骨髓增生異常綜合征患者血清miR-125b-5p、miR-17-5p表達變化及其與臨床特征和預后的關系

姜銘，徐娟，賁海祥，丁林林，尹紅

1 如皋市人民醫院檢驗科，江蘇如皋226500；2 如皋市人民醫院血液內科；3 南通大學附屬醫院血液病研究室

骨髓增生異常綜合征（MDS）是起源于造血干細胞的一組異質性髓系克隆性疾病，主要表現為病態造血或無效造血、難治性血細胞減少等。約30%MDS患者會進展為急性髓系白血病［1］。近年來，盡管去甲基化、化療、免疫抑制劑、造血干細胞移植等治療手段不斷改進，MDS的治療效果有所提升，但其預后依然較差，5年總體生存率仍不足30%［2］。迄今為止，MDS的發病機制仍不完全清楚。微小核糖核酸（miRNA）是一類由20～24個核苷酸組成的短鏈非編碼RNA分子，可與目標mRNA結合并調控目標基因的表達。miRNA異常表達能夠參與包括MDS在內的血液系統惡性腫瘤的發生、發展［3］。miR-125b-5p屬于miR-125家族，定位于人11號染色體區域，是一種抑癌基因。有研究報道，miR-125b-5p可通過靶向抑制腫瘤蛋白D52表達抑制乳腺癌細胞的增殖、侵襲和遷移［4］。miR-17-5p屬于miR-17家族，定位于人染色體13q31.3，是一種促癌基因。有研究報道，miR-17-5p可通過靶向抑制熱休克蛋白B2促進結直腸癌細胞的增殖、遷移和侵襲［5］。但miR-125b-5p、miR-17-5p在MDS中作用的研究報道較少。鑒于此，本研究探討了MDS患者血清miR-125b-5p、miR-17-5p表達變化及其與臨床特征和預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2017年1月—2020年1月如皋市人民醫院收治的MDS患者76例（觀察組）。MDS診斷依據《骨髓增生異常綜合征診斷與治療中國專家共識（2014年版）》［7］。納入標準：①符合MDS診斷標準；②初診；③入院前未接受任何抗腫瘤治療；④年齡>18歲。排除標準：①合并急性淋巴細胞白血病、急性髓系白血病、淋巴瘤等其他血液系統惡性腫瘤者；②合并自身免疫性疾病者；③合并嚴重肝腎功能障礙者；④合并嚴重神經或精神疾病者；⑤妊娠期或哺乳期婦女。其中，男52例、女24例，年齡53～77（68.12 ± 7.65）歲；WHO分型：病態造血（SLD）13例，多系病態造血（MLD）14例，難治性貧血（RA）18例，原始細胞增多（EB）21例，不能分類（U）10例；國際預后評分系統（IPSS-R）分級［6］：低危20例，中危23例，高危17例，極高危16例。同期選擇在如皋市人民醫院體檢健康的志愿者32例（對照組），男19例、女13例，年齡50～78（67.95 ± 7.02）歲。兩組性別、年齡具有可比性。本研究經如皋市人民醫院倫理委員會批準（審批編號：KY20200161），所有研究對象或其家屬知情同意并簽署書面知情同意書。

1.2 血清miR-125b-5p、miR-17-5p檢測 觀察組入組次日，對照組體檢當日，采集空腹外周靜脈血3 mL，注入干燥試管中，待血液凝固后，3 204 × g離心5 min，留取上層血液，－80 ℃保存待測。采用TRIzol法提取血清總RNA，Multiskan SkyHigh微孔板分光光度計鑒定，OD260/OD280為1.8～2.0。按PrimeScript RT試劑盒說明將總RNA逆轉錄為cDNA。逆轉錄條件：42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min。以cDNA為模板，按SYBR Premix Ex Taq試劑盒說明進行PCR擴增。所有引物序列設計由美國Thermo Fisher Scientific公司完成。引物序列：miR-125b-5p上游引物5′-TCCCTGAGACCCTAACTTGTGA-3′、下游引物5′-AGTCTCAGGGTCCGAGGTATTC-3′；miR-17-5p上游引物5′-TCTAGATCCCGAGGACTG-3′、下游引物5′-ATCGTGACCTGAACC-3′；β-actin上游引物5′-TGTCCACCTTCCAGCAGATGT-3′、下游引物5′-GCTCAGTAACAGTCCGCCTAGA-3′。PCR反應體系共50 μL：cDNA模板2 μL，上下游引物各1 μL，Premix Ex Taq DNA聚合酶25 μL，RNase-Free ddH2O 21 μL；反應條件：95 ℃ 2 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 30 s共40個循環。擴增反應結束，獲取循環閾值（CT）。以β-actin為內參，采用2－ΔΔCT法計算目的基因相對表達量。

1.3 隨訪 MDS患者均接受化療（小劑量阿糖胞苷基礎上聯合阿克拉霉素或高三尖杉酯堿或去甲氧柔紅霉素）、支持對癥治療（輸血、血小板，粒細胞集落刺激因子升白細胞治療）等，完成足夠療程化療且無嚴重并發癥，病情平穩后出院。出院后通過電話和門診復查形式定期隨訪3年，第1、2年每3個月隨訪一次，第3年每6個月隨訪一次。隨訪截至2023年1月。統計3年無進展生存率和總體生存率。無進展生存期定義為從開始治療至觀察到疾病進展或因任何原因死亡的時間，總體生存期定義為從開始治療至因任何原因死亡的時間。

1.4 統計學方法 采用SPSS25.0統計軟件。符合正態分布的計量資料以表示，結果比較采用單因素方差分析或獨立樣本t檢驗。計數資料比較采用χ2檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清miR-125b-5p、miR-17-5p表達比較 觀察組血清miR-125b-5p、miR-17-5p相對表達量分別為1.02 ± 0.24、3.65 ± 1.24，對照組分別為2.97 ±0.75、1.52 ± 0.33。觀察組血清miR-125b-5p相對表達量低于對照組，血清miR-17-5p相對表達量高于對照組（t分別為20.425、9.552，P均<0.05）。

2.2 血清miR-125b-5p、miR-17-5p表達與MDS患者臨床特征的關系 見表1。

表1 血清miR-125b-5p、miR-17-5p表達與MDS患者臨床特征的關系（）

表1 血清miR-125b-5p、miR-17-5p表達與MDS患者臨床特征的關系（）

臨床特征性別男女年齡≥65歲<65歲WHO分型SLD MLD RA EB U IPSS-R分級低危+中危高危+極高危n miR-125b-5p相對表達量P miR-17-5p相對表達量P F/t 1.0860.281 F/t 0.3260.746 52 24 1.00 ± 0.23 1.06 ± 0.21 3.69 ± 1.05 3.60 ± 1.26 1.3250.1890.4060.686 42 34 0.99 ± 0.25 1.06 ± 0.20 3.70 ± 1.09 3.59 ± 1.27 0.0540.9940.0040.996 13 14 18 21 10 1.02 ± 0.21 1.03 ± 0.22 1.01 ± 0.20 1.03 ± 0.19 1.00 ± 0.23 3.67 ± 1.21 3.66 ± 1.20 3.62 ± 1.20 3.65 ± 1.19 3.66 ± 1.18 13.862<0.0514.493<0.05 43 33 1.17 ± 0.10 0.82 ± 0.12 3.02 ± 0.53 4.43 ± 0.20

2.3 血清miR-125b-5p、miR-17-5p表達與MDS患者預后的關系 隨訪截至2023年1月，失訪3例，死亡33例，復發16例。以血清miR-125b-5p、miR-17-5p表達的均數為臨界值，將MDS患者分為血清miR-125b-5p低表達者（<1.02，39例）與血清miR-125b-5p高表達者（≥1.02，34例）、血清miR-17-5p低表達者（<3.65，35例）與血清miR-17-5p高表達者（≥3.65，38例）。血清miR-125b-5p低表達者與血清miR-125b-5p高表達者3年總體生存率分別為41.03%（16/39）、70.59%（24/34），3年無進展生存率分別為17.95%（7/39）、50.00%（17/34）；血清miR-17-5p低表達者與血清miR-17-5p高表達者3年總體生存率分別為62.86%（22/35）、47.37%（18/38），3年無進展生存率分別為42.86%（15/35）、23.68%（9/38）。血清miR-125b-5p低表達者3年總體生存率和3年無進展生存率均低于血清miR-125b-5p高表達者（Log-rankχ2分別為5.815、12.030，P均<0.05），血清miR-17-5p低表達者3年總體生存率和3年無進展生存率均高于血清miR-17-5p高表達者（Log-rankχ2分別為4.557、6.237，P均<0.05）。

3 討論

作為一種抑癌基因，miR-125b-5p在惡性腫瘤的發生、發展和治療耐藥中發揮重要作用。在胰腺癌中，miR-125b-5p可通過抑制己糖激酶2、丙酮酸激酶肌肉同工酶2表達，阻止有氧糖酵解，降低葡萄糖發酵速率，進而抑制胰腺癌細胞增殖［8］。miR-125b-5p過表達可通過靶向黏附連接蛋白KIAA1522抑制乳腺癌細胞的增殖、侵襲和遷移［9］。miR-125b-5p還可靶向己糖激酶2抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信號通路，繼而抑制膀胱癌細胞的增殖和侵襲［10］。miR-125b-5p與血液系統惡性腫瘤也存在一定關聯。有研究報道，miR-125b-5p在白血病細胞中表達下調，上調miR-125b-5p表達可通過靶向抑制其下游靶標人髓細胞白血病基因1，抑制白血病細胞增殖并促進其凋亡［11］。本研究結果發現，MDS組血清miR-125b-5p相對表達量低于對照組；IPSS-R分級高危+極高危MDS患者血清miR-125b-5p表達低于IPSS-R分級低危+中危MDS患者；血清miR-125b-5p低表達者3年總體生存率和3年無進展生存率均低于血清miR-125b-5p高表達者。提示miR-125b-5p能夠參與MDS的發生、發展。目前，miR-125b-5p參與MDS的分子機制尚不清楚。有研究認為，Janus激活激酶2（JAK2）和信號傳導與轉錄激活因子3（STAT3）信號通路激活促使細胞周期G0/G1期進展，下調抗凋亡基因的表達，增強MDS細胞的增殖活性［12］，而STAT3的3′-UTR區域存在miR-125b-5p的結合位點［13］，miR-125b-5p可通過抑制JAK2/STAT3信號通路，從而抑制MDS的發生、發展。因此，miR-125b-5p表達缺失可能促進MDS的發生、發展并導致患者預后不良。

miR-17-5p可通過靶向抑制基質金屬蛋白酶組織抑制劑2促使基質金屬蛋白酶表達，進而促進胃癌細胞的增殖、侵襲和遷移［14］。miR-17-5p還可靶向抑制CADM2表達激活促腫瘤表型，從而促進結腸癌細胞的增殖、侵襲和遷移［15］。近年發現，miR-17-5p還能參與血液系統腫瘤的發生、發展。有研究報道，miR-17-5p可通過調控BCL11B過表達誘導急性淋巴細胞白血病細胞增殖并抑制其凋亡［16］。本研究結果發現，MDS組血清miR-17-5p相對表達量高于對照組；IPSS-R分級高危+極高危MDS患者血清miR-17-5p表達高于IPSS-R分級低危+中危MDS患者；血清miR-17-5p低表達者3年總體生存率和3年無進展生存率均高于血清miR-17-5p高表達者。提示miR-17-5p能夠參與MDS的發生、發展。究其原因，組蛋白賴氨酸甲基轉移酶SETD2表達缺失可激活絲裂原活化蛋白激酶信號通路，促使S100鈣結合蛋白A9表達，誘導MDS向急性髓系白血病進展，從而導致MDS患者預后不良［17］。SETD2是miR-17-5p的靶基因，miR-17-5p可負向調控SETD2表達，促使MDS細胞增殖并抑制其凋亡［18］，最終導致MDS惡性進展和預后不良。

綜上所述，MDS患者血清miR-125b-5p表達下調、血清miR-17-5p表達上調，二者表達變化與IPSS-R分級高危、極高危以及預后不良有關。