甌江黿人工輔助繁育研究

王連榮，王建勇，葉承義，吳佳穎，洪孝友

（1. 青田縣林業局，浙江 青田 323900；2. 浙能北海水力發電有限公司 灘坑水電站水生生物增殖放流站，浙江 青田 323907；3. 中國水產科學研究院 珠江水產研究所，農業農村部熱帶亞熱帶水產種質資源利用與養殖重點實驗室，廣東 廣州 510380）

黿Pelochelyscantorii隸屬爬行綱Reptilia 龜鱉目Testudoformes 鱉科Trionychidae 黿屬Pelochelys，是中國內陸體型最大的水生龜鱉動物之一，主要分布在中國長江流域及以南地區和一些東南亞國家[1-2]。近現代，由于不正當貿易及人類的濫捕導致黿棲息地生境不斷惡化，分布區逐漸縮小，種群數量銳減，黿已經處于極度瀕危狀態，在一些地區甚至已經滅絕。1989 年，黿被列入國家一級保護動物，2000 年，被世界自然保護聯盟（IUCN）認定為瀕危動物，2003 年，被列入瀕臨絕種野生動植物國際貿易公約（CITES）附錄Ⅱ名單[3-5]。

有關黿的繁殖生物學研究報道甚少。黃惟灝等對野外自然繁殖的黿卵進行了生態觀察，對其中5 枚受精卵進行了人工孵化研究[6-7]。國內黿人工繁育研究主要見于廣東省。2014 年，中國水產科學研究院珠江水產研究所在廣東肇慶市對人工救助雌黿進行了初步的繁育研究，人工孵化獲得了10 只稚黿[8]。2015—2022 年，廣東省佛山市利用4 只親黿（2 雌2 雄），成功繁育出1 ~ 8 齡幼黿近1 000 只[9-10]。隨著黿人工繁育的成功以及相關保護建議的提出[11-12]，農業農村部于2019 年底發布了《黿拯救行動計劃（2019—2035 年）》，提出保護目標，指導保護行動實施[13]。

甌江是浙江省第二大水系，全長384 km，青田段主河道長75.5 km。青田黿省級自然保護區是浙江省黿的重要棲息地。甌江黿的研究報道主要集中在20 世紀末開展的資源調查，評估野外成體黿有80 只[14-15]。雖然歷史上黿在浙江分布較廣，但人類活動的長期干擾，黿在空間分布上越來越碎片化，目前數量稀少，處于瀕危狀態。近年來，青田縣林業局積極開展黿人工救護繁育工作，于2015 年救護一對誤捕的黿，2019—2022 年，在營養強化、修建產卵地等人工輔助條件下實現黿的繁殖，積累了基礎數據，為黿的種群保護提供了技術支撐?，F將甌江黿人工輔助繁育技術報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

試驗時間為2015 年6 月—2022 年12 月。試驗所用2 只黿（1 只雌性、1 只雄性）均為在甌江水系誤捕的野生個體。2015 年6 月30 日，雌性個體為青田縣鶴城街道北岸村漁民在甌江沙灣村段誤捕，背甲長70 cm，背甲寬50 cm，質量達21 kg；另一只雄性個體2015 年測得質量為6 kg（當時沒有留下這只個體的捕獲時間和地點記錄檔案，也沒進行形態及體質量測量）。2 只黿均養護在浙江省麗水市青田縣浙能北海水力發電有限公司灘坑水電站水生生物增殖放流站的一個池塘內。

1.2 人工繁育環境及繁育管理

黿人工繁育池塘近等腰梯形，腰長46 m，上下底長分別為2.8 m 和3 m，水深為1.5 m。池塘水源為水電站壩庫水，進水量約為10 m3·h-1，水質保持pH 為6.8 ~ 7.5，氨氮含量為0.3 ~ 0.8 mg·L-1，兩腰附近有樹木遮蔭。池塘短底邊斜坡鋪有60 cm 厚的細河沙，鋪河沙長4.8 m，寬2.4 m，斜坡傾斜度約為40°。

每年清明后開始隔天向塘中投放1.5 ~ 2.0 kg 魚肉，主要以鰱Hypophthalmichthysmolitrix、鯉Cyprinuscarpio為主。不定期向池塘投放數量不定的翹嘴鲌Culteralburnus、?HemiculterLeucisclus、黃尾鲴Xenocyprisdavidi等活魚苗作為黿的活餌。2022 年7 月3 日，雌黿產下第一窩卵后，投喂魚肉由隔天一次調整為每天一次。

1.3 交配觀察和黿卵孵化

2020 年5 月，架設紅外監控系統，在黿交配產卵季節，對黿繁殖行為進行錄像觀察。在黿產卵后1 ~ 3 d，挖窩采卵，記錄窩的深度、卵堆的體積、卵的數量及受精卵數量，用游標卡尺（精度0.01 cm）測量卵徑、電子天平（精度0.01 g）稱量卵質量。

孵化用的孵化盒為37.5 cm×27.5 cm×14.5 cm 的塑料盒，盒內鋪孵化介質，孵化介質為長徑為6 ~ 8 mm 的蛭石（蛭石與水分質量比例為1∶1.1），將同一窩卵排列于孵化盒中間，蓋上2 cm 同樣濕度的蛭石。置于孵化箱（寧波江南儀器廠生產的恒溫恒濕培養箱HWS-280）孵化，孵化溫度設置為30 °C，濕度設置為80%。受精卵孵化15 d 左右檢查，挑出發育不好的卵單獨孵化，孵化35 d 左右更換一次蛭石。

1.4 稚黿培育

參照“農業農村部佛山黿人工繁育基地”的方法[9]，建立幼黿培育體系。剛孵出的稚黿，撿起放入濕度為孵化濕度2 倍的介質孵化盆中，待臍帶收斂干脫后，測量稚黿的體質量，測量結束后，將稚黿置于直徑為2.0 m的圓形水桶中培育。培育用水為過濾循環水，保持pH 7.0 ~ 7.5、氨氮含量≤0.5 mg·L-1。水桶中的沙厚為15 cm，水深為5 ~ 7 cm，放養密度為每個培育水桶20 只，以體長1 ~ 3 cm 光唇魚Acrossocheilusfasciatus作為黿的活餌。整個培育在溫室內進行，大小儲水桶用加熱棒加熱，水溫維持在29 ~ 30 ℃。魚苗每天投喂一次，投喂量約為幼黿體質量的3%，投喂后6 h 左右及時撈出死魚。

2022 年12 月13 日，隨機從3 窩次卵中，挑選每窩卵出的幼黿5 只，測量其體質量。

2 結果與分析

2.1 黿交配行為

在繁殖季，小個體雄黿追逐大個體的雌黿交配行為被夜間觀察到2 次，分別在2021 年10 月10 日和2022年7 月6 日。其中2022 年7 月6 日，可明顯看到雄黿爬上雌黿的身上，試圖咬住雌黿脖頸，雌黿在原處激烈掙扎旋轉一周后逃脫，整個過程僅持續8 s（圖1）。

圖1 黿的交配行為Fig. 1 Mating behavior of P. cantorii

2.2 黿產卵特征

2022 年7 月3 日到8 月8 日，觀察到3 次雌黿在夜間（20:00—23:30）出水上沙丘產卵，總共產卵116 枚，其中受精卵102 枚。黿卵近圓形、剛性，卵殼薄，3 窩卵產卵間隔時間分別為15 d 和21 d（表1）。2022 年7月21 日9：00，對第2 窩卵巢穴特征進行測量，相關數據見示意圖（圖2），同時測得巢穴內溫度為31.3 °C，平均相對空氣濕度（Relative humidity，RH）為64.1%。

表1 2022 年黿繁殖特征Tab. 1 Reproduction properties of P.cantorii in 2022

圖2 黿卵窩及示意圖Fig. 2 Sketch of the nest of P. cantorii

2.3 黿卵孵化及稚黿生長

黿卵全程在控溫控濕的孵化箱內進行，受精卵的孵化天數為52 ~ 68 d，統計到的86 只稚黿的平均孵化天數為57.43±4.28 d。初孵稚黿頭頸、四肢及背部分布有不規則的小黑點及淺黃色點；背部、腹部白色，裙邊邊緣白色，平均體質量為13.67±1.13 g·只-1。2022 年12 月15 日，測得幼黿的平均體質量為172.21±38.96 g·只-1（表2）。

表2 稚黿的生長數據Tab. 2 The growth baby P. cantorii

2.4 黿繁殖特性比較

為了更好地了解青田縣黿的繁育狀況，對不同地區的黿繁育特性進行比較，結果見表3。由表3 可以看出，本研究中甌江黿的卵質量明顯要優于初產的廣寧市黿，甚至在受精率和孵化率上也優于穩產的高明市黿。

表3 不同地區黿繁殖特性的比較Tab. 3 Comparison of breeding properties of P. cantorii in different area

3 討論與結論

本研究中的雌黿在2022 年前已有2 年的產卵史，但所產的卵均未受精，由此判斷當時小個體的雄黿還未性成熟[8]。2021 年10 月，在繁殖期觀察到雌黿被雄黿追逐過程中應激性強烈。2022 年雌黿首次產出受精卵，證明雄黿已性成熟。農業農村部開展的黿野化適應保護工作回捕到野化的黿為5 冬齡，體質量約為4 kg[16]，而本研究中的雄黿（6 kg）培育了7 年才參與了交配繁殖，可推斷出雄黿性成熟年齡應在10 齡以上。本研究中僅觀察到黿交配行為2 次，可能有多次交配行為但因養殖池造型、監控設施、水體清晰度等原因未觀察到。但觀察到雌黿在被追逐過程中應激性非常強，因此在養殖管理中要給黿營造一個安靜的環境，以防外界因素干擾，造成受精失敗。

比較廣寧縣、高明市黿繁育特性發現，廣寧縣每窩次的卵量、受精率和孵化率均最低，有可能是母體初次性成熟，動物分配用于繁殖的資源和雌體腹腔容納量受限[17]，也有可能是養殖中水體環境不夠理想、親本營養欠缺造成的[18-19]。高明市黿雖產卵多2 ~ 3 窩，但最后一窩卵受精率相對較低，只有12%和10%，卵的質量也偏輕，很有可能是雌黿的營養補充跟不上[20]。但是3 地開展的黿的人工輔助繁殖不管是初次產卵還是已經產卵多年，其卵受精率均要比野外（9.6%）高得多[6]。這說明黿能較好地適應人工環境，人工條件下食物供應更充足，雌雄黿的相遇配對機會更多[20]。

本實驗中整個受精卵孵化、苗種養殖都是在溫室中進行的，如果在自然條件下進行，最后一窩黿苗估計要在10 月中旬或者更晚才能孵出，而且孵化率可能沒有人工輔助條件下的高。同時，最后一窩黿苗經歷較短的適宜生長期就會進入冬眠期，身體瘦弱的幼黿在第一個生長年的越冬期的成活率將會低下，人工干預下的溫室養殖對這一窩黿苗的成活率提高顯得尤為重要，這也是眾多龜鱉養殖采取的一個策略。

目前，我國僅在“農業農村部佛山黿人工繁育基地”利用4 只奠基黿（2 雌2 雄，來自珠江水系）成功人工繁育幼黿近1 000 只[10]，子一代個體有著較高的遺傳多樣性水平（PIC 為0.306 ~ 0.684）[21-22]。但珠江水系和甌江水系為2 個獨立的水系，因此，在浙江首次實現人工條件下的黿的成功繁育，對豐富黿保護生物學知識，維持種群遺傳多樣性水平，促進甌江水系黿野外種群恢復等方面具有重要的意義。