轉(zhuǎn)染IGF2BP3基因siRNA和真核表達(dá)質(zhì)粒的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞侵襲凋亡變化觀察

朱凱，王志茹，高婷婷，呂志寶

1 上海市兒童醫(yī)院 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院普外科，上海 200062；2 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)附屬第一醫(yī)院（安徽省立醫(yī)院）兒外科

神經(jīng)母細(xì)胞瘤（NB）是一種起源于神經(jīng)外胚層神經(jīng)嵴交感神經(jīng)細(xì)胞的胚胎性腫瘤，是兒童最常見的實體性顱外惡性腫瘤，也是嬰兒期最常見的腫瘤［1］。大多數(shù)患者（90%）在5歲前確診，診斷時的中位年齡為19個月［2］。目前臨床上依據(jù)兒童腫瘤協(xié)作組（COG）分級系統(tǒng)將NB 患者分為低危、中危、高危3組［3］，針對不同亞組患者建議采取不同強(qiáng)度的治療模式。NB具有極強(qiáng)的異質(zhì)性，不同亞組患者之間治愈的可能性差異很大。低中危組患者的生存率大于70%，高危組患者盡管采用多種治療模式包括強(qiáng)劑量的化療和免疫治療，5 年生存率依然停留在25%～50%［4-5］。故探討新的NB 治療靶點，并對患者及早進(jìn)行針對性干預(yù)，有助于改善NB患者的預(yù)后。

胰島素樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白家族（IGF2BPs）是一類包含兩個N 端RNA 識別基序（RRM）和四個C端信使核糖核蛋白K同源性結(jié)構(gòu)域的RNA 結(jié)合蛋白［6］。目前發(fā)現(xiàn)IGFBPs 蛋白在很多部位的腫瘤組織中存在高表達(dá)［7-9］；胰島素樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3（IGF2BP3）可通過結(jié)合編碼區(qū)不穩(wěn)定性決定因子（CRD）防止MYC mRNA 降解，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移［10］。目前仍無相關(guān)研究報道IGF2BP3 在NB 中的作用。2022 年1 月—2023 年3 月，我們觀察了轉(zhuǎn)染IGF2BP3 基因siRNA和真核表達(dá)質(zhì)粒的神經(jīng)母細(xì)胞瘤（NB）細(xì)胞侵襲凋亡變化，以探討IGF2BP3基因?qū)B細(xì)胞侵襲和凋亡的影響，為IGF2BP3作為阻斷NB進(jìn)展的潛在靶點提供研究資料。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、試劑和儀器 NB 細(xì)胞株SK-N-BE（2）、IMR-32、BE（2）-C、SH-SY-5Y 均購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心；胰酶、RPMI1640培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國HyClone 公司；針對IGF2BP3 的小干擾RNA（siRNA）及對照（SiNC），IGF2BP3 真核表達(dá)質(zhì)粒（IGF2BP3）及對照（Vector）均購自上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司；Prime-Script? RT Master 和MixRNAiso Plus 購自日本TAKARA 公司；HRP 標(biāo)記山羊抗兔IgG、AnnexinV-FITC凋亡檢測試劑盒、蛋白提取試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)公司；PVDF 膜和細(xì)胞裂解液（Cell Lysis Solution）購自美國Millipore公司；ECL發(fā)光液購自美國Thermo 公司；IGF2BP3、E-cadherin、N-cadherin、vimentin 和GAPDH 抗體購自英國Abcam 公司；Matrigel 基質(zhì)膠購自美國BD 公司；Real Time PCR 儀購自美國Applied Biosystems 公司；熒光顯微鏡購自日本奧林巴斯公司；實驗所用引物委托上海生工生物工程公司合成。

1.2 4 種NB 細(xì)胞株中IGF2BP3 mRNA 及蛋白的檢測及實驗細(xì)胞選擇 SK-N-BE（2）、IMR-32、BE（2）-C、SH-SY-5Y細(xì)胞均使用含有10% FBS及1×105U/L青霉素 + 100 mg/L 鏈霉素的RPMI-1640 培養(yǎng)基，在37 ℃含5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。所有細(xì)胞系經(jīng)STR 譜鑒定，支原體試驗陰性。采用qRT-PCR 法檢測IGF2BP3 mRNA。PCR 反應(yīng)在ABI Step One Plus 系統(tǒng)上進(jìn)行，反應(yīng)條件：預(yù)變性階段 95 ℃持續(xù)10 min；擴(kuò)增階段95 ℃持續(xù)10 s、60 ℃持續(xù)15 s、72 ℃持續(xù)15 s，共經(jīng)歷45 個周期循環(huán)；溶解曲線階段95 ℃持續(xù)10 s、65 ℃持續(xù)60 s 、97 ℃持續(xù)1 s。以GAPDH 為內(nèi)參，2-ΔΔCT法計算IGF2BP3 mRNA在各組細(xì)胞中的相對表達(dá)量。擴(kuò)增使用的引物分別為：IGF2BP3： forward：5'-ATCGCCAATCAGGAATCCTTTG-3，reverse：5'-CACAACACGTTCGTCCTCCA-3'；GAPDH： forward： 5'-ACCTGACCTGCCGTCTAGAA-3'，reverse： 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'。結(jié)果顯示，SK-N-BE（2）、IMR-32、BE（2）-C、SH-SY-5Y 細(xì)胞中IGF2BP3 mRNA 的相對表達(dá)量分別是8.35 ± 0.87、1.37 ± 0.06、2.73 ± 0.48、4.01 ± 0.36，4 株細(xì)胞的IGF2BP3 mRNA 相對表達(dá)量比較，P<0.01。SK-NBE（2）細(xì)胞IGF2BP3 mRNA 相對表達(dá)量最高，IMR-32細(xì)胞IGF2BP3 mRNA相對表達(dá)量最低。

采用Western blotting 法檢測IGF2BP3 蛋白。根據(jù)目的蛋白和內(nèi)參蛋白條帶的顯色結(jié)果，判斷IGF2BP3 蛋白在NB 細(xì)胞中的表達(dá)水平。結(jié)果顯示SK-N-BE（2）、IMR-32、 BE（2）-C、SH-SY-5Y 細(xì) 胞IGF2BP3 蛋白表達(dá)水平分別為1.24 ± 0.52、0.29 ±0.14、0.75 ± 0.26、0.68 ± 0.27，IGF2BP3 蛋白表達(dá)水平在SK-N-BE（2）細(xì)胞中最高，在IMR-32 細(xì)胞中最低。

采用Transwell實驗觀察4種NB 細(xì)胞侵襲情況。收集上述4 種細(xì)胞，用胰酶消化后用不含血清的培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞，按照10 000 個/孔接種至覆蓋Matrigel 基質(zhì)膠的24 孔的Transwell 小室膜上方，在下方加入含10% FBS的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)各組細(xì)胞48 h；接下來用結(jié)晶紫染液固定NB 細(xì)胞，待自然晾干后在200×倒置顯微鏡下觀察染色細(xì)胞；隨機(jī)選取至少3 個視野，拍照，計數(shù)，取均值。結(jié)果顯示SK-N-BE（2）、IMR-32、BE（2）-C、SH-SY-5Y 細(xì)胞的穿膜細(xì)胞數(shù)分別是（200 ± 15）、（27 ± 3）、（48 ± 5）、（89 ± 8）個/HP，4 組NB 細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），SK-N-BE（2）細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)最多、IMR-32細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)最少。

基于上述實驗結(jié)果，選擇后續(xù)實驗細(xì)胞為SKN-BE（2）細(xì)胞、IMR-32細(xì)胞。

1.3 實驗細(xì)胞分組及干擾和過表達(dá)IGF2BP3 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染 選擇SK-N-BE（2）細(xì)胞轉(zhuǎn)染針對IGF2BP3基因的小干擾RNA（siRNA）（SK-siIGF2BP3 組），并設(shè)立細(xì)胞對照組（SK-Control 組，只含有脂質(zhì)體）和siRNA 對照組（SK-siNC 組，轉(zhuǎn)染陰性對照序列）；選擇IMR-32 細(xì)胞轉(zhuǎn)染IGF2BP3 真核表達(dá)質(zhì)粒（IMRIGF2BP3組），并設(shè)立細(xì)胞對照組（IMR-Control組，只含有脂質(zhì)體）和空載體對照組（IMR-Vector 組，轉(zhuǎn)染空載體）。siRNA 和過表達(dá)IGF2BP3 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染參照脂質(zhì)體Lipofectamine 2000 說明書進(jìn)行。將1×106個NB 細(xì)胞接種至6 孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞匯合度達(dá)到70%～80%時，將脂質(zhì)體和siRNA 用不含血清和抗生素和RPMI1640 培養(yǎng)基稀釋，室溫條件下孵育5 min 后將上述兩者混合，反復(fù)吹吸數(shù)次，室溫靜置20 min。將混合液加入6 孔培養(yǎng)板孔中，繼續(xù)培養(yǎng)6 h，棄去培養(yǎng)基，加入新鮮的完全培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)。

1.4 實驗細(xì)胞中IGF2BP3 mRNA 及蛋白檢測 采用qRT-PCR法檢測各組IGF2BP3 mRNA。采用免疫熒光法檢測各組IGF2BP3蛋白。

1.5 實驗細(xì)胞侵襲能力觀察 采用Transwell 法檢測。

1.6 實驗細(xì)胞凋亡率的測算 采用流式細(xì)胞術(shù)。收集上述各組細(xì)胞，細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h 后用0.25%胰蛋白酶消化，1 000×g 離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌3次，1 000×g離心5 min，棄上清，在離心管中收集1～5×105個NB 細(xì)胞。加入100 μL 的1×Binding Buffer 重懸各組細(xì)胞后加入5 μL 的 Annexin V-FITC 和10 μL 的碘化丙啶（PI）染色液，輕輕混勻，在室溫（20～25 ℃）條件下與各分組的NB 細(xì)胞避光孵育15 min；隨后將1.5 mL 的離心管置于冰浴中，再加入400 μL預(yù)冷的PBS，所有NB細(xì)胞在1 h內(nèi)上機(jī)檢測，F(xiàn)lowJo 7.6.5 軟件用于分析檢測結(jié)果。每組NB 細(xì)胞進(jìn)行3 復(fù)孔檢測，橫坐標(biāo)為FITC，縱坐標(biāo)為PI，繪制散點圖，分析凋亡細(xì)胞的百分比。

1.7 各組IGF2BP3 及侵襲相關(guān)蛋白E-cadherin、Ncadherin、Vimentin 的 檢 測 采用Western blotting法。最后根據(jù)目的蛋白和內(nèi)參蛋白條帶的顯色結(jié)果，判斷IGF2BP3、E-cadherin、N-cadherin 和Vimentin蛋白在NB細(xì)胞中的表達(dá)水平。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示，比較采 one-way ANOVA 檢驗，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組細(xì)胞IGF2BP3 mRNA 及蛋白相對表達(dá)量比較 SK-N-BE（2）細(xì)胞和IMR-32 細(xì)胞中IGF2BP3的 表 達(dá) 見 圖1。在SK-N-BE（2）細(xì) 胞 中，SK-si-IGF2BP3 組、SK-siNC 組、SK-Control 組 的IGF2BP 3 mRNA 相對表達(dá)量分別是0.24 ± 0.06、0.98 ±0.09、1 ± 0.16，三組比較，F(xiàn)=0.364，P<0.05；SK-si-IGF2BP3 組IGF2BP3 mRNA 相對表達(dá)量低于SKControl 組（t=20.37，P=0.018）和SK-siNC 組（t=18.11，P=0.003）。SK-siIGF2BP3 組、SK-siNC 組、SK-Control 組的IGF2BP3 蛋白相對表達(dá)量分別為1.02 ± 0.31、1.14 ± 0.28和0.37 ± 0.17，三組比較，F(xiàn)=7.59，P<0.05；SK-siIGF2BP3 組IGF2BP3 蛋白相對表達(dá)量低于SK-Control 組（t=3.18，P=0.033）和SK-siNC 組（t=4.07，P=0.015）。以上說明在SK-NBE（2）細(xì)胞中通過轉(zhuǎn)染siIGF2BP3，IGF2BP3 的敲減效果滿意。

圖1 SK-N-BE（2）細(xì)胞和IMR-32細(xì)胞中IGF2BP3的表達(dá)（200×，細(xì)胞免疫熒光法）

在IMR-32 細(xì)胞中，IMR-IGF2BP3 組、IMR-Vector 組、IMR-Control 組的IGF2BP3 mRNA 相對表達(dá)量分別為10.44 ± 1.26、1.09 ± 0.02、1.01 ± 0.16，三組比較，F(xiàn)=1.24，P<0.05；IMR-IGF2BP3 組mRNA 相對表達(dá)量高于IMR-Control 組（t=12.89，P=0.005）和IMR-Vector 組（t=12.90，P=0.006）。IMR-IGF2BP3組、IMR-Vector 組、IMR-Control 組的IGF2BP3 蛋白相 對表 達(dá)量 分 別 為0.24 ± 0.11、0.31 ± 0.13 和0.92 ± 0.36，三 組 比 較，F(xiàn)=7.94，P<0.05；IMRIGF2BP3組IGF2BP3蛋白相對表達(dá)量高于IMR-Vector 組、IMR-Control 組（t分別為3.13、2.76，P均<0.05）。以上說明在IMR-32細(xì)胞中轉(zhuǎn)染IGF2BP3質(zhì)粒后IGF2BP3的過表達(dá)效果滿意。

2.2 各組穿越Transwell 小室膜細(xì)胞數(shù)比較 SK-NBE（2）細(xì)胞和IMR-32細(xì)胞中三組穿膜細(xì)胞見圖2。在SK-N-BE（2）細(xì)胞中，SK-siIGF2BP3組、SK-siNC組、SKControl組的穿越Transwell 小室膜細(xì)胞數(shù)分別是（70 ±8）、（255 ± 16）、（247 ± 13）個/HP，SK-siIGF2BP3組細(xì)胞的穿越Transwell 小室膜細(xì)胞數(shù)低于SK-Control組（P=0.002）和SK-siNC組（P=0.005）。在IMR-32 細(xì)胞中，IMR-IGF2BP3 組、IMR-Vector 組、IMR-Control組穿越Transwell 小室膜細(xì)胞數(shù)分別是（71 ± 9）、（35 ±3）、（31 ± 4）個/HP，IMR-IGF2BP3組細(xì)胞的穿越Transwell 小室膜細(xì)胞數(shù)高于IMR-Control組（P=0.029）和IMR-Vector組（P=0.027）。

圖2 SK-N-BE（2）細(xì)胞和IMR-32細(xì)胞中三組穿膜細(xì)胞（200×，Transwell法）

2.3 各組細(xì)胞凋亡率比較 SK-N-BE（2）細(xì)胞中，SK-siIGF2BP3 組、SK-siNC 組、SK-Control 組細(xì)胞凋亡 率分別 為21.87% ± 0.92%、8.65% ± 1.04%、5.79% ± 0.33%，SK-siIGF2BP3 組細(xì)胞凋亡率高于SK-Control 組（P=0.001）和SK-siNC 組（P=0.006）。在IMR-32 細(xì)胞中，IMR-IGF2BP3 組、IMR-Vector 組、IMR-Control 組細(xì)胞凋亡率分別為5.65% ± 0.12%、6.74% ± 0.30%、7.72% ± 0.55%，IMR-IGF2BP3 組細(xì)胞凋亡率低于IMR-Control 組（P=0.03）和IMRVector組（P=0.024）。

2.4 各組E-cadherin、N-cadherin和Vimentin相對表達(dá)量比較 SK-N-BE（2）和IMR-32 細(xì)胞中3 組侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)電泳圖見圖3。SK-N-BE（2）細(xì)胞中，SK-siIGF2BP3 組N-cadherin、Vimentin、E-cadherin 蛋白相對表達(dá)量分別為0.16 ± 0.06、0.15 ± 0.07、0.76 ± 0.27；SK-siNC 組N-cadherin、Vimentin、Ecadherin 蛋 白 相 對 表 達(dá) 量 分 別 為0.71 ± 0.25、0.74 ± 0.26、0.11 ± 0.10；SK-Control 組N-cadherin、Vimentin、E-cadherin 蛋白相對表達(dá)量分別為0.68 ±0.15、0.83 ± 0.31、0.13 ± 0.08。 在IMR-32 細(xì)胞中，IMR-IGF2BP3 組N-cadherin、Vimentin、E-cadherin 蛋白相對表達(dá)量分別為0.86 ± 0.26、0.97 ±0.33、0.14 ± 0.05，IMR-Vector 組N-cadherin、Vimentin、E-cadherin 蛋白相對表達(dá)量分別為0.19 ± 0.08、0.17 ± 0.13、0.87 ± 0.31，IMR-Control 組N-cadherin、Vimentin、E-cadherin 蛋白相對表達(dá)量分別為0.21 ± 0.11、0.19 ± 0.12、0.89 ± 0.32。在SK-N-BE（2）細(xì)胞中，與SK-siNC組及SK-Control組比較，SK-si-IGF2BP3組中N-cadherin、Vimentin蛋白相對表達(dá)量下降，E-cadherin 蛋白相對表達(dá)量上升；在IMR-32 細(xì)胞 中，與IMR-Vector 組、IMR-Control 組 比 較，IMR-IGF2BP3組N-cadherin和Vimentin蛋白相對表達(dá)量升高，E-cadherin的蛋白相對表達(dá)量下降。

圖3 SK-N-BE（2）和IMR-32細(xì)胞中3組侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)電泳圖

3 討論

RNA m6A 修飾最終是由m6A 結(jié)合蛋白readers識別，并決定目標(biāo)RNA 分子的表達(dá)趨勢，影響著下游一系列的分子、信號通路及生物學(xué)功能［11］。IGF2BPs 作為RNA 結(jié)合蛋白（RBP）的一種，是由IGF2BP1-3 組成［12］。近年研究［13］顯示IGF2BP3 可以通過穩(wěn)定發(fā)生甲基化的癌基因mRNA，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。NB的重要特征是它的異質(zhì)性，其治療需要根據(jù)危險度分組制定整體的治療方案［14］。IGF2BP3在調(diào)控腫瘤細(xì)胞生物學(xué)表型方面起重要作用。為了闡明IGF2BP3在NB細(xì)胞中發(fā)揮的具體作用，我們著重研究了IGF2BP3 在體外實驗中所表現(xiàn)出的對NB細(xì)胞侵襲和凋亡的影響；另外我們還對IGF2BP3 與侵襲相關(guān)的分子標(biāo)記物的關(guān)系做了相關(guān)的探索。

首先我們分析了不同NB 細(xì)胞株中IGF2BP3 的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)在4 株NB 細(xì)胞中，IGF2BP3 mRNA和蛋白在SK-N-BE（2）細(xì)胞中相對表達(dá)量最高，在IMR-32 細(xì)胞的相對表達(dá)量最低。接著我們通過細(xì)胞侵襲實驗發(fā)現(xiàn)，IGF2BP3 表達(dá)水平高的SK-N-BE（2）細(xì)胞侵襲力最強(qiáng)，而IGF2BP3 表達(dá)水平低的IMR-32 細(xì)胞侵襲力較弱。以上的實驗結(jié)果提示，IGF2BP3 的IGF2BP3 表達(dá)水平與NB 細(xì)胞的侵襲能力相關(guān)，這與IGF2BP3 在某些成人腫瘤中的報道結(jié)果有相似的趨勢。 IGF2BP3 表達(dá)水平上調(diào)，提高了結(jié)腸癌的侵襲能力，是結(jié)腸癌進(jìn)展和預(yù)后不良的獨立預(yù)測因子［15］；IGF2BP3 促進(jìn)乳腺癌的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，與患者不良預(yù)后有關(guān)［16］。接下來，在GF2BP3 表達(dá)水平高且體外侵襲能力強(qiáng)的SK-N-BE（2）細(xì)胞中通過設(shè)計的siRNA 下調(diào)了IGF2BP3 的表達(dá)；通過IGF2BP3 蛋白的細(xì)胞免疫熒光實驗，我們非常直觀地看到轉(zhuǎn)染siIGF2BP3質(zhì)粒后，IGF2BP3蛋白表達(dá)下降了；相反，在侵襲能力較弱的IMR-32 細(xì)胞中轉(zhuǎn)染IGF2BP3的過表達(dá)質(zhì)粒，通過細(xì)胞免疫熒光實驗，我們看到IGF2BP3 蛋白表達(dá)提高了，說明干擾實驗成功。接著，我們通過Transwell 實驗和流式細(xì)胞術(shù)證實，敲減IGF2BP3表達(dá)后的SK-N-BE（2）細(xì)胞體外侵襲能力減弱，凋亡加速；過表達(dá)IGF2BP3 的IMR-32細(xì)胞侵襲能力提高，凋亡水平降低。既往亦有文獻(xiàn)［17-18］報道，凋亡相關(guān)通路的關(guān)鍵分子受到IGF2BP3的調(diào)控，從而能夠改變細(xì)胞凋亡的進(jìn)程，影響腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的重要機(jī)制之一，使細(xì)胞獲得移動性，能夠向遠(yuǎn)處遷移擴(kuò)散［19］。它的特點是N-cadherin 上調(diào)和E-cadherin下調(diào)，具體的過程受到復(fù)雜的信號通路網(wǎng)絡(luò)和轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控［20］，NB同樣也具有遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移等惡性腫瘤的重要特點。最后，我們通過Western blotting 實驗證實，敲減IGF2BP3 表達(dá)后的SK-N-BE（2）細(xì)胞，侵襲相關(guān)的分子標(biāo)記物N-cadherin和Vimentin蛋白相對表達(dá)量降低，E-cadherin 蛋白相對表達(dá)量增加；相反，在IMR-32 細(xì)胞中通過增加IGF2BP3 的表達(dá)，侵襲相關(guān)的分子標(biāo)記物N-cadherin和Vimentin蛋白的相對表達(dá)量升高，E-cadherin 蛋白的相對表達(dá)量降低；以上實驗結(jié)果進(jìn)一步證明IGF2BP3在NB細(xì)胞的侵襲過程中發(fā)揮著重要作用。

MYCN 作為MYC 癌基因家族的成員，控制多種細(xì)胞生物學(xué)過程，在NB 的分化、增殖、存活、自我更新、代謝、轉(zhuǎn)移和血管生成等過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用［21］。大約25%的NB 患者會出現(xiàn)來自2p24的MYCN 癌基因擴(kuò)增，它是一種公認(rèn)的腫瘤侵襲標(biāo)記物［22-23］。先前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在MYC編碼區(qū)的3'端存在一個長度約250個核苷酸的順式作用元件，稱為編碼區(qū)不穩(wěn)定決定簇（CRD），它能夠被IGF2BPs識別并結(jié)合，并提高M(jìn)YC mRNA的穩(wěn)定性，維持腫瘤的高侵襲力［24］。我們推測，IGF2BP3可能是通過類似的識別并結(jié)合機(jī)制，促進(jìn)NB細(xì)胞的侵襲。

總之，我們的研究首次報道了IGF2BP3 可以促進(jìn)NB 細(xì)胞侵襲、抑制細(xì)胞凋亡， IGF2BP3 在NB 中發(fā)揮著癌基因的作用。進(jìn)一步研究IGF2BP3在維持NB細(xì)胞惡性生物學(xué)表型中的作用機(jī)制，可能為高危NB的診斷和治療提供新的潛在靶點。