔豬，發(fā)病率可達70%，死亡率在15%～30%之間。

當豬群免疫力下降時，可能會在以前發(fā)病已恢復的豬群中引發(fā)新的疫情。充滿液體的囊泡和囊泡破裂的動物與易感個體之間的直接接觸可能是病毒最重要的傳播途徑之一。人員進出、用于運送動物尸體和飼料輸送的車輛、器具和設備，包括用于屠宰的裝備，被認為是豬群感染塞內(nèi)卡病毒的途徑。從1～2日齡新生仔豬的不同組織和器官樣本中檢測到塞內(nèi)卡病毒，說明該病毒有垂直傳播的可能性，還需要進一步的研究來證實這種傳播途徑。