可食用植物來源外泌樣納米顆粒體外抗氧化能力及其對過氧化氫誘導PC12 細胞氧化損傷的保護作用

張 嬌, 馬寶蓮, 張永蘭

（重慶理工大學藥學與生物工程學院藥理實驗室，重慶 400054）

外泌體是由細胞分泌的具有單層膜結構的細胞外囊泡，直徑為30～200 nm，具有與細胞相同的拓撲結構。外泌體作為蛋白質、核酸和脂質物質的運輸及儲存工具，參與多種疾病的病理生理過程［1-3］。在發育、免疫、組織動態平衡、癌癥和神經退行性疾病等方面均發揮重要作用?？墒秤弥参飦碓赐饷隗w 樣 納 米 顆 粒 （edible plant-exosomes-like nanoparticles， ELNs）因其提取簡便和活性明顯等特點受到研究者的重視，已有研究［4］顯示：從不同可食用鮮榨果蔬汁中提取得到的外泌體與其來源植物有相似的活性。氧化還原過程幾乎滲透到所有生命活動過程中［5］。在正常情況下，氧化劑形成的速率和幅度與其去除速率相平衡，而促氧化劑和抗氧化劑之間失去平衡會導致氧化應激。氧化應激在常見的疾病，如糖尿病、高血壓、子癇前期、動脈粥樣硬化、急性腎功能衰竭、阿爾茨海默病和帕金森綜合征的生理過程中發揮關鍵作用［6］?？寡趸瘎┮蚱湓隗w內和氧化應激介導的病理過程中具有保護作用而越來越受關注［7］。目前，主要將自由基清除實驗、脂質過氧化抑制實驗和總抗氧化能力測定作為抗氧化物質體外抗氧化能力的評價方法［8］。體內外研究［4，9-11］證實：ELNs 在抗炎、抗腫瘤和抗纖維化等方面具有重要作用，但目前關于其體外抗氧化作用尚無報道。本研究采用高速差速離心法分離提取得到生姜、青椒、大蒜、蘑菇、檸檬、山藥、葡萄、番茄、西蘭花和洋蔥10 種ELNs，并首次基于 二 苯 基 苦 基 苯 肼 （1， 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除體系、2，2-聯氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽［2，2'-azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate， ABTS］ 陽 離 子自由基體系和鐵離子總還原能力（Ferric ion reducing antioxidant power，FRAP） 體系3 種方法測定10 種ELNs 的體外抗氧化能力，采用MTT 比色法測定ELNs 對過氧化氫誘導的PC12 細胞氧化損傷后細胞活力的影響，闡明ELNs 的抗氧化能力，為分析ELNs 的活性成分及抗氧化作用機制提供依據。

1 材料與方法

1.1 細胞、植物、主要試劑和儀器PC12 細胞購自上海傅衡生物科技有限公司。生姜、青椒、大蒜、蘑菇、檸檬、山藥、葡萄、番茄、西蘭花和洋蔥購于重慶市某超市。 磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS） 購自蘭杰柯科技有限公司，DPPH 購自源葉生物科技有限公司，ABTS 試劑盒和FRAP 總抗氧化檢測試劑盒購自廣州碧云天生物技術公司，甲醇購自重慶川東化工（集團）有限公司，過氧化氫購自成都市科龍化工試劑廠，DMEM高糖培養基購自上海源培生物科技股份有限公司，胎牛血清購自以色列Biological Industries（BioInd）公司，胰蛋白酶和青霉素及鏈霉素雙抗購自香港BBI 生命科學有限公司，噻唑藍［3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT］購自美國MedChemExpress 公司， 二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）購自成都化夏化學試劑有限公司，PEG8000 購自美國Sigma 公司。濾膜購自海鹽新東方塑化科技有限公司，濾頭購自美國Millipore 公司，JYL-C020E 榨汁機購自九陽股份有限公司，SQP 天平購自賽多利斯科學儀器（北京）有限公司，5805 離心機購自德國Eppendorf 公司，1510 酶標儀購自賽默飛世爾科技（中國） 有限公司。

1.2 ELNs 提取采用差速離心法分別提取10 種ELNs。取大蒜、青椒、生姜、葡萄、檸檬、西蘭花、番茄、山藥、蘑菇和洋蔥10 種植物。對于葡萄和番茄等富含汁液的可食用食物，榨汁后收集汁液；對于大蒜、青椒、生姜、檸檬、西蘭花、山藥、蘑菇和洋蔥汁液較少的可食用植物，加入2 倍可食用植物質量的去離子水，榨汁后收集汁液；將收集的可食用植物汁液經5 000 g、4 ℃離心20 min；取上清，經10 000 g、4 ℃離心 30 min；取上清，采用1 μm 濾膜過濾后加入終濃度8% 的PEG 8000，4 ℃過夜孵育；10 000×g、4℃，離心30 min；棄去上清，將得到的外泌體沉淀稱質量，加入適量PBS 緩沖液，輕柔地吹打幾次，使沉淀均勻地懸浮于PBS 緩沖液中，經0.22 μm 濾頭過濾除菌，即獲得大蒜外泌體、青椒外泌體、生姜外泌體、葡萄外泌體、檸檬外泌體、西蘭花外泌體、番茄外泌體、山藥外泌體、蘑菇外泌體和洋蔥外泌體，分裝后于4 ℃保存。PC12 細胞分為對照組、外泌體組、過氧化氫組和過氧化氫+外泌體組。

1.3 DPPH 自由基清除能力檢測避光精密稱取5 mg DPPH，加入50 mL 甲醇溶解，獲得濃度為0.1 g·L－1DPPH 溶液，避光保存，備用。分別吸 取20 μL ELNs 溶 液 與180 μL DPPH 甲 醇 溶 液（0.1 g·L－1）混合，同時以甲醇為空白，室溫避光反應30 min，于517 nm 波長處測定吸光度（A）值，計算DPPH 自由基清除率。DPPH 自由基清除率= （A0－A）/A0×100%，A0：無提取物（空白對照）時自由基溶液的A 值；A：自由基溶液在ELNs 存 在 下 的A 值。

1.4 ABTS 陽離子自由基清除能力檢測按照試劑盒說明書在96 孔細胞培養板的每個檢測孔中加入20 μL 過氧化物酶工作液，空白對照孔中加入10 μL PBS 緩沖液；標準曲線檢測孔內加入10 μL不 同 濃 度（0.15、 0.30、 0.60、 0.90、 1.20 和1.50 mmol·L－1）Trolox 標準溶液；樣品 檢測孔內加入10 μL 各200 g·L－1ELNs。輕輕混勻，每個孔內加入170 μL ABTS 工作液（包含152 μL 檢測緩沖液，10 μL ABTS 溶液，8 μL 1∶1 000 過氧化氫溶液），輕輕混勻。室溫孵育6 min 后于414 nm 波長處測定A 值。計算ABTS 陽離子自由基清除率。ABTS 陽 離 子 自 由 基 清 除 率= （1－A/A0） ×100%，A0：無提取物（空白對照）時ABTS 陽離子自由基溶液的A 值；A：ABTS 陽離子自由基溶液在可食用ELNs 存在條件下A 值。

1.5 FRAP 總抗氧化能力檢測按照試劑盒說明書，在96 孔細胞培養板的每個檢測孔中加入180 μL FRAP 工 作 液（TPTZ 稀 釋 液150 μL，TPTZ 溶液15 μL，充分混勻后再加入檢測緩沖液15 μL）；空白對照孔中加入5 μL PBS 緩沖液；標準曲線檢測孔內加入5 μL 不同濃度（0.15、0.30、0.60、0.90、1.20 和1.50 mmol·L－1）Trolox 標準溶液；各樣品孔加入5 μL、200 g·L－1ELNs，輕輕混勻。37 ℃孵育3～5 min 后測定A（593）值。以各濃度Trolox 標準溶液A（593）值為橫坐標，對應的標準品濃度為縱坐標制成Trolox 標準曲線。擬合回歸方程為Y=0.676 6X+0.029 8，R2=0.993 5。根據標準曲線計算樣品的FRAP 總抗氧化能力。

1.6 細胞培養從液氮中取出凍存的PC12 細胞，置于 37 ℃溫水中晃動使其快速融化，移液槍吸取細胞凍存液到含有適量培養液的離心管中，1 000 r·min－1離心5 min 后棄上清液，加入2～3 mL新鮮培養液，均勻吹散細胞并轉移至培養皿中，補足培養液至10 mL，輕柔搖晃培養皿直至細胞完全均勻分散，置于37 ℃、5% CO2培養箱中靜置培養。

1.7 MTT 法檢測不同濃度過氧化氫作用后PC12細胞活力將處于生長對數期PC12 細胞接種于96 孔細胞培養板中，每孔100 μL（每孔1×104個細胞），待細胞貼壁過夜后加入5 μL 各濃度過氧化氫溶液制備氧化損傷的PC12 細胞，使終濃度為50、100、 200、 300、 400、 500、 600、 700 和800 μmol·L－1，同時設置對照組（加入5 μL PBS溶液），處理細胞24 h。培養結束后向每孔加入10 μL 5 g·L－1MTT 溶液繼續培養細胞4 h。去除上清液后以PBS 緩沖液洗滌3 次，最后加入100 mL DMSO， 振 蕩 溶 解10 min， 在570 和630 nm 波長處測定A 值，并計算平均A 值，以平均A 值代表細胞活力。

1.8 MTT 法檢測ELNs 作用后PC12 細胞活力

將處于對數生長期的PC12 細胞以每孔100 μL（每孔1×104個細胞）的密度接種于96 孔細胞培養板中，待細胞貼壁過夜后加入5 μL 各種ELNs，使其終濃度為200 mg·L－1，同時加入5 μL PBS 緩沖液作為空白對照，處理細胞24 h。培養結束后向每孔加入10 μL 5 g·L－1MTT 溶液繼續培養細胞4 h。去除上清液后以PBS 緩沖液洗滌3 次，最后加入100 μL DMSO，振蕩溶解10 min，在570 和630 nm波長處測定A 值，并計算平均A 值，以平均A 值代表細胞活力。

1.9 MTT 法檢測ELNs 作用后氧化損傷的PC12細胞活力將處于對數生長期的PC12 細胞接種于96 孔細胞培養板中，每孔100 μL（每孔1×104個細胞），細胞貼壁過夜。分別加入5 μL 各種ELNs，使其終濃度為200 mg·L－1，預處理4 h 后加入5 μL過 氧 化 氫，使 其 終 濃 度 為600 μmol·L－1，誘 導PC12 細胞氧化損傷。繼續處理細胞24 h，向每孔加入10 μL 5 g·L－1MTT 溶液培養細胞4 h。去除上清液后以PBS 緩沖液洗滌3 次，最后加入100 mL DMSO，振 蕩 溶 解10 min， 在570 和630 nm 波長處測定A 值，并計算平均A 值，以平均A 值代表細胞活力。

1.10 統計學分析采用GraphPad Prism 8.01 統計軟件進行統計學分析。10 種可食用ELNs 的DPPH 自由基清除率、ABTS 陽離子自由基清除率、FRAP 總抗氧化能力和ELNs 作用后氧化損傷的PC12 細胞活力符合正態分布，以±s表示，多組間樣本均數比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 10 種可食用ELNs 的DPPH 自由基清除率、ABTS 陽離子自由基清除率和FRAP 總抗氧化能力設定ELNs 濃度為200 g·L－1，分別測定DPPH自由基清除率、ABTS 陽離子自由基清除率和FRAP 總抗氧化能力，見表1。10 種ELNs 對DPPH自由基的清除能力從高到低依次為蘑菇、洋蔥、生姜、檸檬、葡萄、番茄、青椒、西蘭花、山藥和大蒜；10 種ELNs 對ABTS 陽離子自由基的清除能力從高到低依次為生姜、蘑菇、洋蔥、檸檬、山藥、葡萄、青椒、大蒜、番茄和西蘭花；10 種ELNs 對FRAP 體系的總抗氧化能力從高到低依次為生姜、青椒、洋蔥、蘑菇、檸檬、西蘭花、葡萄、山藥、番茄和大蒜。其中洋蔥、生姜、蘑菇、青椒和檸檬5 種ELNs 對3 種檢測體系均表現出抗氧化能力。

表1 10 種ELNs 的DPPH 自由基清除率、ABTS 陽離子自由基清除率和FRAP 總抗氧化能力Tab.1 DPPH scavenging,ABTS cationic radical scavenging rate, and FRAP total antioxidant capacity of ten ELNs（n=3,±s）

表1 10 種ELNs 的DPPH 自由基清除率、ABTS 陽離子自由基清除率和FRAP 總抗氧化能力Tab.1 DPPH scavenging,ABTS cationic radical scavenging rate, and FRAP total antioxidant capacity of ten ELNs（n=3,±s）

Type of ELNs FRAP total antioxidant capacity[mB/(mol·g－1)]Ginger ELNs Green pepper ELNs Garlic ELNs Mushroom ELNs Lemon ELNs Yam ELNs Grape ELNs Tomato ELNs Broccoli ELNs Onion ELNs DPPH scavenging rate (η/%)11.4±4.49 3.00±0.29－13.4±6.34 18.7±5.39 7.84±2.87 0.86±0.12 6.66±4.31 4.74±2.01 2.91±1.82 14.0±1.79 ABTS cationic radical scavenging rate (η/%)21.80±1.00 0.52±0.13 0.58±1.63 12.90±1.40 5.81±1.08 1.77±0.97 1.07±0.49－2.10±0.14－7.80±0.19 7.40±0.54 6.37±0.08 4.60±0.42 0.23±0.26 3.9±0.10 2.70±0.17 0.30±0.05 1.02±0.24 0.24±0.04 1.22±0.66 4.30±0.29

2.2 5 種ELNs 的DPPH 自由基清除能力5 種ELNs 的DPPH 自由基清除能力存在明顯差異（圖1），在 質 量 濃 度 為10～100 g·L－1時，5 種ELNs 的DPPH 自由基清除能力與質量濃度呈良好的線性關系，按照擬合的回歸方程計算比較DPPH自由基清除率為50%時對應的可食用植物外泌體濃度，結果顯示：5 種ELNs 的DPPH 自由基清除能 力 從 大 到 小 依 次 為 洋 蔥（73.15 g·L－1）、生 姜（124.07 g·L－1）、 蘑 菇 （310.44 g·L－1）、 青 椒（969.06 g·L－1） 和 檸 檬（1 718.94 g·L－1）。5 種ELNs 的擬合回歸方程分別為Y=0.043 6X+7.710 0，R2=0.777 1；Y=0.361 4X+5.160 0，R2=0.852 8； Y=0.506 1X+12.980 0，R2=0.897 7；Y=0.138 2X+7.097 0，R2=0.955 3；Y=0.028 6X+0.769 5，R2=0.743 0。

圖1 5 種ELNs 的DPPH 自由基清除率Fig.1 DPPH scavenging rates of five ELNs

2.3 5 種ELNs 對ABTS 陽離子自由基的清除能力5 種可食用ELNs 對ABTS 陽離子自由基的清除能力具有明顯的劑量效應關系（圖2），當ELNs質 量 濃 度 為10～100 g·L－1時，可 食 用ELNs 與ABTS 陽離子自由基清除能力呈現良好的線性關系；按照擬合的回歸方程計算比較ABTS 陽離子自由基清除率為50%時對應的可食用植物外泌體質量濃度結果顯示：5 種可食用ELNs 的ABTS 陽離子自由基清除能力從大到小依次為生姜（91.24 g·L－1）、 洋 蔥（123.02 g·L－1）、 蘑 菇（518.04 g·L－1）、檸 檬（544.38 g·L－1） 和 青 椒（847.32 g·L－1）。Y=0.426 7X+11.070 0，R2=0.914 1；Y=0.372 7X+4.151 0，R2=0.994 9；Y=0.089 8X+1.131 0，R2=0.978 8； Y=0.098 9X－1.229 0，R2=0.879 2；Y=0.058 0X+0.838 5，R2=0.958 4。

圖2 5 種ELNs 的ABTS 陽離子自由基清除率Fig.2 ABTS cationic radical scavenging rates of five ELNs

2.4 5 種ELNs 對FRAP 體 系 的 總 抗 氧 化 能力

5 種可食用植物來源外泌樣納米顆粒對FRAP體系的總抗氧化能力存在明顯差異，在可食用ELNs 質量濃度為10～100 g·L－1時，其總抗氧化能力與質量濃度呈良好的線性關系， FRAP 為0.5 mol·L－1時，對應的可食用植物外泌體濃度計算結果顯示：在FRAP 體系中，5 種可食用植物來源外泌樣納米顆粒總抗氧化能力從大到小依次為生姜（54.17 g·L－1）、洋 蔥（83.00 g·L－1）、青 椒（122.74 g·L－1）、蘑 菇（237.10 g·L－1） 和 檸 檬（962.12 g·L－1）。見 圖3。Y=0.009 5X－0.014 2，R2=0.961 0；Y=0.007 5X－0.119 7，R2=0.995 3；Y=0.005 4X－0.164 4，R2 =0.975 1； Y=0.001 9X+0.045 2，R2=0.804 2；Y=0.000 5X－0.023 8，R2=0.813 3。

圖3 5 種ELNs 的FRAP 總抗氧化能力Fig.3 Total antioxidant capacities of five ELNs

2.5 各組PC12 細胞活力與對照組比較，10 種可食用ELNs 濃度為200 mg·L－1時，除蘑菇外泌體外，其余9 種植物外泌體處理24 h 后，PC12 細胞活力無明顯變化。采用MTT 法檢測不同濃度過氧化氫對PC12 細胞活力的影響，結果顯示：與對照組比較，PC12 細胞活力隨著過氧化氫濃度升高而降低，呈劑量依賴關系，當過氧化氫濃度達到600 μmol·L－1時，PC12 細 胞 活 力 降 低 約30%，因此，選擇600 μmol·L－1過氧化氫作為后續實驗誘導濃 度。與 對 照 組 比 較，600 μmol·L－1過 氧 化 氫 組PC12 細胞活力下降約30%。與過氧化氫組比較，過氧化氫+ELNs組（青椒、檸檬、山藥和西蘭花）PC12細胞活力明顯提高21.08%、26.2%、11.72%和15.15%。見表2～4。

表2 MTT 法檢測各組PC12 細胞活力Tab.2 Viabilities of PC12 cells in various groups detected by MTT assay （n=3,±s,η/%）

表2 MTT 法檢測各組PC12 細胞活力Tab.2 Viabilities of PC12 cells in various groups detected by MTT assay （n=3,±s,η/%）

Group Control Ginger ELNs Green pepper ELNs Garlic ELNs Mushroom ELNs Lemon ELNs Yam ELNs Grape ELNs Tomato ELNs Broccoli ELNs Onion ELNs Concentration of ELNs[ρB/(mg·L－1)]0 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 Viability of PC12 cells 100.40±4.37 105.10±1.29 91.55±5.30 97.23±8.89 79.50±4.52 95.66±3.30 96.52±6.51 98.33±4.44 93.38±5.59 94.46±5.22 89.70±5.99

表3 不同濃度過氧化氫處理后PC12 細胞活力Tab.3 Viabilities of PC12 cells after treated with different concentrations of H2O2 （n=3,±s,η/%）

表3 不同濃度過氧化氫處理后PC12 細胞活力Tab.3 Viabilities of PC12 cells after treated with different concentrations of H2O2 （n=3,±s,η/%）

*P <0.05，**P<0.01 vs control group.

Group Control Concentration of H2O2（μmol·L－1）Viability of PC12 cells 50 100 200 300 400 500 600 700 800 100.00±2.84 96.19±1.91 96.45±2.12 97.27±0.62 93.58±4.51 96.91±1.92 83.50±11.80*74.93±8.30**34.87±9.40**23.87±3.90**

表4 過氧化氫和ELNs 作用后PC12 細胞活力Tab.4 Viabilities of PC12 cells after treated with H2O2 and ELNs （n=3,±s,η/%）

表4 過氧化氫和ELNs 作用后PC12 細胞活力Tab.4 Viabilities of PC12 cells after treated with H2O2 and ELNs （n=3,±s,η/%）

*P<0.05，**P<0.01 vs H2O2 group.

Group H2O2 H2O2+Hydrogen peroxide H2O2+Ginger ELNs H2O2+Green pepper ELNs H2O2+Garlic ELNs H2O2+Mushroom ELNs H2O2+Lemon ELNs H2O2+Yam ELNs H2O2+Grape ELNs H2O2+Tomato ELNs H2O2+Broccoli ELNs H2O2+Onion ELNs Viability of PC12 cells 100.30±4.55 58.64±0.25 29.57±0.24 79.72±0.39*52.88±0.49 50.86±0.31 84.84±0.65*70.36±4.51*57.78±0.11 59.94±0.94 73.79±0.34*36.70±0.16

3 討 論

氧化還原過程幾乎滲透從生物能學到代謝和生命功能的全部過程［13］。當機體在受到有害刺激時，體內自由基增加或抗氧化能力減弱，導致氧化-抗氧化系統失衡、氧化還原信號和控制的中斷或分子損傷［14］，從而積累過多的活性氧，損傷核酸、蛋白質和脂質等生物大分子，破壞細胞結構，引起多種疾病的發生［15］。抗氧化劑在維持人體健康、預防和治療疾病方面發揮著至關重要的作用。因此，研究抗氧化劑對預防和治療與氧化應激相關的疾病具有重要的作用。體外評價抗氧化能力是前期篩選抗氧化活性物質的重要手段。

外泌體是一種小型的膜狀納米顆粒，可由多種哺乳動物細胞形成并分泌到細胞外環境中，能夠保護其內部活性物質在血液或組織液的遠距離運輸過程中不被降解，其膜上的特異性表面配體還能與受體細胞高度結合，參與細胞間的物質和信息交換［16］。研究［17-20］顯示：與哺乳動物細胞分泌的外泌體類似，ELNs 攜帶蛋白質、脂質和核酸等，可反映來源細胞的生理和病理情況，在細胞間物質交換和信息傳遞中發揮重要作用，但目前暫未見其體外抗氧化能力評價的相關報道。本研究采用差速離心法提取得到生姜、青椒、大蒜、蘑菇、檸檬、山藥、葡萄、番茄、西蘭花和洋蔥10 種ELNs，首次采用DPPH、ABTS 和FRAP 這3 種體外抗氧化評價指標對10 種ELNs 的抗氧化能力進行測定，結果顯示：10 種ELNs 在3 種體外抗氧化體系中表現出不同的抗氧化能力，其中生姜、蘑菇、檸檬和洋蔥4 種ELNs 在3 種體外抗氧化評價體系中均表現出較強的抗氧化能力。

與體外化學測定的方法比較，抗氧化能力的體外細胞篩選實驗更能模擬真實生物機體內部環境，說明抗氧化活性物質的作用機制，因而更具有說服力和發展前景，過氧化氫損傷模型是目前應用最廣泛的細胞損傷模型［21］。本 研 究 采 用MTT 法 檢測10 種ELNs 對過氧化氫誘導的PC12 細胞氧化損傷模型細胞活力的影響，結果表明：青椒、檸檬、山藥和西蘭花ELNs 作用后，PC12 細胞活力升高，上述ELNs 表現出顯著的保護作用。本課題組前期研究［22］證實：藍莓外泌體可以改善魚藤酮誘導的肝癌HepG2 細胞和高脂飲食喂養的C57BL/6 小鼠的氧化應激。在魚藤酮處理的肝癌HepG2 細胞中，藍莓外泌體預孵育加速了核紅細胞2 相關因子2（NF-E2-related factor 2， Nrf2）從細胞質到細胞核的移位。此外，藍莓外泌體通過影響在高脂飼料喂養小鼠肝細胞胞漿和胞核中Nrf2 的分布，改善胰島素抵抗和肝細胞功能障礙，調節抗氧化基因的表達。研究［23］顯示：氧化應激和炎癥反應可相互作用，氧化應激可誘發炎癥反應，炎癥是氧化應激的重要下游反應，可以進一步加速氧化應激的過程。研究［24］顯示：花椰菜外泌體可以介導腺苷-磷酸激活蛋白激酶（adenosine 5'-monophosphate-activated protein kinase，AMPK）抑制樹突狀細胞的激活達到防治結腸炎的目的。從香菇中提取得到的外泌體能通過抑制NOD 樣受體熱蛋白結構域相關蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3） 炎癥小體的活化減輕D-半乳糖胺/脂多糖誘導的小鼠肝功能損傷［14］。西柚外泌體能被腸道巨噬細胞選擇性吸收并抑制腸道 巨 噬 細胞 產 生 白細 胞 介 素1β （interleukin-1β，IL-1β）和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），從而改善硫酸葡聚糖鈉鹽（dextran sulfate，DSS）誘導的小鼠結腸炎［25］。葡萄外泌體被小鼠腸道巨噬細胞攝取，誘導抗氧化基因表達和抑制促炎細胞因子［26］。柑橘外泌體可以改變與炎癥相關的細胞間黏附分子1（inter cellular adhesion molecule-1， ICAM-1） 等基因表達，有助于限制炎癥刺激，并通過增加閉合蛋白來恢復功能屏障［27］，上述研究結果均提示ELNs 具有潛在的直接或間接抗氧化活性。

綜上所述，本研究選取不同機制為基礎的3 種評價方法共同觀察10 種ELNs 的體外抗氧化能力，3 種方法檢測的結果具有高度一致性，同時也采用了細胞損傷模型模擬體內真實氧化應激環境，但本研究仍存在不足之處，如過氧化氫細胞損傷模型無法模擬生理條件下的多條氧化途徑，10 種ELNs 內在組成有待深入研究，其發揮作用的活性成分及其體內抗氧化作用機制尚未完全清楚，今后可根據本研究結果結合體內外實驗深入探討ELNs 的抗氧化途徑和具體作用機制。