不同催產激素組合及產后護理對南方馬口魚人工繁育的影響

陳宇舒，薛凌展，陳度煌，胡振禧，廖夢香，吳妹英，樊海平，吳 斌

（福建省淡水水產研究所，福建 福州 350003）

馬口魚（Opsariichthys bidens）是一種生活在山澗溪流中的小型魚類，別稱花杈魚、坑爬、寬口等，隸屬鯉形目（Cypriniformes）鯉科（Cyprinidae）馬口魚屬（Opsariichthys），是東亞地區溪流中特有的雜食偏肉食性小型淡水兇猛魚類，在中國南北各大水系、水庫、溪流皆有分布[1]。馬口魚存在明顯的地理種群形態差異，在《中國鯉科魚類志》[2]對馬口魚屬的分類中，根據側線鱗片數量差異將馬口魚分為黑龍江馬口魚（Opsariichthys uncirostris amurensisBerg）（側 線 鱗47～50 枚）和 南 方 馬 口魚（Opsariichthys uncirostris bidensGünther）（側 線鱗41～46 枚）2 個亞種。黑龍江馬口魚主要分布于東三省的黑龍江、松花江水系，南方馬口魚主要分布于長江流域及以南地區。有研究表明，馬口魚是一種蛋白質含量較高、氨基酸平衡效果較好、不飽和脂肪酸含量豐富、保健價值極高的經濟魚類[3-4]。因其肉質細嫩鮮美，深受消費者青睞，市場價格在40～50 元/kg，在福建、浙江、湖南、內蒙古等內陸山區成為養殖特色品種之一，具有很高的養殖效益和市場發展前景[5-7]。

由于馬口魚為初步馴養開發的土著溪魚，具有一定的野性，且性急善跳躍，容易出現應激反應。因此在人工繁育過程中親魚的損耗死亡率高。主要原因是催產技術不成熟，導致部分親本難產死亡，或者產后護理措施不當，導致親魚產后體質恢復慢，成活率低，嚴重影響了馬口魚規模化生產和產業化開發。目前，馬口魚的研究主要集中在養殖技術、地理分布、營養分析等方面[8-10]，而針對馬口魚人工繁育的報道較少，且繁育技術有待于進一步的優化和提升。為了進一步完善馬口魚的人工催產繁育技術工藝，筆者以南方馬口魚為試驗對象，通過摸索催產激素配伍和產后護理措施，以期建立更加穩定的南方馬口魚人工繁育技術工藝，為馬口魚苗的規模化生產提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用南方馬口魚親魚均由福建省順昌縣兆興魚種養殖有限公司提供。選擇性腺發育成熟度好、體質健壯、無病無傷的成魚進行試驗，雌魚體重30±3 g，雄魚體重50±3 g。試驗所用的地歐酮（DOM）、人絨毛膜促性腺激素（HCG）、促黃體素釋放激素（LRH-A2）和促性腺激素釋放激素類似物（S-GnRHa）均購于寧波第二激素廠。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同催產藥劑組合對馬口魚產卵及孵化的影響 試驗共設5 組催產藥物組合，詳見表1，每組設3 個平行，每個平行22 尾魚（雌魚、雄魚各11 尾，比例1 ∶1），共330 尾。催產藥劑均采用一次性胸腔注射，雄魚催產劑量在雌魚的基礎上減半。注射后將雌雄魚親本放在直徑3 m 的室內圓形纖維玻璃鋼桶中流水剌激，催產池的水深控制在0.5 m 以內，采用1.5 kW 的潛水泵進行循環流水刺激，催產水溫控制在27～29℃。催產12 h 后，每隔1 h 檢測一次親魚性腺效應情況，輕壓雌魚腹部有成熟卵粒游離出生殖孔即可開始人工擠卵授精。試驗采用干法人工授精。授精后將受精卵放在孵化池的孵化框中進行靜水孵化。孵化池面積和水源與催產池相同，為直徑3 m 的圓形纖維玻璃鋼桶，孵化水位高度為0.5 m。孵化框由外徑32 mm 的PVC 管和60 目篩絹網制作而成，漂浮于孵化池上。

表1 試驗設計

1.2.2 最佳催產藥物組合的驗證試驗 2021 年4 月5 日至9 月5 日，在福建省順昌縣兆興魚種養殖有限公司采用最佳催產藥物組合共計催產南方馬口魚16 批次，以驗證該組合的實際應用效果。

1.2.3 親魚產后護理措施的優化 由于南方馬口魚容易出現應激反應，親魚經過擠卵或采精后，體質弱，應立即進行精養護理。試驗設計2 種產后處理方式，一種是產后優化護理（試驗組），另一種是依照傳統生產方式護理（對照組）。

（1）產后優化護理的具體操作流程。產后將雌、雄親魚分開暫養在水質清新的室內圓形纖維玻璃鋼桶（直徑3 m）中，水深0.5 m；產后護理池上方搭蓋遮陽網，營造幽靜的環境，提升親魚的安全感，同時在桶底放置若干節外徑為110 mm 的PVC管，長度20～30 cm，供親魚棲息；產后護理池每天換水一次，慢排慢放，減少流水刺激，維持水質穩定，溶解氧應大于5 mg/L；親魚進入護理池后用1 mg/L 的聚維酮碘和3‰的鹽（工業鹽）進行為期2周的浸泡處理，每日換50%的水并及時補充聚維酮碘和鹽，維持其濃度不變；進入護理池后從第2 天開始投喂，在飼料中加入5‰的氟苯尼考和2‰的恩諾沙星，攪拌均勻，日投喂量為魚體重的1%～2%，早晚各投喂一次，投喂10～20 min 內未攝食的殘餌應及時清理，拌服5 d 后停藥繼續正常投喂；經過2周的藥物浸泡后，魚體逐漸恢復正常，停止聚維酮碘和鹽的浸泡處理，恢復正常水體再靜養1 周后可移出護理池，將雌魚和雄魚一起移入戶外親本培育池進行生產培育管理。

（2）傳統生產方式護理的具體操作流程。產后將雌、雄魚混合，用1 mg/L 的聚維酮碘和20‰的鹽短時浸泡5～10 min，然后將其移至戶外親本培育池進行生產培育管理。試驗組和對照組各處理150尾親魚，3 周后統計整個護理過程親魚的死亡率。

1.3 測定指標及方法

按行業標準統計各試驗組的產卵雌魚數、受精卵粒數、出膜魚苗數和水花苗總數，按公式計算催產率、受精率、孵化率和雌魚生產效率。

催產率（%）=產卵雌魚數/催產總雌魚數×100

受精率（%）=受精卵粒數/抽檢總卵粒數×100

孵化率（%）=出膜魚苗數/受精卵總數×100

雌魚生產效率（%）=水花苗總數/產卵雌魚總數×100

2 結果與分析

2.1 不同藥劑組合對馬口魚的催產效果

從圖1 中可以看出，5 組藥物注射后的效應時間為16.52～17.48 h，其中B 組效應時間最短，但各組別之間無顯著差異。從生產情況（圖2）來看，D組的生產情況最好，沒有流產的現象，所有親魚均為順產，而其他組的親魚均有難產或流產的現象發生，難產比例最高的是A 組，為48.48%；流產比例最高是E 組，為9.09%。從授精和孵化的情況（圖3）來分析，D 組的卵子受精率和孵化率均為最高，分別為93.47%和91.17%，顯著高于A、B、E 組；A組的卵子受精率和孵化率均為最低，分別為79.5%和72.47%。綜合以上數據分析，認為D 組藥物組合的催產效果最好，可用于生產。

圖1 不同藥物處理的催產效應時間比較

圖3 不同藥物處理的受精率和孵化率比較

2.2 最佳催產藥物組合的實際應用效果

從表2 可以看出，2021 年采用LRH-A2+ HCG的催產藥物組合進行育苗生產，人工繁育催產率范圍為75%～89%，平均為（79.8±4.2）%，受精率范圍為76%～90%，平均為（81.6±3.3）%，孵化率范圍為70%～76%，平均為（73.1±2.1）%。總親魚數量為26 300 組，產卵量為2 730 萬粒，孵出水花數量為1 629.1 萬尾。與該公司2020 年采用DOM +LRH-A2的催產藥物組合進行人工繁育的記錄相比，2021 年的催產工藝的效果有了明顯的提升，催產率提升了10.0個百分點（P= 0.000＜0.01，差異極顯著），受精率提升了7.0 個百分點（P= 0.001 ＜0.01，差異極顯著），孵化率提升了4.3 個百分點（P= 0.004 ＜0.01，差異極顯著）。2020、2021 年該公司催產的南方馬口魚平均生產效率分別為202.1 尾/尾和309.7尾/尾，優化后雌魚的生產效率提升了53.2%（P=0.002 ＜0.01，差異極顯著）。

表2 不同催產藥物組合的實際應用效果對比

2.3 優化后的親魚產后護理效果及成活率

試驗組親魚進入護理池24 h 后體質逐漸恢復，第3 天部分親魚開口攝食。隨著體質狀況逐步好轉，親魚食量逐漸增大達到正常攝食量。經過3 周的精心暫養護理，試驗組150 尾親魚中有5 尾因受傷較為嚴重而死亡，其余親魚恢復正常，成活率為96.7%。對照組親魚經處理后移入戶外親魚培育池，經過5 d 的靜養后才有部分親本開口攝食，2 周后逐漸恢復產前攝食量，在3 周的靜養護理中共計28 尾受傷嚴重而死亡，部分親魚的體表出現炎癥，成活率為81.3%。

3 討 論

3.1 不同激素組合對馬口魚親魚催產效果的影響

硬骨魚類的成熟以及排卵和排精主要受到以下丘腦—垂體—性腺軸為中心的內分泌系統和外界環境因子的綜合影響[11]。魚類受到光照、水溫和食物等環境因子的刺激后，在下丘腦合成促性腺激素釋放激素（GnRH），GnRH 誘導垂體合成促性腺激素（GtH），GtH 中的促黃體生成素（LH）能誘導生殖細胞合成成熟誘導激素（MIH），最終促進排卵和排精[12]。在人工養殖條件下，由于營養供給、水溫及光照條件更側重于考慮生產性能、餌料效率和成活率等經濟指標，而忽略了親本性腺成熟和生產所需的條件因素，導致人工養殖的親魚大多數無法自繁，需要采取輔助措施才能實現規模化繁殖。常見的人工輔助催產激素有地歐酮（DOM）、絨毛膜促性腺激素（HCG）、促黃體素釋放激素（LRH-A2）和促性腺激素釋放激素類似物（S-GnRHa）等。DOM 是一種多巴胺抑制劑，可以抑制或者消除促性腺激素釋放激素抑制激素（GRIH）對下丘腦合成GnRH 的影響，從而增強腦垂體GtH 的分泌，促使性腺的發育成熟[13-14]。LRH-A2和S-GnRHa均作用于垂體細胞，刺激GtH 分泌（包括促卵泡生成激素FSH 和促黃體生成素LH），從而刺激排卵[15-16]。HCG 的功能相當于GtH，直接作用于己經生長成熟的卵母細胞外周的濾泡細胞，誘導濾泡細胞分泌孕酮，促使卵核破裂，進而誘導性腺成熟或排卵[17-18]。

不同種類親魚對催產藥物的敏感性有較大差異，因此催產時需要選擇該種親魚敏感性最高的催產藥物，并且幾種催產藥物配合使用，通過藥物之間的相互協同作用，可提高催產效果[19]。該研究結果顯示，LRH-A2+ HCG 組合對南方馬口魚催熟和催產效果最佳，而DOM 的作用效果不理想，所有激素配伍中含有DOM 的試驗組，均有難產或流產的現象發生。這說明DOM 對于南方馬口魚的有效催產劑量難以把握，容易導致親魚性腺中卵子過熟或難產，適用性較差。有研究表明，在魚類繁殖季節早期，氣溫水溫偏低、親魚性腺還未成熟時，DOM 通過影響促性腺激素釋放激素抑制激素（GRIH），使親魚卵巢快速從IV 初期進入IV 末期，達到催熟效果[18]。該研究中對于已經達到IV 末期的親魚，DOM 的作用方式可能不如其余3 種（HCG、LRH-A2、S-GnRHa）直接。同時，LRH-A2和HCG 作用途徑不同，后者比前者早作用于性腺，分泌甾類激素，產生正反饋作用，加速 LRH-A2與垂體細胞的受體結合，釋放GTH，二者相互協同作用的結果便提高了激素在體內的效價[20]。在陳乘[16]對南方馬口魚的研究中，LRH-A2+ HCG 的催產藥物組合同樣取得了良好的催產效果；同時，他還發現，在適宜的催產藥物劑量范圍內，效應時間與催產藥物劑量的關系不緊密，影響催產排卵效應時間的主要因素為親魚本身性腺的成熟度，但過大的催產劑量，則會降低魚卵孵化率。

3.2 影響催產效果的其他因素

魚類繁殖過程是一個系統的生理變化過程，除了受到激素調節以外，水溫、光照時長、營養攝入、水流刺激和親魚性腺成熟度等因素均可影響人工催產效果。水溫通過3 種方式影響魚類性腺發育以及排卵：（1）直接影響一些酶和激素的活性，進而影響性腺的發育；（2）影響性腺對GtH 的敏感性；（3）影響腦垂體對GtH 的合成及分泌[21-22]。光線通過眼睛和松果腺傳到下丘腦，到達腦垂體，影響GtH 釋放，從而啟動一系列內分泌機制，調控性腺發育和排卵[23-24]。而水流能夠不斷刺激魚類的側線，通過中樞神經使下丘腦GnRH 大量合成并釋放，再觸發腦垂體分泌GtH，誘導性腺發育并發情產卵[25]。魚類性腺的發育需要從外界攝取充足的營養物質。在魚類性腺發育過程中，卵巢增重約占魚體總重的20%左右。而卵巢中除水分外，蛋白質占20%～33%，脂質占1%～25%，灰分占0.7%～2.2%。因此，催產前的營養攝入必不可少[24]。

因此，南方馬口魚人工繁殖的前期工作尤為重要。例如，如何選擇人工催產的時間？一般情況下野生馬口魚的繁殖季節為每年的6—8 月[16]，根據不同地理位置和氣候變化情況南北有所不同。這主要由馬口魚性腺發育過程的有效積溫等環境因子而定。福建地區人工養殖條件下南方馬口魚的繁殖時間開始于4 月中旬，到9 月上旬結束，可實現分批次產卵，最適繁殖時間為5—6 月，這與練青平等[25]對浙江馬口魚人工繁育的研究結果類似。南方馬口魚相對于北方馬口魚的人工繁殖適宜時間早，北方一般從6 月開始[26]。此外，馬口魚性成熟時間與魚齡有關，2 齡魚的性成熟時間較1 齡魚早，2 齡魚在4 月中下旬即可催產，而1 齡魚最好在6 月后再進行人工繁殖，效果較好。

親魚培育過程的營養條件也是影響人工繁殖效果的重要因素之一。一般人工養殖的南方馬口魚在入冬前和開春后需要對親魚進行營養強化培育，除了投喂正常的分工配合飼料以外，還可以輔助投喂新鮮蝦米或黃粉蟲等，改善親魚的餌料營養結構，可有效提升親魚的催產效果。此外，親魚的選擇也很重要，由于南方馬口魚為分批產卵型魚類，導致不同階段親魚的性腺發育同步性不一致，在生產上需要對同批次的親魚進行嚴格的篩選，把成熟度好的親魚和成熟較差的親魚分開培育分批次催產，才能提升人工催產效果。一般選擇的標準是雄性馬口魚以能擠出乳白色的精液作為檢查性成熟的標志，雌性以卵巢發育到 IV 期作為成熟的標志。

3.3 馬口魚人工繁育產后護理措施的重要性

馬口魚是小型兇猛魚類，性格猛烈、活力較強，經過捕撈、密集運輸、注射激素、人工擠卵采精等操作后，產后體質較弱，處于應激狀態，容易引起親魚體表脫黏、掉鱗和臟器損傷等人為操作傷害，免疫力下降。而繁殖季節水溫回暖，適宜環境微生物及寄生蟲的滋生，將對親魚產生直接的威脅。如若親魚未經有效護理，產后南方馬口魚親魚死亡率較高。從該試驗的對比情況來看，科學的產后護理可有效降低親本的損耗率。因此，針對那些尚未經過人工定向選育和多代遺傳改良的魚類，經歷人工催產后，最好要從養殖環境、魚體消毒、營養補充和口服治療等方面進行綜合調理，才能盡量降低人工催產對親魚造成的損耗，提升繁殖經濟效益和效率。

4 結 論

試驗研究了不同催產激素組合對親魚催產及孵化效果的影響，結果顯示，南方馬口魚的最佳催產激素配伍為：5 μg/kg LRH-A2+ 1 000/kg IU HCG。

試驗還比較分析了優化產后護理對降低人工繁殖操作影響的效果，結果顯示，與傳統的產后護理相比，優化的產后護理有效降低了親魚的損耗，存活率提高了15.4 個百分點，說明科學有效的產后護理措施將有助于促進親魚快速恢復體質，降低繁殖生產帶來的應激損失。