類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IL-35、MMP-3、TIMP-1水平變化與免疫功能的關(guān)系研究

楊瑜 吳潔

（新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科；2.風(fēng)濕免疫科 新鄉(xiāng) 453700）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是臨床常見(jiàn)的自身免疫性疾病，晚 期可侵犯多個(gè)系統(tǒng)，有較高的致殘率及死亡率[1]，早診斷、優(yōu)化治療是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵。類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor, RF）、抗環(huán)瓜氨酸肽（anti-cyclic citrullinated peptide, anti-CCP）抗體是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的主要抗體，但存在假陽(yáng)性及假陰性，特異性相差較大[2]。因該病呈持續(xù)的炎癥反應(yīng)，T 細(xì)胞浸潤(rùn)滑膜為主要病理改變，探討免疫炎癥反應(yīng)成為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的主要研究方向。白介素-35（interleukin-35, IL-35）是一種新型的抑制性細(xì)胞因子，在調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞調(diào)控免疫反應(yīng)以及炎癥進(jìn)展中占據(jù)著重要作用[3]。基質(zhì)金屬蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3, MMP-3）是一種可破壞膠原及降解關(guān)節(jié)軟骨的蛋白酶，在骨破壞過(guò)程中發(fā)揮重要作用；組織金屬蛋白酶抑制劑-1（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1, TIMP-1）是MMPs 的主要生理抑制劑，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)細(xì)胞存活及凋亡等作用[4]。本研究分析類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者IL-35、MMP-3、TIMP-1水平，并探討與免疫功能的相關(guān)性，旨在探尋可有效診斷疾病的指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

將2020 年1 月—2022 年10 月我院診治的80 例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者納入觀察組，其中男27 例，女53 例；年齡35 ～75 歲，平均（62.73±4.15）歲；病程6 個(gè)月～10年，平均（4.82±1.08）年；處于疾病活動(dòng)期32 例，穩(wěn)定期48 例。另將80 例健康志愿者納入對(duì)照組，其中男30 例，女50 例；年齡35 ～78 歲，平均（63.10±4.27）歲。兩組一般資料對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組患者符合類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②對(duì)照組身體狀況良好，無(wú)關(guān)節(jié)炎等病癥。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴強(qiáng)直性脊柱炎、骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)等患者；②伴惡性腫瘤、心腦血管疾病；③凝血障礙、自身免疫缺陷者；④并發(fā)哮喘、呼吸功能不全、慢性感染者；⑤近期服用影響實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)的藥物者。

1.2 方法

兩組受檢者均在入院當(dāng)天晨起采集空腹靜脈血5 mL，對(duì)血液樣本離心處理10 min，轉(zhuǎn)速3 000 r/min。采集離心后的上清液，置于-80 ℃冰箱內(nèi)待檢。采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平，相關(guān)試劑盒由深圳晶美生物技術(shù)有限公司提供，在450 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算相關(guān)指標(biāo)濃度。

將保存的上清液標(biāo)本取出后采用免疫發(fā)光法測(cè)定免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）A、IgG、IgM 及補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 等免疫功能水平，試劑盒由美國(guó)Epitope Diagnostics 公司生產(chǎn)。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較兩組受檢者的血清IL-35、MMP-3、TIMP-1水平以及IgA、IgG、IgM、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 水平。②比較類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎不同分期患者血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平以及IgA、IgG、IgM、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4水平，采用28 項(xiàng)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度（disease activity score 28, DAS28）[6]評(píng)分。緩解期：DAS28 評(píng)分＜2.8 分；活動(dòng)期：DAS28 評(píng)分≥2.8 分。③分析IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平與免疫功能指標(biāo)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，兩指標(biāo)之間的相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)性分析。P＜0.05提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較兩組受檢者血清相關(guān)指標(biāo)及免疫功能指標(biāo)

觀察組血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平均高于對(duì)照組，免疫功能指標(biāo)IgA、IgG、IgM 水平高于對(duì)照組，補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 水平低于對(duì)照組（表1，P＜0.05）。

表1 兩組血清相關(guān)指標(biāo)及免疫功能指標(biāo)（±s）

表1 兩組血清相關(guān)指標(biāo)及免疫功能指標(biāo)（±s）

組別 觀察組（n ＝80）對(duì)照組（n ＝80） t 值 P 值IL-35/(pg·mL-1)151.24±38.86 45.27±6.35 24.071 ＜0.001 MMP-3/(ng·mL-1)85.43±12.74 28.76±4.18 37.803 ＜0.001 TIMP-1/(μg·L-1)142.20±12.27 73.53±6.53 44.189 ＜0.001 IgA/(g·L-1) 3.68±0.48 2.08±0.21 27.315 ＜0.001 IgM/(g·L-1) 2.07±0.41 1.40±0.23 12.747 ＜0.001 IgG/(g·L-1) 17.53±2.16 12.73±1.08 17.778 ＜0.001 C3/(g·L-1) 1.05±0.11 1.40±0.15 16.83 ＜0.001 C4/(g·L-1) 0.12±0.08 0.38±0.09 19.312 ＜0.001

2.2 比較類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎不同分期患者血清相關(guān)指標(biāo)及免疫功能指標(biāo)

80 例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中，活動(dòng)期血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平和IgA、IgG、IgM 水平均高于穩(wěn)定期，補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 水平低于穩(wěn)定期（表2，P＜0.05）。

表2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎不同分期患者血清相關(guān)指標(biāo)及免疫功能指標(biāo)（±s）

表2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎不同分期患者血清相關(guān)指標(biāo)及免疫功能指標(biāo)（±s）

組別 活動(dòng)期（n ＝32）穩(wěn)定期（n ＝48） t 值 P 值IL-35/(pg·mL-1)185.73±41.08 132.06±36.72 6.106 ＜0.001 MMP-3/(ng·mL-1)98.83±15.10 68.73±10.27 10.622 ＜0.001 TIMP-1/(μg·L-1)168.73±21.43 129.63±18.20 8.765 ＜0.001 IgA/(g·L-1) 4.18±0.08 3.18±0.06 63.828 ＜0.001 IgM/(g·L-1) 2.31±0.07 1.98±0.05 24.604 ＜0.001 IgG/(g·L-1) 20.10±1.08 16.37±1.01 15.74 ＜0.001 C3/(g·L-1) 0.91±0.05 1.21±0.03 33.542 ＜0.001 C4/(g·L-1) 0.10±0.01 0.21±0.03 19.978 ＜0.001

2.3 相關(guān)性分析

采用Pearson 相關(guān)性分析，血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平與IgA、IgG、IgM 呈正相關(guān)性，與補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 呈負(fù)相關(guān)（表3，P＜0.05）。

表3 血清IL-35、MMP-3、TIMP-1水平與免疫功能指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一類特發(fā)性自身免疫性疾病及慢性炎癥性疾病，免疫功能紊亂、炎癥反應(yīng)異常在疾病發(fā)生、進(jìn)展中占據(jù)著重要作用。機(jī)體免疫功能紊亂，大量致病因子入侵，B 細(xì)胞活化，分泌大量抗體，抗體與抗原相結(jié)合后形成大量的免疫復(fù)合物積聚在關(guān)節(jié)，從而誘發(fā)一系列免疫反應(yīng)，致組織損傷、滑膜增生及骨關(guān)節(jié)炎[7]。其中B 淋巴細(xì)胞作為細(xì)胞共刺激分子，可促使機(jī)體產(chǎn)生自身抗原的抗體，導(dǎo)致大量Ig 升高，并激活、消耗補(bǔ)體系統(tǒng)。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組IgA、IgG、IgM 水平高于對(duì)照組，補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 水平低于對(duì)照組，活動(dòng)期IgA、IgG、IgM 水平高于穩(wěn)定期，補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 水平低于穩(wěn)定期（P＜0.05）。因此，免疫紊亂是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的主要病理特征，尋找與其密切相關(guān)的指標(biāo)，有助于進(jìn)行疾病診斷、療效評(píng)估及預(yù)后評(píng)判。

IL-35 是一種新型細(xì)胞分子，歸于IL-12 細(xì)胞因子家族，可提高T 細(xì)胞功能，抑制炎性細(xì)胞因子的釋放；同時(shí)可誘導(dǎo)B 細(xì)胞分泌IL-10、IL-35 因子；另外IL-35 也影響了部分促炎性細(xì)胞因子的釋放，有研究表明，IL-35通過(guò)對(duì)Th17 細(xì)胞的分化的抑制，降低IL-17 表達(dá)，發(fā)揮了促炎性特征[8]。MMP-3 主要由關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞及軟骨細(xì)胞產(chǎn)生，當(dāng)機(jī)體滑膜呈炎癥反應(yīng)及增生，滑膜表層細(xì)胞會(huì)釋放大量的MMP-3 并進(jìn)入關(guān)節(jié)液內(nèi)，隨后隨著血管、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移至血液循環(huán)[9]。TIMP-1 主要分布在機(jī)體體液及組織液內(nèi)，TIMPs 與MMPs 保持著動(dòng)態(tài)平衡，但在多種疾病患者中，兩者平衡被打破[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平均高于對(duì)照組，活動(dòng)期血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平均高于穩(wěn)定期（P＜0.05）。說(shuō)明類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平呈升高現(xiàn)象，尤其是疾病處于活動(dòng)期時(shí)，其表達(dá)增高。其原因是IL-35 主要來(lái)源于T 細(xì)胞，并通過(guò)抑制血管生成，起到調(diào)節(jié)抗炎癥反應(yīng)的作用；MMP-3 是一種能降解細(xì)胞外所有基質(zhì)的鈣、鋅蛋白酶，與組織重建、炎癥反應(yīng)、骨吸收、軟骨基質(zhì)降解等密切相關(guān)[11]。楊平等[12]研究指出，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清MMP-3 水平升高，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)其變化，可準(zhǔn)確評(píng)估疾病活動(dòng)程度。TIMP-1可調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、存活及組織分化，并能抑制血管生成。當(dāng)患者合并類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎后，持續(xù)免疫紊亂及炎癥反應(yīng)作用下，會(huì)引起關(guān)節(jié)損傷，為了抑制Th17 分化及炎癥反應(yīng)，體內(nèi)會(huì)釋放大量IL-35，使其表達(dá)升高；與此同時(shí)MMP-3 升高會(huì)破壞關(guān)節(jié)軟骨組織，并能激活其他MMP 物質(zhì)，誘發(fā)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終加重軟骨破壞程度；而為了抑制MMP 物質(zhì)的釋放，TIMPs 相應(yīng)產(chǎn)生，致其表達(dá)升高[13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，采用Pearson 相關(guān)性分析，血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平與IgA、IgG、IgM 呈正相關(guān)性，與補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。王曉亮等[14]研究發(fā)現(xiàn)，血清IL-35、MMP-3 與IgA、IgG、IgM 呈正相關(guān)性。崔靜等[15]研究指出，MMP-3/TIMP-1 平衡對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床結(jié)局有著重要作用。分析原因可能是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者存在免疫炎癥性損傷情況，IL-35 具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的作用，直接影響T 淋巴細(xì)胞，降低免疫細(xì)胞的增殖及分化，致體內(nèi)免疫系統(tǒng)異常，免疫耐受性喪失，并會(huì)促進(jìn)炎癥因子的釋放，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能過(guò)度活化；同時(shí)MMP-3、TIMP-1 可充分反映機(jī)體炎癥狀態(tài)，并起到調(diào)節(jié)免疫、促進(jìn)免疫抗體凋亡的作用，當(dāng)兩者之間的平衡被打破，表達(dá)異常升高，會(huì)抑制機(jī)體免疫反應(yīng)，從而參與到疾病發(fā)生、進(jìn)展。

綜上所述，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平呈升高情況，與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)，可能通過(guò)影響患者機(jī)體免疫功能而促進(jìn)疾病發(fā)生、進(jìn)展，可作為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的有效治療靶點(diǎn)，但其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步明確。