標準免疫抑制療法聯合異甘草酸鎂治療自身免疫性肝炎患者外周血B細胞和調節性B細胞變化*

陳雅君,朱 婧,李 璐,何 欽

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)主要表現為血清轉氨酶異常升高和血清自身抗體陽性等。隨著病情的進一步發展,部分患者可以發生肝硬化和肝衰竭[1]。主要采用藥物治療AIH患者,除了標準的免疫抑制治療以外,異甘草酸鎂屬于一種肝細胞保護劑,主要具有抗炎和護肝等作用,可在一定程度上有利于AIH患者肝功能的改善。采取異甘草酸鎂輔助治療AIH患者取得了較好的療效[2,3]。中醫理論認為,AIH是由于肝郁脾虛、肝陰虧虛等所引發[4]。異甘草酸鎂具有降低血清轉氨酶的作用,應用于治療慢性肝炎和早期肝硬化患者效果較好[5]。本研究探討了應用標準免疫抑制療法聯合異甘草酸鎂治療AIH患者的療效及其外周血B細胞和調節性B細胞表型變化,現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 病例來源 2017年4月～2022年4月我院收治的AIH患者108例,男性42例,女性66例,年齡為26～65歲,平均年齡為(39.6±5.6)歲。符合《自身免疫性肝炎診斷和治療共識(2015年)》的診斷標準[6]。排除標準:伴有其他肝臟疾病或伴有嚴重的心腦血管疾病。本研究經我院醫學倫理委員會審核、通過,患者簽署知情同意書。

1.2 治療方法 給予對照組患者標準的免疫抑制治療方案治療,具體為潑尼松龍(江西國藥有限責任公司) 0.5 mg.kg-1d-1口服,4周后每周減量5 mg,至7.5～10 mg.d-1維持,硫唑嘌呤(北京嘉林藥業股份有限公司)50 mg.d-1;觀察組患者在對照組治療方案的基礎上加用異甘草酸鎂(正大天晴藥業集團股份有限公司)100 mg口服,3次/d。兩組均連續治療半年,觀察治療效果。

1.3 實驗室檢測 使用全自動生化分析儀檢測血生化指標;采用免疫濁度試驗法檢驗血漿免疫球蛋白水平(上?？道噬锟萍加邢薰?;外周血B細胞和調節性B細胞亞群檢測:使用藻紅蛋白-德克薩斯紅(ECD)標記的小鼠抗人CDl9單克隆抗體(1:20,美國Beckman公司)、藻紅蛋白-花青素(PE-Cy5)標記的小鼠抗人CD27單克隆抗體(1:20,美國eBioscience公司)、異硫氰酸熒光素(FITC)標記的小鼠抗人CD38單克隆抗體(1:20,美國BioLegend公司)、PE標記的小鼠抗人CD24單克隆抗體(1:20,美國BD公司)、熒光染料標記的同型對照IgG包括ECD標記的小鼠IgG(1:20)、FITC標記的小鼠IgG(1:20,美國Beckman公司)、PE-Cy5標記的小鼠IgG(I:20,美國BioLegend公司)和PE標記的小鼠IgG(I:20,美國BioLegend公司);紅細胞裂解液購自美國Beckman公司,COULTER EPICS XL型流式細胞儀和Allegra X-12型溫控離心機購自美國Beckman公司。采集空腹靜脈血4 ml,取全血50 μl,分別滴加ECD、PE—Cy5、FITCP和E標記的小鼠抗人CDl9、CD27、CD38和CD24單克隆抗體各50 μl,同時設立同型對照,分別加入由ECD、PE-Cy5、FITC和PE標記的小鼠IgG各50 μl,室溫下避光孵育20 min,每管滴加紅細胞裂解液250 μl、40℃水浴10 min,滴加磷酸鹽緩沖液5 ml,終止紅細胞裂解反應,于4℃、1600 r/m離心5 min,棄上清液,加入磷酸鹽緩沖液500 μ1,輕微震蕩后形成細胞懸液,上流式細胞儀檢測并計數。

2 結果

2.1 療效情況 在治療半年末,觀察組生化學應答率為85.2%(46/54),顯著高于對照組的66.7%(36/54,P<0.05)。

2.2 兩組肝功能指標比較 在治療半年末,觀察組血清肝功能指標顯著低于對照組(P<0.05,表1)。

表1 兩組肝功能指標比較

2.3 兩組血清球蛋白和免疫球蛋白水平比較 在治療半年末,兩組血漿IgG、IgM及血清GLO水平無顯著性統計學差異(P>0.05,表2)。

表2 兩組血漿免疫球蛋白和血清球蛋白水平比較

2.4 兩組外周血B細胞和調節性B細胞亞群百分比變化比較 在治療后,觀察組患者外周血CD19+B細胞、CD19+IL-10+B細胞、CD19+CD24hiCD38hi調節性B細胞和CD19+CD24hiCD27+調節性B細胞百分比顯著高于對照組,而CD19+CD27+CD38++漿細胞和CD19+CD27-CD38-/+幼稚B細胞百分比顯著低于對照組(P<0.05,表3、表4)。

表3 兩組外周血B細胞和調節性B細胞亞群百分比比較

表4 兩組外周血B細胞和調節性B細胞亞群百分比比較

3 討論

AIH屬于一種自身免疫系統過度激活引發的慢性肝臟疾病。該病的特征有肝功能異常、高球蛋白血癥等[7]。據相關報道顯示,AIH的發病率呈逐年升高趨勢,尤其在歐洲、美國,具有較高的患病率[8]。AIH患者以女性居多,若不及時采取相應的治療措施,則預后較差。由于AIH的發病較為隱匿,患者發病后癥狀不明顯,確診時多數病情已遷延,從而增加了治療難度。

目前,治療AIH主要采用糖皮質激素,或聯合硫唑嘌呤。作為一種甘草提取物,異甘草酸鎂的適應證為慢性病毒性肝炎,其可有效改善肝功能異常[9]。但單獨使用該藥治療效果有待提升。中醫學中將肝病歸為“脅痛、肝癖、肝水”等范疇,應予以活血化瘀、疏肝健脾的治療方法[10-12]。有學者研究顯示,對于AIH患者采用異甘草酸鎂治療,治療后患者肝功能指標有了較大的改善[13]。在AIH發生后,持續性的炎癥可使細胞外基質的合成明顯增多,從而使肝臟的正常結構遭受破壞,進而導致血清ALT、AST、TBiL和ALP水平顯著上升[14]。本研究結果顯示,在治療半年后,觀察組患者生化學應答率顯著高于對照組,肝功能指標比對照組顯著降低,提示聯合異甘草酸鎂治療AIH患者有助于肝功能的改善,其原因在于異甘草酸鎂具有較強的護肝、降酶作用,可降低轉氨酶,起到改善肝功能指標,減輕肝纖維化的作用[15],與有關研究結果相符[16]。有研究還顯示,聯合異甘草酸鎂治療還可以改善血清肝纖維化指標,提示異甘草酸鎂聯合應用于AIH患者的治療有助于延緩肝纖維化進程,其原因可能在于異甘草酸鎂可抑制相關蛋白的表達,減少細胞外基質成分合成,從而延緩肝纖維化進程。同時,異甘草酸鎂治療也可調節免疫功能紊亂,控制自身免疫反應過度激活[17,18]。

相關報道指出,采用利妥昔對難治性AIH患者進行治療可有效緩解臨床癥狀[19],由此可以證實B細胞與AIH的發病有著密不可分的關系。B細胞的表型是克隆多樣性細胞表面免疫球蛋白受體的細胞群。近年來的研究顯示,B細胞可通過結合T細胞并產生抑制性細胞因子對免疫反應進行負向調控,而這類細胞被稱之為調節性B細胞[20]。本研究結果顯示,在治療半年后,觀察組患者外周血CD19+CD27+CD38++漿細胞和CD19+CD27-CD38-/+幼稚B細胞百分比顯著低于對照組。肝組織漿細胞浸潤程度可作為AIH患者肝損傷判定的主要依據,AIH患者漿細胞水平明顯上升。同時,AIH患者記憶B細胞比例較正常人群明顯上升[20]。本研究結果還發現在治療半年后,觀察組患者外周血CD19+CD24hiCD38hi調節性B細胞和CD19+CD24hiCD27+調節性B細胞百分比顯著高于對照組,表明采用免疫抑制劑聯合異甘草酸鎂治療后,體內具有負向免疫調節功能的B細胞升高,提示外周血調節性B細胞可能參與了AIH的發生與發展。

綜上所述,應用免疫抑制劑聯合異甘草酸鎂治療AIH患者可提高生化學應答率,有助于改善肝功能指標,抑制免疫反應,同時能調節外周血調節性B細胞功能。深入分析和研究調節性B細胞及其與其他免疫調節細胞的關系,將為闡明AIH的發病機制和治療提供線索。