CENPK、IFI16表達與中晚期宮頸癌患者預后的關系

吳凱華，葛麗麗，熊愛為，陳姝，余敏敏

1 南京市第二醫院（南京中醫藥大學附屬南京醫院）婦科，南京210003；2 南京市婦幼保健院婦瘤科

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤，全球每年新發病例達60.4萬例，死亡約34.2萬例［1］。早期宮頸癌患者無明顯癥狀，難以早期發現，明確診斷時已為中晚期階段。雖然目前中晚期宮頸癌以同步放化療為主，但由于腫瘤異質性，不同患者臨床預后差異較大［2］。著絲粒蛋白K（CENPK）屬于著絲粒蛋白家族成員，在細胞有絲分裂過程中募集到著絲粒，參與著絲粒的組裝，調控有絲分裂過程中染色體分離［3］。近年發現，肝癌［4］、胃癌［5］等惡性腫瘤中CENPK表達上調能促進腫瘤惡性增殖及轉移，是新的腫瘤促進因子。干擾素誘導核蛋白16（IFI16）是一種干擾素誘導蛋白，廣泛參與細胞增殖、凋亡及激動機體固有免疫等生物學過程［6］。近年發現，IFI16能誘導腫瘤細胞中成纖維細胞生長因子1的表達，促進腫瘤細胞的惡性增殖及轉移，導致腫瘤進展［7］。目前，關于CENPK、IFI16在中晚期宮頸癌組織表達與患者預后的關系研究較少。2015年1月—2018年1月，我們利用免疫組化法檢測中晚期宮頸癌組織中CENPK、IFI16表達，探討與患者預后的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1月—2018年1月南京市第二醫院（南京中醫藥大學附屬南京醫院）診治的106例中晚期宮頸癌患者，取其宮頸癌組織，均接受同步放化療為主的綜合治療方案。納入標準：①經病理檢查明確診斷為宮頸癌；②參考2009年國際婦產聯盟（FIGO）分期為ⅡB~Ⅳ期；③初次診治，既往無抗癌治療病史；④一般狀況良好，生存質量卡氏評分≥90分；⑤患者和家屬對本研究知情并簽署同意書。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并急性感染性疾病、自身免疫性疾病及精神障礙性疾病；③同步放化療期間死亡。患者年齡34～78（63.47 ± 5.27）歲；FIGO分期：ⅡB期36例，ⅢA～ⅢB期50例，Ⅳ期20例；病理類型：鱗癌64例，腺癌28例，腺鱗癌14例；腫瘤最大徑：<4 cm 30例，≥4 cm 76例。分化程度：低、未分化49例，高、中分化57例；合并淋巴結轉移61例。所有患者同步放化療結束后定期門診或電話復查，2年內每3個月復查1次，第2～5年每半年隨訪1次。隨訪內容包括患者生存狀態及血清腫瘤標志物、常規婦科檢查、超聲、CT等。隨訪時間截至2023年2月1日。以同期診治的40例因子宮脫垂或子宮肌瘤行全子宮切除的正常宮頸組織為對照，患者年齡32～77（63.11 ± 4.85）歲。宮頸癌組和對照組年齡比較差異無統計學意義（P>0.05）。本研究經醫院倫理委員會批準通過（2015-LS-ky025）。

1.2 宮頸癌組織中CENPK、IFI16表達檢測 采用免疫組化法檢測組織中CENPK、IFI16表達。留取宮頸癌患者活檢術中獲取的部分宮頸癌組織及對照組正常宮頸組織。常規組織固定包埋，切片后二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，檸檬酸緩沖液抗原熱修復，100 ℃水浴10 min，3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶15 min，3%羊血清室溫封閉2 h。CENPK、IFI16一抗4 ℃過夜（購自Abcam，貨號ab236739、ab169788，稀釋比1∶200）。實驗步驟按試劑盒說明書進行，試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司，貨號PV6000。鏡下觀察進行半定量染色評分，染色強度分為三個等級，無染色0分，淺黃色為1分，棕褐色為2分。染色面積評分三個等級，面積≤25%0分，1分面積為>25%～50%，面積≥50%2分。將染色強度和染色面積評分相乘為免疫組化染色評分，<2為陰性，≥2為陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS22.0統計軟件。計數資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。繪制Kaplan-Meier曲線，采用Log-Rank檢驗分析不同CENPK、IFI16表達患者生存差異。單因素和多因素Cox比例風險回歸模型分析影響中晚期宮頸癌患者預后的因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 宮頸癌、正常宮頸組織中CENPK、IFI16表達比較 宮頸癌組織中CENPK蛋白棕黃色陽性染色位于細胞質和細胞膜，IFI16蛋白棕黃色陽性染色位于細胞核。見圖1。宮頸癌組織中CENPK、IFI16蛋白陽性表達率分別為70.75%（75/106）、67.92%（72/106），高于正常宮頸組織的10.00%（4/40）、15.00%（6/40），差異有統計學意義（χ2分別為43.170，32.691，P均<0.05）。

圖1 宮頸癌組織及正常宮頸組織中CENPK、IFI16表達（免疫組化，×200）

2.2 CENPK、IFI16表達與中晚期宮頸癌患者臨床病理特征的關系 不同腫瘤最大徑、FIGO分期及淋巴結轉移中晚期宮頸癌患者癌組織中CENPK、IFI16表達比較差異有統計學意義（P均<0.05）。見表1。

表1 CENPK、IFI16表達與中晚期宮頸癌患者臨床病理特征的關系［例（%）］

2.3 CENPK、IFI16表達對中晚期宮頸癌患者生存預后的影響 106例中晚期宮頸癌患者隨訪過程中死亡68例，5年總體生存率為35.85%（38/106）。CENPK陽性者和陰性者5年累計生存率分別為26.67%（20/75）、58.06%（18/31）。CENPK陽性者5年累積生存率明顯低于CENPK陰性者，差異有統計學意義（Log-Rankχ2=13.471，P<0.05）。IFI16陽性者和陰性者5年累計生存率分別為25.00%（18/72）、60.61%（20/33）。IFI16陽性者5年累積生存率明顯低于CENPK陰性者，差異有統計學意義（Log-Rankχ2=22.721，P<0.05）。見圖2。

圖2 CENPK、IFI16表達對中晚期宮頸癌患者生存預后的影響

2.4 影響中晚期宮頸癌患者預后的多因素Cox回歸分析結果 106例中晚期宮頸癌患者隨訪5年，生存68例，為預后良好；死亡38例，為預后不良。以預后為因變量（1=死亡，0=存活），以年齡、分化程度、病理類型、腫瘤最大徑、淋巴結轉移、FIGO分期、CENPK、IFI16為自變量進行多因素Cox回歸分析。結果顯示，FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移、CENPK陽性、IFI16陽性是影響中晚期宮頸癌患者不良預后的獨立危險因素（P均<0.05）。見表2。

表2 多因素COX比例風險模型分析影響中晚期宮頸癌患者預后的因素

3 討論

CENPK蛋白相對分子質量為31 kD，參與構成著絲粒，在真核生物染色體分離過程中發揮關鍵作用。近年研究表明，CENPK的功能失調與膀胱癌、肝細胞肝癌等惡性腫瘤的進展有關，是潛在的預后相關腫瘤標志物［8］。本研究癌組織中CENPK表達明顯升高，與腫瘤最大徑、FIGO分期及淋巴結轉移有關，提示CENPK促進中晚期宮頸癌的進展。有研究報道，甲基化轉移酶ZC3H13能促進CENPK mRNA N6甲基腺苷修飾，增強CENPK mRNA的穩定性，在轉錄水平上調CENPK表達［9］。此外，腫瘤中CENPK能磷酸化激活磷脂酰肌醇3-激酶，促進下游AKT通路的激活，導致腫瘤過度增殖，而敲除CENPK表達后導致腫瘤細胞G1期阻滯，細胞凋亡增加［10］。因此，中晚期宮頸癌中CENPK表達上調作為一種促癌基因，促進腫瘤進展，是潛在預測預后的標志物。本研究證實，CENPK陽性中晚期宮頸癌患者預后較差。其原因一方面是CENPK陽性表達的中晚期宮頸癌惡性程度高，腫瘤細胞增殖及侵襲能力較強，導致腫瘤容易發生復發，導致患者預后不良［11］。另一方面，CENPK表達上調能與X射線修復交叉互補蛋白5相互作用，促進DNA損傷修復途徑的激活，增強腫瘤細胞對放療的抵抗性［5］。此外，CENPK表達升高能與干性轉錄因子SOX6直接結合，促進β-連環蛋白的表達和核轉位，導致Wnt/β-連環蛋白信號傳導的激活，促進p53的泛素化，增強腫瘤細胞干性及對順鉑或卡鉑化療藥物的耐藥性［9］。因此，CENPK可作為評估中晚期宮頸癌患者預后的相關腫瘤標志物。

IFI16是PYHIN家族成員，結構上包括一個pyrin結構域和兩個參與轉錄調控的DNA結合HIN結構域。功能上，IFI16作為一種轉錄因子，是病毒免疫識別的關鍵分子，能啟動炎癥反應，在病毒感染防御、系統性紅斑狼瘡等疾病中發揮重要作用［12-13］。本研究中，中晚期宮頸癌組織中IFI16表達升高，與腫瘤最大徑、FIGO分期及淋巴結轉移有關，提示IFI16參與促進中晚期宮頸癌的發生發展。有學者報道，HPV DNA編碼產生的E7蛋白能與宮頸癌細胞中IFI16相互作用，增強IFI16蛋白穩定性，抑制腫瘤細胞焦亡的發生，促進腫瘤免疫逃逸［14］。此外，體外細胞實驗證實，IFI16能激活干擾素基因刺激蛋白-TANK結合酶1通路，激活下游核因子κB，核因子κB與程序性死亡分子配體1啟動子結合，促進程序性死亡分子配體1表達，導致腫瘤免疫逃逸，促進腫瘤進展［15］。本研究中，IFI16陽性表達的中晚期宮頸癌患者預后較差。其原因可能是IFI16表達上調增強腫瘤細胞化療耐藥性及放療抵抗的形成。研究表明，IFI16在阿霉素和紫杉醇耐藥細胞系中的表達明顯上調，其在耐藥細胞系中的表達上調促進腫瘤復發和轉移，導致患者不良預后［16］。此外，尚有學者在膠質瘤中發現，著絲粒蛋白ARPC1B能抑制TRIM21介導的IFI16降解，導致IFI16蛋白表達升高，IFI16激活核因子κB信號通路，從而促進間質性表型維持和放療耐藥性的形成［17］。因此，IFI16可作為中晚期宮頸癌患者預后評估腫瘤標志物。

綜上所述，中晚期宮頸癌組織中CENPK、IFI16表達升高，二者表達與腫瘤最大徑、FIGO分期、淋巴結轉移有關，共同參與促進中晚期宮頸癌的腫瘤進展。癌組織中CENPK陽性表達、IFI16陽性表達是影響中晚期宮頸癌患者預后的獨立危險因素，有助于輔助臨床醫生評估中晚期宮頸癌患者的生存預后。但本研究樣本量較小，有待今后擴大樣本量進一步證實該結論。