XN1000-B4 全自動血液分析儀Q-Flag 報警在判斷血小板聚集中的應用

張景逍，張晗鈺（通信作者），張金彪

河北省滄州中西醫結合醫院 （河北滄州 061000）

自動化血液分析儀的可疑報警信號Q-Flag 是XN 系列血液分析儀提示標本異常并產生報警信息的根本原因，其原理是通過儀器在白細胞散點圖的可疑區域抓點充池產生白細胞及血小板（platelet，PLT）相關報警值，并通過對紅細胞部分參數的計算充池產生紅細胞相關報警值[1]。圖1為XN1000-B4 全自動血液分析儀Q-Flag 界面，包含10 個報警池，在分析標本后，每個報警池的下方均會顯示該報警的充池數值（0～300），儀器默認Q-Flag 報警值超過100 時自動提示報警信息。而“PLT Clumps”報警值的產生則是通過在WDF、WNR 及高端機型的PLT-F 散點圖的疑似PLT 聚集區域進行抓點充池（圖2），若存在PLT-F 通道，則優先選取PLT-F 通道的充池數值作為最終結果，反之則選取WDF 及WNR 通道充池數值較高者作為最終結果。在日常檢驗工作中，對低值PLT 的糾正是檢驗科每天都會接觸的工作，在影響PLT 數值的因素中，PLT 聚集是較常見的情況[2]。為了探究XN1000-B4 全自動血液分析儀“PLT Clumps”的Q-Flag 報警的臨床應用價值，本研究對儀器報警信息與人工推片鏡檢結果進行比對分析，現報道如下。

圖1 XN1000-B4 全自動血液分析儀Q-Flag 界面

圖2 “PLT Clumps”報警在不同散點圖中的抓點區域

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2021 年1—3 月我院的800 份低值PLT（PLT＜125×109/L）血常規標本，每份標本均為30 min內完成上機檢測及人工推片鏡檢并相應記錄了“PLT Clumps”的Q-Flag 報警值及對應的PLT 聚集情況，其中，200 份為已完成人工推片鏡檢確定聚集的標本，用于研究鏡檢PLT 聚集陽性標本的Q-Flag 報警值分布情況；400 份隨機標本用于進行靈敏度分析；200 份隨機標本用于進行特異度分析。

1.2 儀器與試劑

儀器：XN1000-B4 全自動血液分析儀（日本希森美康株式會社）；Olympus CX31 顯微鏡（日本奧林巴斯株式會社）。試劑：瑞氏-吉姆薩復合染液，包含試劑A Wright-Giemsa 和試劑B 磷酸鹽緩沖液（試劑A、B 均來自北京雷根生物技術有限公司）。

1.3 質量控制

采用XN1000-B4 全自動血液分析儀配套質量控制方法每日進行低、中、高3 個水平的監測，所有程序均符合國家衛生健康委員會臨檢中心的室間質量評價要求，待質量控制結果在控后進行標本檢測。

1.4 標本選取及判斷標準

標本選取：選用日常檢測中的低值PLT（PLT ＜125×109/L）標本進行人工推片鏡檢，在標本膜上首先加入A 液（試劑A）使其完全覆蓋標本膜，靜置5 min 后加入B 液（試劑B）混勻（A 液與B 液的比例約為2 ∶1），靜置10 min，自然風干，記錄該標本“PLT Clumps”的Q-Flag 報警值。

判斷標準[3]：以血涂片片尾中每堆PLT 聚集數量＞20，且至少出現1 次，或每堆PLT 聚集數量＞10 且至少出現2 次，或每堆PLT 聚集數量＞5 且至少出現4 次為標準，判斷標本PLT 的聚集會影響檢驗結果。

1.5 統計學處理

采用SPSS 25.0 統計軟件分析數據。靈敏度研究中，5 組不同參數值陽性率的差異性分析采用R×Cχ2檢驗。Q-Flag 報警值對應PLT 聚集陽性率的變化采用趨勢性χ2檢驗。此外，以1-特異度為橫坐標，靈敏度為縱坐標繪制Q-Flag 報警值預測標本PLT 聚集情況的ROC 曲線，并得出最佳臨界值及曲線下面積。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 陽性標本的Q-Flag 報警值分布情況

200 份PLT 聚集陽性標本的Q-Flag 報警值分布于20～300 之間，見表1。

表1 PLT 聚集陽性標本的Q-Flag 報警值分布情況

2.2 Q-Flag 報警值在判斷PLT 聚集中的靈敏度分析

收集“PLT Clumps”的Q-Flag 報警值＞20 的標本進行人工推片鏡檢，選擇400 份隨機標本平均劃分5 個區間，標本聚集情況見表2。將不同Q-Flag 報警值分組的PLT 聚集情況（陰性、陽性）進行χ2檢驗，結果顯示，不同Q-Flag 報警值分組的PLT 聚集情況（陰性、陽性）比較，差異有統計學意義（χ2=97.547，P=0.000）；進一步進行兩兩比較，結果顯示，30～90 組與100～140 組的檢出陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），100～140 組與150～190 組的檢出陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05），150～190 組與200～240 組的檢出陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05），200～240 組與≥250 組的檢出陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；將Q-Flag 報警值30～90、100～140、150～190、200～240、≥250 組的陽性率進行趨勢性χ2檢驗，結果顯示，差異有統計學意義（趨勢性χ2=0.494，P=0.000）；當Q-Flag 報警值≥250 時，PLT 聚集陽性的靈敏度為95.0%，見表3。

表2 Q-Flag 報警值＞20 時標本對應PLT 聚集的陽性情況

表3 5 組不同Q-Flag 報警值分組的陽性率比較[份（%）]

2.3 Q-Flag 報警值在判斷PLT 聚集中的特異度分析

隨機選取“PLT Clumps”的Q-Flag 報警值＜30 的低值PLT 標本進行人工推片鏡檢，結果顯示，Q-Flag 報警值＜20 時標本未發生PLT 聚集的特異度為100.0%，見表4。

2.4 Q-Flag 報警值對應PLT 聚集情況的ROC 曲線分析

以靈敏度及特異度分析選擇的600 份隨機標本匯總Q-Flag 報警值對應的PLT 聚集情況，繪制ROC 曲線，以Q-Flag 報警值預測PLT 聚集情況（陰性、陽性），結果顯示，ROC 曲線下面積為0.900，標準錯誤a 為0.012，漸近顯著性b 為0.000，漸近95% 置信區間為0.876 ～0.923，靈敏度為86.5%，特異度為75.6%，最佳臨界值為100，見圖3。

圖3 Q-Flag 報警值預測PLT 聚集情況（陰性、陽性）的ROC 曲線圖

3 討論

XN 系列血液分析儀的自動化程度較高，操作簡便，分析結果較為可靠，已被廣泛用于全國各實驗室。其中，自動化血液分析儀的報警信號可以為檢驗工作者做出標本異常的相應提示，從而用于復檢規則中[4]。而儀器的異常報警提示均存在靈敏度和特異度，若檢驗工作者能將其掌握，則可減少日常推片復檢的數量，節省工作時間，提高檢驗效率。

在血常規檢驗中，PLT 聚集可導致PLT 結果假性減低，從而給臨床帶來錯誤信息，導致誤診[5-6]。通常情況下，若標本不存在PLT 大片聚集情況，則可以發出檢驗報告。高值PLT 由于PLT 數量較多會出現不可避免的自發小堆聚集情況，因此實際工作中“PLT-Clumps”的Q-Flag 報警值普遍高于低值PLT，故對于正常值以上的PLT 聚集的研究意義有限。但是，低值PLT 的標本由于PLT 數量較少，其自發聚集的概率也較小，若不借助儀器報警信息的提示，則每份低值PLT 標本均需要接受推片復檢排除干擾因素[7]。本研究在針對發生了PLT 聚集標本的Q-Flag 報警值的分布研究中，初步得到了200 份PLT 聚集陽性標本的Q-Flag 報警值分布于20～300 之間，通過將Q-Flag 報警值與PLT 聚集程度進行比對，發現PLT 大片聚集的標本Q-Flag 報警值均為300，但報警值＜300 的標本其報警值與PLT 聚集的程度不存在規律，因此當確定標本發生PLT 聚集時，無法根據“PLT Clumps”的Q-Flag 報警值判斷PLT 聚集程度[8]。

本研究在針對“PLT Clumps”的Q-Flag 報警靈敏度研究中，發現Q-Flag 報警值≥250 的76 份標本中，存在4 份未發生PLT 聚集，Q-Flag 報警值分別為270、290、300、300，在1 份Q-Flag 報警值為270 和1 份Q-Flag 報警值為300 的標本中發現了大PLT，糾正大PLT 后，實際值也高出了初始測定值，分析可能是儀器將大PLT 判定為小堆聚集的PLT 導致，另外2 份未見異常，但在后續的工作中同樣挑選了100 份存在大PLT 的低值PLT 標本進行了分析，結果發現，Q-Flag 報警值的分布較為分散，無規律可循。故“PLT Clumps”的Q-Flag 報警值越高，檢驗工作者越需警惕，儀器無法給出100%的靈敏度，異常標本均需要接受人工推片鏡檢排除干擾。在針對“PLT Clumps”的Q-Flag 報警特異度研究中，發現當“PLT Clumps”的Q-Flag 報警值為0 或10 時，128 份低值PLT 標本均未發生聚集，從而得到當“PLT Clumps”的Q-Flag 報警值＜20 時可認為血小板未發生聚集的結論。故在針對低值PLT 的檢測中，如Q-Flag 報警值＜20，則可排除PLT 聚集，在排除其他影響因素后，無須人工推片鏡檢即可發出報告。ROC 曲線提示，判斷PLT 聚集最佳臨界值的Q-Flag 報警值為100，此時靈敏度與特異度尚可，并與儀器默認的報警值100 完全匹配。但是，本研究得出的最佳臨界值及特異度的結論與曹科等[9]、李寶青等[10]的研究結果不一致，可能是本研究標本的選擇為低值PLT 標本所致，可排除高值PLT 數量較多導致人工推片鏡檢的假陽性。

本研究因WDF 及WNR 通道適用于XN 系列血液分析儀的所有機型而選擇XN1000-B4 全自動血液分析儀進行標本檢測，由于儀器通道的原理不同，故本研究結論不適用于PLT-F 通道產生的Q-Flag 報警值，但PLT-F 通道產生的Q-Flag 報警值也一定存在其判斷低值PLT 聚集的靈敏度及特異度，有待后續研究。在Q-Flag 報警值對應PLT 聚集的靈敏度研究中尚存在一些未知因素，影響著儀器的Q-Flag 報警值，從而導致Q-Flag 值達到250 以上但鏡下未見PLT 聚集情況發生，還需進一步對未知因素進行研究以對靈敏度進行完善。

綜上所述，通過XN1000-B4 全自動血液分析儀“PLT Clumps”的Q-Flag 報警值判斷低值PLT標本是否發生PLT 聚集中具有較高的可行性，其應用不僅利于檢驗工作者提高工作效率，而且能更好地保證檢驗質量。