沉默CDKL1 基因通過(guò)調(diào)控PTEN/Akt/mTOR 信號(hào)通路對(duì)乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖和侵襲的抑制作用

趙月生, 李祖彬, 劉海鷗, 陶昆麟, 趙齊海, 李 娜

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院乳腺外科,黑龍江 齊齊哈爾161000）

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一［1-2］，其發(fā)病率逐年上升，已成為全球發(fā)病率較高的癌癥。研究［3］顯示：2020 年全球乳腺癌新發(fā)病例占癌癥發(fā)病總數(shù)的24.5%，嚴(yán)重威脅女性健康。目前，臨床常采用手術(shù)和放化療方法治療乳腺癌，雖然已明顯提高乳腺癌患者的生存率，但手術(shù)切除乳房和放化療的不良反應(yīng)會(huì)給患者生理和心理上帶來(lái)巨大痛苦［4］。因此，探索療效好、不良反應(yīng)少和精確度高的分子靶向治療乳腺癌的方法具有重要意義。細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白樣激酶1 （cyclindependentkinase like 1，CDKL1） 是細(xì)胞周期調(diào)控蛋白家族中的一員，其在乳腺癌組織中高表達(dá)，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞周期、凋亡、增殖、遷移和侵襲等生理過(guò)程［5-7］。有關(guān)CDKL1 在乳腺癌惡性進(jìn)展過(guò)程中的作用及其相關(guān)機(jī)制尚未明確。本研究探討沉默CDKL1 基因表達(dá)對(duì)乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的作用及其對(duì)磷酸酶和張力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog，PTEN）、蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）及哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mechanistic target of rapamycin，mTOR）信號(hào)通路的影響，并初步闡明其作用機(jī)制，為乳腺癌的靶向治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、主要試劑和儀器人乳腺癌MCF-7 細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。最低必需培養(yǎng)基（minimum essential medium，MEM） 和優(yōu)質(zhì)胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS） 購(gòu)自上海賽百慷生物技術(shù)股份有限公司，小干擾RNA CDKL1（small interfering RNA CDKL1，siRNA CDKL1）及其陰性對(duì)照siRNA NC 由廣州銳博生物技術(shù)有限公司提供，轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體Lipofectamine 2000 購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，CCK-8 試劑盒、EdU-488 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒、牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、結(jié)晶紫染色液、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR （real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR） 試劑盒和BCA 蛋白濃度檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，Transewll 小室和基質(zhì)膠購(gòu)自美國(guó)Corning 公 司，PTEN 抑 制 劑BpV 和Akt 激 動(dòng) 劑SC79 購(gòu)自美國(guó)MCE 公司，CDKL1 抗體、基質(zhì)金屬 蛋 白 酶2 （matrix metalloproteinase-2，MMP-2）抗體、基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）抗體、PTEN 抗體、Akt 抗體、mTOR 抗體、 磷 酸 化Akt （phosphorylated Akt， p-Akt）（S473） 抗 體、 磷 酸 化mTOR （phosphorylated mTOR，p-mTOR）（S2448）抗體和GAPDH 抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司。酶標(biāo)分析儀（型號(hào)MR-96A）購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，倒置熒光顯微鏡（型號(hào)WMF-3580）購(gòu)自上海豫光儀器有限公司，RT-qPCR 儀（型號(hào)ABI 7300）購(gòu)自美國(guó)Thermo 公司，化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（型號(hào)ChemiDoc Touch）購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad 公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)分組和轉(zhuǎn)染乳腺癌MCF-7

細(xì)胞采用含10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清的MEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)，置于37 ℃、5% CO2恒溫恒濕培養(yǎng)箱中，2 d傳代1 次。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MCF-7 細(xì)胞，分為空白對(duì)照組（MCF-7 細(xì)胞不作任何處理）、轉(zhuǎn)染對(duì)照（siRNA-NC） 組（MCF-7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA-NC 質(zhì)粒）、siRNA-CDKL1 組（MCF-7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNACDKL1 質(zhì) 粒）、 siRNA-CDKL1+PTEN 抑 制 劑BpV （siRNA-CDKL1+BpV） 組（轉(zhuǎn) 染siRNACDKL1 的MCF-7 細(xì)胞，再采用1 μmol·L－1PTEN抑制劑BpV 處理2 h）和siRNA-CDKL1+Akt 激動(dòng)劑 SC79 （siRNA-CDKL1+SC79） 組 （ 轉(zhuǎn) 染siRNA CDKL1 的MCF-7 細(xì)胞，再采用10 μmol·L－1Akt 激 動(dòng) 劑SC79 處 理2 h）。采 用Lipofectamine 2000 法將siRNA-CDKL1 及其陰性對(duì)照siRNA-NC質(zhì)粒轉(zhuǎn)入乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中，各組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)48 h 后，采用RT-qPCR 法和Western blotting 法檢測(cè)各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中CDKL1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平，并收集細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)。

1.3 CCK-8 法檢測(cè)各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖活性取轉(zhuǎn)染后各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液并調(diào)整細(xì)胞密度至2×104mL－1，以每孔100 μL 接種至96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，按照“1.2”方法處理細(xì)胞12、24 和48 h，另設(shè)無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)照組，在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)截止前4 h 取出培養(yǎng)板，每孔加入10 μL CCK-8 溶液，置于培養(yǎng)箱中避光孵育4 h，采用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm 處吸光度（A） 值，并計(jì)算細(xì)胞增殖活性。細(xì)胞增殖活性＝［（實(shí)驗(yàn)孔A 值－空白孔A 值） / （對(duì) 照 孔A 值－ 空白 孔A 值）］ ×100%，其中對(duì)照孔為空白對(duì)照組，空白孔為培養(yǎng)基對(duì)照組（用于調(diào)零）。

1.4 EdU 法檢測(cè)各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中EdU陽(yáng)性細(xì)胞率取轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液并調(diào)整細(xì)胞密度至1×105mL－1，以每孔500 μL 接種至24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。每孔加入500 μL 完全培養(yǎng)基配制的20 μmol·L－1EdU 工作液，置于37 ℃培養(yǎng)箱孵育2 h，吸去培養(yǎng)基，經(jīng)4%多聚甲醛固定、3% BSA 洗滌、0.3% Triton X-100通透處理后，加入100 μL Click 反應(yīng)液室溫避光孵育30 min，DAPI 室溫染核5 min，在熒光顯微鏡下觀察，采用Image J 軟件計(jì)數(shù)，計(jì)算EdU陽(yáng)性細(xì)胞率。EdU 陽(yáng)性細(xì)胞率=EdU 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞劃痕愈合率取轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞接種至6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，待細(xì)胞密度生長(zhǎng)至100% 時(shí)，每孔采用200 μL 移液器吸頭平行劃痕3 次，于顯微鏡下觀察拍照每條劃痕并記錄劃痕位置，此時(shí)記為0 h；將孔板置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，觀察并拍照相同劃痕位置。采用Image J 軟件分析劃痕面積并計(jì)算劃痕愈合率。劃痕愈合率=（0 h 劃痕面積－24 h劃痕面積）/0 h 劃痕面積×100%。

1.6 Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組乳腺癌MCF-7細(xì)胞遷移和侵襲能力取轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸液并調(diào)整細(xì)胞密度至1×105mL－1。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)：每個(gè)小室上方加入250 μL 細(xì)胞懸液，小室下方的24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中加入750 μL 完全培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h 后取出小室，4%多聚甲醛固定10 min，結(jié)晶紫染液染色5 min，擦除Transwell 小室上方未穿過(guò)的細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）清洗晾干，在顯微鏡下觀察拍照并統(tǒng)計(jì)穿過(guò)Transwell 小室的細(xì)胞數(shù)目。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)：采用不含血清的MEM 培養(yǎng)基配制1 g·L－1基質(zhì)膠工作液，置于37 ℃培養(yǎng)箱中1 h，吸去工作液，其他步驟與上述細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)一致。

1.7 RT-qPCR 法檢測(cè)各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中CDKL1 mRNA 表達(dá)水平收集轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞，加入TRIzol 裂解液提取總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將樣本逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用RT-qPCR 試劑盒進(jìn)行mRNA 定量分析。引物序列：GAPDH上游引物5'-GAAAGCCTGCCGGTGACTAA-3'， GAPDH下游引物5'-GCCCAATACGACCAAATCAGAGA-3'；CDKL1 上 游 引 物5'-GGCACCAGCAAGTGTTTAGC-3'， CDKL1 下 游 引 物5'-GCAATTGGTACTCTGCCCTTT-3'。反應(yīng)條件：95 ℃變性1 min；95 ℃、10 s、65 ℃、20 s，共循環(huán)40 次。以GAPDH 為內(nèi)參，采用2－△△Ct法計(jì)算各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中CDKL1 mRNA 表達(dá)水平。

1.8 Western blotting 法檢測(cè)各組乳腺癌MCF-7細(xì)胞中細(xì)胞遷移侵襲相關(guān)蛋白和PTEN/Akt/mTOR 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平收集各組細(xì)胞，在細(xì)胞中加入放射免疫沉淀法（radio immunoprecipitation assay，RIPA） 裂解液提取總蛋白，BCA 蛋白濃度檢測(cè)試劑盒檢測(cè)總蛋白濃度。取40 μg 各組細(xì)胞總蛋白上樣，電泳、轉(zhuǎn)膜處理后，加入5%脫脂牛奶室溫孵育1 h，加入一抗CDKL1抗 體（1∶1 000）、 MMP-2 抗 體（1∶1 000）、MMP-9 抗體（1∶1 000）、PTEN 抗體（1∶1 000）、Akt 抗體（1∶1 000）、mTOR 抗體（1∶1 000）、p-Akt 抗體（1∶1 000）、p-mTOR 抗體（1∶1 000）、GAPDH（1∶5 000），4 ℃孵育過(guò)夜，TBST 溶液洗膜3 次，加入HPR 偶聯(lián)的山羊抗兔IgG 二抗（1∶10 000），室溫孵育1 h，TBST 溶液洗膜3 次，滴加ECL 顯影液，曝光，采用Image J 軟件分析條帶灰度值，以GAPDH 為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/GAPDH 條帶灰度值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖活性、劃痕愈合率、遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)，MCF-7 細(xì)胞中CDKL1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平，MCF-7 細(xì)胞中MMP-2、MMP-9、PTEN、Akt、mTOR、p-Akt 和p-mTOR 蛋白表達(dá)水平均符合正態(tài)分布，以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中CDKL1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平RT-qPCR 法和Western blotting 法檢測(cè)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組比較，siRNA-NC 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中CDKL1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與siRNA-NC組比較，siRNA-CDKL1 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中CDKL1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01），提示細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功，見(jiàn)圖1。

圖1 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中CDKL1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平Fig.1 Expression levels of CDKL1 mRNA and protein in breast cancer MCF-7 cells in various groups

2.2 各組乳腺癌MCF-7 檢測(cè)細(xì)胞增殖活性和EdU陽(yáng)性細(xì)胞率CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：不同時(shí)間點(diǎn)（12、 24 和48 h）， 與siRNA-NC 組 比 較，siRNA-CDKL1 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖活性降低（P<0.01）； 與siRNA-CDKL1 組 比 較， siRNACDKL1+BpV 組 和siRNA-CDKL1+SC79 組 乳 腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖活性升高（P<0.01），見(jiàn)圖2。EdU 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：與siRNA-NC 組比較，siRNA-CDKL1 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中EdU 陽(yáng)性細(xì)胞率降低（P<0.01）；與siRNA-CDKL1 組比較， siRNA-CDKL1+BpV 組 和siRNA-CDKL1+SC79 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中EdU 陽(yáng)性細(xì)胞率升高（P<0.01），見(jiàn)圖3 和4。

圖2 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖活性Fig.2 Proliferation activities of breast cancer MCF-7 cells in various groups

圖3 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞EdU 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（×200）Fig.3 Results of EdU experiment of breast cancer MCF-7 cells in various groups(×200)

圖4 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中EdU 陽(yáng)性細(xì)胞率Fig.4 EdU positive cell rates of breast cancer MCF-7 cells in various groups

2.3 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)

劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：與siRNA-NC 組比較，siRNA-CDKL1 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞劃痕愈合率降低（P<0.01）；與siRNA-CDKL1 組比較，siRNA-CDKL1+BpV 組和siRNA-CDKL1+SC79組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞的劃痕愈合率升高（P<0.01），見(jiàn)圖5。Transewll 小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：與siRNA-NC 組比較，siRNA-CDKL1 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)減少（P<0.01）；與siRNA-CDKL1 組比較，siRNA-CDKL1+BpV 組和siRNA-CDKL1+SC79 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)增加（P<0.01）。見(jiàn)圖6。

圖5 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞劃痕愈合率Fig.5 Scratch healing rates of breast cancer MCF-7 cells in various groups

圖6 Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)Fig.6 Migration and invasion numbers of breast cancer MCF-7 cells in various groups detected by Transwell chamber assay

2.4 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中MMP-2 和MMP-9蛋白表達(dá)水平Western blotting 法檢測(cè)結(jié)果顯示：與siRNA-NC 組比較，siRNA-CDKL1 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中MMP-2 和MMP-9 蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01）；與siRNA-CDKL1 組比較，siRNACDKL1+BpV 組 和siRNA-CDKL1+SC79 組 乳 腺癌MCF-7 細(xì)胞中MMP-2 和MMP-9 蛋白表達(dá)水平升高（P<0.01）。見(jiàn)圖7。

圖7 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中MMP-2 和MMP-9 蛋白表達(dá)電泳圖（A）及直條圖（B）Fig.7 Electrophoregram (A) and hisgram (B) of expressions of MMP-2 and MMP-9 proteins in breast cancer MCF-7 cells in various groups

2.5 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中PTEN/Akt/mTOR 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平Western blotting 法檢測(cè)結(jié)果顯示：與siRNA-NC 組比較，siRNA-CDKL1 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中PTEN 蛋白表達(dá)水平升高（P<0.01），p-Akt 和p-mTOR 蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01），Akt 和mTOR 蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與siRNACDKL1 組 比 較，siRNA-CDKL1+BpV 組 乳 腺 癌MCF-7 細(xì)胞中PTEN 蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01），siRNA-CDKL1+SC79 組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中PTEN 蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），2 組細(xì)胞中p-Akt 和p-mTOR 蛋白表達(dá)水平升高（P<0.01），Akt 和mTOR 蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)圖8。

圖8 各組乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中PTEN/Akt/mTOR 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)電泳圖（A）和直條圖（B）Fig.8 Electrophoregram (A) and hisgram (B) of expressions of PTEN/Akt/mTOR signaling pathway related proteins in breast cancer MCF-7 cells in various groups

3 討 論

近年來(lái)，乳腺癌已取代肺癌成為全球發(fā)病率最高的癌癥，且患者預(yù)后差，年輕化趨勢(shì)明顯［8］。在乳腺癌的治療過(guò)程中，由于化療藥物的頻繁使用導(dǎo)致患者出現(xiàn)耐藥性和不良反應(yīng)，使得患者生存率降低［9］。因此，探討高療效、不良反應(yīng)少和預(yù)后好的乳腺癌治療方法十分重要。本研究以乳腺癌MCF-7細(xì)胞為研究對(duì)象，通過(guò)沉默細(xì)胞中CDKL1 基因并聯(lián)合PTEN 抑制劑BpV、Akt 激動(dòng)劑SC79 進(jìn)行干預(yù)，觀察細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的變化，并探討可能的作用機(jī)制。本研究結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染siRNA可降低MCF-7 細(xì)胞中CDKL1 mRNA 和蛋白表達(dá)水平，沉默CDKL1 基因可抑制乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力，其可能通過(guò)靶向促進(jìn)PTEN 表達(dá)，進(jìn)而抑制下游Akt/mTOR 信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

CDKL1 是CDKL 家族5 個(gè)成員之一，其表達(dá)水平與腫瘤增殖失控、侵襲轉(zhuǎn)移和凋亡抵抗等特征有關(guān)。研究［10］顯示：CDKL1 在多種腫瘤組織中高表達(dá)，在人黑色素瘤中，下調(diào)CDKL1 基因表達(dá)可抑制人黑色素瘤A375 和MV3 細(xì)胞生長(zhǎng)和集落形成能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡；在胃癌中，沉默CDKL1基因可抑制胃癌MGC-803 和SGC7901 細(xì)胞增殖并促進(jìn)凋亡［11］；在食管癌中，下調(diào)CDKL1 基因表達(dá)可抑制食管癌細(xì)胞增殖和侵襲能力，從而抑制食管癌的惡性發(fā)展［12］。本研究結(jié)果顯示：采用siRNA技術(shù)沉默CDKL1 基因表達(dá)可抑制乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力，并能促進(jìn)PTEN 表達(dá)。但在乳腺癌中CDKL1 與PTEN 的關(guān)系研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

PTEN 是一種具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白質(zhì)磷酸酶活性的強(qiáng)大的腫瘤抑制基因［13］，在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)控中起重要作用［14］，自發(fā)現(xiàn)以來(lái)受到眾多學(xué)者的關(guān)注。細(xì)胞中PTEN 功能異常會(huì)導(dǎo)致相關(guān)的 Akt 信號(hào)激活或抑制，進(jìn)而影響其下游信號(hào)通路［15］。PTEN 典 型 功 能 之 一 是 介 導(dǎo)Akt/mTOR 信號(hào)通路影響腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，PTEN 表達(dá)上調(diào)可抑制p-Akt 和p-mTOR 表達(dá)，從而抑制腫瘤惡性發(fā)展［16］。QIN 等［17］研究顯示：表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（epigallocatechin gallate ，EGCG） 可上調(diào)卵巢癌SKOV3 細(xì)胞中PTEN 表達(dá)，阻斷Akt/mTOR 信號(hào)通路，從而抑制癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡。MMP-2 和MMP-9 屬于基質(zhì)金屬蛋白酶家族，由細(xì)胞分泌，通過(guò)破壞分解細(xì)胞外基質(zhì)促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、浸 潤(rùn) 和 轉(zhuǎn) 移［18-19］。BINLATEH 等 研 究［20］顯示：蟲(chóng)草素通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，抑制MMP-2 和MMP-9 活性，從而抑制口腔鱗癌HSC-4 細(xì)胞遷移和侵襲。本研究結(jié)果顯示：沉默CDKL1 可抑制乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力，并上調(diào)PTEN 蛋白表達(dá)水平，下調(diào)MMP-2、MMP-9、p-Akt 和p-mTOR 蛋白表達(dá)水平，提示沉默CDKL1基因可能通過(guò)靶向促進(jìn)PTEN 表達(dá)，進(jìn)而抑制下游Akt/mTOR 信號(hào)通路來(lái)抑制乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，這與YANG 等［21］研究結(jié)果一致。聯(lián)合PTEN 抑制劑BpV 或Akt 激動(dòng)劑SC79 可逆轉(zhuǎn)沉默CDKL1 基因?qū)θ橄侔㎝CF-7 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的抑制作用；但聯(lián)合Akt 激動(dòng)劑SC79對(duì)沉默CDKL1 基因的細(xì)胞中PTEN 蛋白表達(dá)水平無(wú)影響，提示沉默CDKL1 基因通過(guò)調(diào)控PTEN/Akt/mTOR 信號(hào)通路來(lái)抑制乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。

綜上所述，沉默CDKL1 基因可抑制乳腺癌MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力，其可能是通過(guò)靶向促進(jìn)PTEN 表達(dá)，進(jìn)而抑制下游Akt/mTOR 信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。靶向CDKL1 可為乳腺癌的臨床治療提供新思路，對(duì)提高乳腺癌患者生存率有重要意義。