東莞地區女性健康體檢者HPV感染率、亞型分布特點及TCT篩查結果分析

沈誠，羅秀霞

1.東莞市橫瀝醫院檢驗科，廣東 東莞 523460；2.東莞市人民醫院檢驗科，廣東 東莞 523000

宮頸癌作為女性群體中較為多見的惡性腫瘤，其在我國的患病率僅低于乳腺癌，具有較高的致死率，且患病群體越來越趨向年輕化。該疾病的致病機制為人乳頭瘤病毒(HPV)感染，患者機體受損的宮頸上皮中極易寄生HPV，而HPV的寄生使其受損的宮頸上皮長時間處于感染狀態，兩者惡性循環從而出現上皮細胞的不典型增殖，造成上皮瘤變，而后惡化為宮頸癌[1-2]。目前已有科學研究表明，女性長期感染高危型HPV 病毒會誘發宮頸癌[3]，而將HPV病毒類型劃分為高危型與低危型的主要依據為其寄生于細胞中的活動性，其中低危型HPV 會引發生殖道炎癥、生殖器疣等，高危型HPV 會誘發宮頸癌前病變、宮頸癌等[4-5]。因個體所在區域及年齡等因素的不同，HPV亞型存在些許差異，因此為開展全面篩查宮頸癌并進行針對性防治，需事先分析并充分掌握本地區女性群體HPV感染的基因亞型及其分布特點。早期子宮病變篩查的基本方法為液基薄層細胞學檢查(TCT)，該項檢查方法與過去所采用的宮頸刮片相比敏感度和特異性更高，TCT 制備成片優勢明顯，所展現圖片清晰方便進行閱片，但其在臨床篩查宮頸病變中仍存在一定局限性[6-7]。本研究旨在探討東莞地區女性健康體檢者HPV 感染率、亞型分布特點及TCT 篩查結果，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性收集2021 年1 月至2022年6 月于東莞市橫瀝醫院進行HPV 分型檢測及TCT篩查的300 例女性健康體檢者的臨床資料。年齡23～71 歲，平均(37.32±6.28)歲。納入標準：(1)均為健康體檢者；(2)資料完整。排除標準：(1)不符合納入標準；(2)接受過治療、化療或宮頸手術；(3)患有宮頸癌等婦科疾病。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 受檢者統一取截石位，使用一次性窺陰器將陰道打開，宮頸呈完全暴露狀態，使用無菌棉簽輕輕刷取受檢者宮頸的分泌物，將宮頸刷緩緩深入，使中央刷毛部分插入受檢者子宮頸口，較短的刷毛能完全接觸到受檢者子宮頸口，沿順時針方向緩慢旋轉5 圈以上，保證宮頸刷上沾取到脫落的宮頸細胞，將宮頸刷頭推入細胞保存液中保存，將沾取的宮頸細胞充分漂洗到保存液中，可適當震蕩瓶子，密封標記后放置合適溫度的環境下待檢。

1.2.2 HPV 分型檢測 采用通用引物多重PCR擴增及流式熒光雜交分型檢測法同時對HPV6、11、16、18、26、31、33、35、39、40、42、43、44、45、51、52、53、55、56、58、59、61、66、68、81、82、83 等27 種型別進行檢測。試劑盒共設有2類探針及28顆分類微球，對分類微球進行探針包被，探針信號為陽性時即判定該型別HPV 陽性。HPV 分型檢測時，第一步先PCR 擴增待檢測樣本的DNA，依據堿基互補配對的原則，將擴增得到的PCR 產物與分類微球上交聯的探針進行雜交，隨后加入熒光標記物以標記反應，后在流式熒光檢測儀上對熒光信號進行檢測。若擴增得到的PCR 產物與分類微球上交聯的探針完全配對，那么分類微球上相應探針捕獲到標有Biotin 的PCR 產物，加入熒光標記SA-PE 后形成微球-探針-PCR 產物-Biotin-SA-PE復合物，在檢測儀上就能夠檢測到分類微球的熒光信號。若擴增得到的PCR 產物與分類微球上交聯的探針不配對，那么分類微球的熒光信號為背景信號，通過軟件對所得到的數據進行分析后，可以直接判斷結果。整個檢測過程由有專業證書的操作人員在PCR 實驗室內嚴格按照規章制度及操作說明進行。

1.2.3 TCT 篩查 對受檢者脫落的宮頸細胞進行采集，完成后統一安排置于自動液基薄層細胞制片儀(ThinPrep 5000 Processor)上自動制片，95%酒精固定，采用巴氏染色法進行染色后置于生物顯色鏡下進行觀察。依據TBS 分類可將宮頸病變診斷為無上皮內病變或惡性改變(NILM)、非典型鱗狀細胞(ASC-US)、低度鱗狀上皮內病變(LSIL)、高度鱗狀上皮內病變(HSIL)以及鱗狀細胞癌(SCC)。NILM 判定為TCT篩查結果陰性，其余4類均為陽性。

1.2.4 病理活檢 若受檢者TCT篩查結果為陽性需進一步行陰道鏡檢查，儀器選用飛利浦金科威SLC-2000B，做5%冰醋酸試驗和5%盧戈式碘試驗，在受檢者疑似病變的部位取宮頸活檢，組織送病理檢查；對于未發現病變的受檢者，可以常規在宮頸3 點、6 點、9 點、12 點處取宮頸活檢，組織送病理檢查。病理檢查結果通常為慢性炎癥、宮頸上皮內瘤變Ⅰ級(CINⅠ)、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌(CC)。慢性炎癥判定為病理檢查結果正常，其余4 類均為病理檢查結果異常。

1.3 統計學方法 應用SPSS20.0 統計軟件進行數據分析，計數資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 東莞地區女性健康體檢者的HPV 感染情況 300 例女性健康體檢者的HPV 感染率為17.00%(51/300)，其中單一感染的陽性占比、感染率均明顯高于雙重感染和多重感染，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 HPV基因亞型感染分布情況 51例陽性標本中共檢測出15種高危型和5種低危型，其中高危型HPV 感染率最高的亞型為HPV-52 (5.00%，15/300)，低危型HPV 感染率較高的亞型為HPV-81 (2.00%，6/300)，見表2。

表2 HPV基因亞型感染分布情況Table 2 Distribution of HPV gene subtypes infection

2.3 不同年齡組體檢者的HPV感染情況 ＞55歲年齡組體檢者的HPV感染率明顯高于其他年齡組，差異有統計學意義(P＜0.05)；＜25歲、25～35歲、36～45歲、46～55 歲組患者的HPV感染率比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，見表3。

表3 不同年齡組體檢者的HPV感染率比較(例)Table 3 Comparison of HPV infection rate among different age groups(n)

2.4 HPV、TCT 單獨及聯合篩查對宮頸病變的檢出率比較 HPV 聯合TCT 篩查宮頸病變的陽性檢出率為18.34%，明顯高于TCT 單獨篩查的3.33%，差異有統計學意義(P＜0.05)，而聯合篩查與HPV 單獨篩查的陽性檢出率比較差異無統計學意義(P＞0.05)，見表4和表5。

表4 HPV、TCT篩查宮頸病變的結果(例)Table 4 Results of cervical lesions screened by HPV and TCT(n)

表5 HPV、TCT篩查宮頸病變的檢出率Table 5 Detection rate of cervical lesions by HPV and TCT screening

3 討論

HPV作為最常見的性傳播病毒，是宮頸癌的主要病因，患者往往因過早接觸性生活、性伴侶更換頻繁、經常服用避孕藥等行為感染HPV病毒[8]。患者感染后機體免疫力可以清除大部分HPV病毒，但長期感染高危型HPV病毒會造成多個部位癌前病變。因此，充分分析并掌握本地區女性群體的HPV 感染狀況及基因亞型分布、年齡分布等特征，以此為基礎及早、準確篩查宮頸癌的相關危險因素，并加以預防，不僅可以顯著降低宮頸癌及相關疾病的發病率，同時還可大大降低患者的死亡率。

本研究顯示，東莞地區300 例女性健康體檢者的HPV 感染率為17.00%，其中與雙重感染和多重感染的陽性占比、感染率相比，單一感染的陽性占比、感染率明顯更高。東莞地區女性健康體檢者的HPV 感染率較高，分析其原因可能與受檢者的年齡、從事職業、是否過早接觸性生活、性伴侶的多少等因素密切有關；感染類型多為單一感染，但也存在雙重和多重感染，雙重和多重感染會進一步增加宮頸癌的風險，因此，加強對女性HPV 的早期篩查及感染類型的檢測對宮頸癌的診斷和針對性防治有著重大意義，針對雙重和多重感染的患者，采取物理及藥物治療的效果更好[9-10]。本研究還發現，51 例陽性標本中共檢測出15種高危型和5種低危型，其中高危型HPV感染率最高的亞型為HPV-52，低危型HPV 感染率較高的亞型為HPV-81，與亞洲女性HPV感染情況基本相符，但因本研究選取的研究對象數量較少，與其他研究報道仍有一定差異性，且本研究顯示＞55 歲年齡組體檢者的HPV 感染率明顯高于其他年齡組，其中36～45 歲和＞55 歲年齡組的感染率較高，由此可見在女性整個年齡段中會出現兩次HPV 感染的高峰。分析原因，36～45 歲女性HPV暴露機會不斷累積增加，身體機能也不斷下降，機體內激素分泌開始出現紊亂，生理環境、生理結構發生改變，且機體的抵抗力不斷下降，因此導致HPV感染概率也會增加[11-12]。＞55 歲女性為絕經期，該年齡段女性群體的卵巢功能明顯減退，雌激素水平也明顯降低，同時乳酸桿菌減少及陰道pH 值變化等原因引起機體免疫功能減退，由此導致其清除HPV 病毒的能力大大減弱，最終造成此年齡段HPV 感染率相比其他年齡段更高[13-14]。因此需進一步強化對36～45歲和＞55 歲女性宮頸病變及宮頸癌的篩查力度，并做好針對性防治工作，鼓勵HPV 感染高峰年齡段女性保持良好的生活作息，合理飲食并適度鍛煉，從而增強機體抵抗力。

有研究顯示，對于相關危險因素及早進行篩查及干預能夠顯著減少宮頸癌的患病率[15]。TCT、HPV、陰道鏡活檢在宮頸癌篩查中均有一定的優劣勢，將其搭配應用進行合理聯查可有效互補。本研究發現相比HPV、TCT 單獨篩查，HPV、TCT 兩者聯合篩查對宮頸病變的陽性檢出率高于TCT單獨篩查，差異有統計學意義(P＜0.05)，但聯合篩查與HPV 單獨篩查的陽性檢出率比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，表明兩者聯合對宮頸病變的篩查價值較高。究其原因在于行TCT篩查可以初步判斷受檢者宮頸細胞是否有異常，且其臨床操作較為簡單方便，適用于大范圍群檢當中；但該項檢查弊端在于需要掌握一定的取樣技術，人為的誤差可能導致漏診、過度診斷等差錯[16-17]。HPV 感染作為宮頸癌患者的主要病因，有效評估受檢者是否感染HPV 對于宮頸癌的臨床篩查及防治起到關鍵作用。但陰道鏡病理活檢為有創檢查，并不適合應用于大范圍群檢當中，且HPV分型檢測并不能單獨作為篩查標準，因此可結合HPV與TCT共同進行篩查以獲得最佳檢查結果。體檢醫師在篩查宮頸病變時，除了嚴格遵守篩查規定，同時也應當遵循個性化原則，結合受檢者以往的體檢結果詳細詢問基本信息，為患者制定合理適宜的篩查方案；對宮頸癌發病高峰年齡段受檢者應建議其進行HPV、TCT 聯合篩查，可以更細致地觀察其宮頸細胞學形態情況，從而準確判斷其是否感染HPV[18-19]。

綜上所述，東莞地區女性健康體檢者的HPV感染率較高，多為單一感染，感染率較高的感染類型為HPV-52、HPV-81，高 發 人 群 為36～45 歲 和＞55 歲；HPV、TCT 兩者聯合篩查能夠顯著提高對宮頸病變的陽性檢出率，更利于患者早期診斷、治療及促進預后。體檢醫師應合理建議受檢者進行HPV、TCT 聯合篩查，及早診斷并及時開展針對性干預治療。同時，各地區應積極進行HPV 感染相關知識的宣傳及教育，提倡和諧、健康的性生活，同時提高適齡女性群體接種HPV疫苗的意識，有效降低HPV感染率。