飼料中添加復方中草藥對虹鱒幼魚生長及免疫指標的影響

玄一凡，張藝川，魏凌俊，王茂林

(大連海洋大學，遼寧省北方魚類應用生物學與增養殖重點實驗室，遼寧 大連 116023)

虹鱒是一種適應性較廣的冷水性魚，隨著養殖規模的不斷擴大和集約化水平的不斷提高，虹鱒疾病頻發。目前，用化學藥劑或抗生素藥物治療虹鱒病害存在成本較高、魚體質減弱、污染養殖水體和周圍環境等缺點。針對該問題，虹鱒免疫技術的研究日漸成熟，各種復雜的免疫技術被逐漸運用到虹鱒養殖過程中。在現有技術中，復方草藥免疫方案是目前應用較為廣泛的一種方法，通過不同草藥的組合發揮綜合作用，提高虹鱒的整體免疫力，降低虹鱒免疫系統的失調率。復方中草藥不僅在提高虹鱒免疫力方面取得了重要成果，而且在防控虹鱒疾病應用上效果顯著。中草藥具有促生長、無藥物殘留、增強機體免疫力、來源廣泛等優勢，被稱為“天然抗生素”，作為添加劑應用到飼料產業上具有廣闊的前景。本試驗將白芷、枸杞、金銀花、廣藿香、葛根、五味子6種中草藥制成復方中草藥加到飼料中，探究其對虹鱒幼魚生長和免疫酶活性的影響。

一、材料與方法

1.試驗用飼料

試驗分為T1( 對照)、 T2(1% )、 T3(2% )、T4(3%)4組，其中T1組喂基礎飼料，基礎飼料主要成分見表1。白芷、枸杞、金銀花、廣藿香、葛根、五味子6種中草藥經超微粉碎后等比例混合成復方中草藥粉。將復方中草藥粉分別按1%、2%、3%的比例(質量分數，下同)添加于基礎飼料作為T2、T3、T4組飼料。

表1 基礎飼料主要成分%

2.試驗用魚

試驗選用體長、體重相近、平均個體重(10.830±0.140)克的健康虹鱒幼魚144 尾，暫養7天以適應養殖環境，養殖期間投喂基礎飼料。

3.試驗設計

試驗開始前停止喂食24 小時，將144 尾試驗用魚隨機分為4 組，T1(對照)組魚總重量為(129.869±1.271)克，T2(1%)組魚總重量為(128.836±2.154)克，T3(2%)組魚總重量為(130.620±2.140)克，T4(3%)組魚總重量為(130.493±1.670)克；每組3 個平行，每個平行12 尾。將12 個養殖小網箱放在養殖水槽中，用氣泵24 小時充氣增氧，并增設水泵模擬流水環境，水溫12～15℃，溶氧＞6 毫克/升，pH 6.9。養殖周期為30 天，每天8:00 和17:00 投喂飼料，每天投喂飼料至表觀飽食。每天19:30清理剩余飼料及糞便，同時換水，換水量約為1/2。

4.樣品采集

試驗結束后，停食24 小時，每組隨機選取3 尾，取肝臟組織置于離心管中(在低溫下操作)，標記后于-80℃冰箱中保存。

5.生長指標及酶活指標測定

取樣前稱重，用于計算終末均重、特定生長率；免疫酶的測定包括過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)，上述指標試劑盒均采購于南京建成生物工程研究所有限公司，按說明書操作進行測定。

二、結果與分析

1.復方中草藥對虹鱒生長指標的影響(表2)

表2 飼料中添加復方中草藥對虹鱒幼魚各項生長指標的影響

由表2可知，各組虹鱒幼魚的存活率無顯著性差異(P≥0.05)，但飼料中添加復方中草藥對虹鱒幼魚其他生長指標影響較為顯著(P＜0.05)。T2、T3 和T4 試驗組除飼料系數外，其他各項指標均高于T1組(對照組)；其中T3組魚的終末均重、特定生長率顯著高于其他組，而飼料系數顯著低于其他組(P＜0.05)；T3和T4組魚在攝食率上無顯著性差異。

2.復方中草藥對虹鱒幼魚免疫指標的影響

試驗結果表明，T4組魚肝臟組織中的CAT活性顯著高于T1(對照)、T2 組(P＜0.05)，T3 組與T4 組間無顯著性差異。T2、T3 組魚肝臟組織中的SOD 活性顯著高于T1(對照)組(P＜0.05)，T2、T3、T4 組間無顯著性差異。T3 組魚肝臟組織中的T-AOC 水平最高，但各試驗組間T-AOC 水平無顯著性差異。

三、討論

1.復方中草藥對虹鱒幼魚生長的影響

試驗表明由白芷、枸杞、金銀花、廣藿香、葛根、五味子制成的復方中草藥對虹鱒幼魚的生長有促進作用。有研究表明，植物多糖主要通過促進與生長相關激素的合成與分泌來促進脂類與糖的代謝，提高機體氨基酸與蛋白質合成，以達到促生長的作用，枸杞多糖可以提高動物的生長性能。陶云開(2022)等研究發現，枸杞多糖可提高羅非魚的消化酶活性，改善其腸道組織形態，從而影響羅非魚的生長發育，且以添加劑量為1.5 克/千克的效果最佳。李慶敏(2022)等研究表明，顆粒型全混合日糧中添加5%枸杞渣對育肥灘羊生長性能具有積極作用。王曼(2020)等發現用20%的發酵金銀花飼料代替基礎飼料，可以有效提高肥育豬的生長性能。劉志勇(2017)等研究表明文昌雞日糧中添加3%的五味子可以顯著提高生長性能及肉質。以上研究與本試驗所得結果相似，本試驗所添加的復方中草藥有效促進了虹鱒幼魚的生長，且2%的添加量組效果最好；3%的添加量組效果有所降低，可能是復方中草藥添加量略多，對虹鱒幼魚的消化系統造成了一定的影響，繼而攝食量有所降低造成的。

2.復方中草藥對虹鱒幼魚非特異性免疫的影響

通過測定虹鱒幼魚的肝組織抗氧化能力，發現復方中草藥具有改善虹鱒幼魚抗氧化能力的作用。T-SOD、T-AOC和CAT為重要的非特異性免疫指標。CAT 是將過氧化氫分解為水和氧的關鍵酶之一，是機體抗氧化系統的重要組成部分，過氧化氫酶活性大小體現了機體抗氧化能力的強弱。本試驗隨著復方中草藥添加量的增多，其有效提高了肝臟組織CAT 的活性，添加量為3%時較為顯著，而其他組提升不顯著。SOD是一種內源性抗氧化金屬酶，可以通過清除超氧陰離子自由基的毒性來保護細胞或組織免受傷害，在抗氧化、延緩機體衰老、改善機體免疫力等方面起著至關重要的作用。本試驗結果表明飼料中添加復方中草藥可以有效增強虹鱒幼魚肝臟中SOD的活性，說明復方中草藥能夠有效提高虹鱒幼魚的抗氧化能力。TAOC是機體內抗氧化能力的總體體現，表示各抗氧化物質和抗氧化酶等構成的總體抗氧化水平。已有研究表明投喂含有復方中草藥的飼料可有效提高水產動物的非特異性免疫能力。胡斌(2019)等發現飼料中添加5 克/千克由黃芩、黃柏、大黃、大青葉制成的復方中草藥，能提高養殖動物血漿SOD活性，增強機體抗氧化能力。王紅濤(2021)等研究表明飼料中添加蒲公英提取物，能有效提高鯉魚血清中的SOD、T-AOC、CAT活性。本試驗發現添加2%的復方中草藥可以提升虹鱒肝臟組織中的T-AOC水平，添加量為1%和3%時效果并不顯著。

四、小結

飼料中添加由白芷、枸杞、金銀花、廣藿香、葛根、五味子制成的復方中草藥能提高虹鱒幼魚的生長性能，其中以2%的添加量效果最佳。非特異性免疫力也有所提升，CAT 活性的提升以T4 組效果最顯著，T2 和T3 組的SOD 活性顯著升高，T3組的T-AOC活性顯著高于對照組。綜上，復方中草藥可顯著提高虹鱒幼魚生長性能，提高魚體非特異性免疫能力，但過量的復方中草藥也會對魚體造成不利影響，飼料中適宜添加比例為2%。