杏鮑菇工廠化液體菌種生產技術探討

張翠娥，趙書光，張亞楠

（灌南縣農業技術推廣中心，江蘇灌南 222500）

0 引言

杏鮑菇，又稱刺芹側耳，是典型的亞熱帶草原—干旱沙漠地區的野生食用菌，同時也是近年來開發栽培成功的集食用、藥用、食療于一體的珍稀食用菌新品種。近幾年，得益于政府鼓勵扶持杏鮑菇種植產業的發展，我國杏鮑菇產量呈不斷增長的態勢。灌南縣是我國食用菌行業主產基地縣之一，是江蘇省食用菌生產基地縣，食用菌工廠化生產集聚度居全國前列。

1 灌南縣工廠化杏鮑菇生產現狀

目前，灌南縣食用菌產業園已入駐食用菌工廠化生產企業近40家，其中近半數是生產杏鮑菇的工廠化企業。杏鮑菇工廠化生產關鍵技術基本成熟，液體菌種的生產技術也基本穩定，灌南食用菌產業園內的菌菇生產企業已全部采用液體菌種，取代了以前的固體菌種，在帶動農民就業方面和經濟效益方面，效果均十分顯著。液體菌種具有生產周期短、菌絲生長快的優勢，一般經振動或通氣培養3～7天即可培養好菌種，且液體菌種菌齡均一。

然而，液體種因培養基營養豐富，加之是液態，對運輸條件要求嚴格，稍有不慎即會造成菌種污染，不如固體菌種運輸方便。液體種在制作中，由于液體培養基營養豐富，故極易污染雜菌，污染發生率要高于固體種制作。液體菌種的質量檢查也要難于固體菌種，不僅需要一定的技術技能，還需要一定的檢測設備，一般生產者不易掌握。生產者在使用液體菌種栽培時應注意，須采用與之相配套的栽培方法和栽培技術，才能最大限度地發揮液體菌種的優勢。

2 主推培養基配方

2.1 母種配方

采用常規PDA培養基配方。

2.2 一級液體菌種（三角瓶原種）配方

馬鈴薯200 g、瓊脂18 g、葡萄糖20 g，純凈水 1 000 ml，pH值自然。

2.3 二級液體菌種（發酵罐栽培種）配方

在參考近年來國內食用菌科研院所和部分杏鮑菇工廠化生產企業液體菌種研究工作的基礎上，食用菌生產企業試驗篩選的主推液體菌種配方是豆粕粉5 kg、酵母膏4 kg、白糖2 kg、磷酸二氫鉀0.5 kg、硫酸鎂 0.5 kg、消泡劑100 ml，水1 000 L，pH值自然。

2.4 出菇栽培包配方

生產企業試驗篩選的主推配方是雜木屑35%、玉米芯25%、麥麩27%、玉米粉5%、豆粕粉5%、石灰2%以及輕質碳酸鈣1%。滅菌前，培養料含水量為64%～66%，pH值自然。

3 液體菌種制備工藝

3.1 一級液體菌種制作與菌絲培養

按照PDA培養基配方制作步驟，除去瓊脂，配制成PDA液體培養基，以1 000 ml規格的三角瓶為容器，1袋加入培養基250 ml，在1.05 kg/cm2壓力下滅菌30 min，冷卻后接入2塊約0.5～1.0 cm2大小的斜面菌種塊，靜置24 h，然后在25℃、轉速120轉/min、避光條件下，搖床振蕩培養7～8天，觀察菌絲生長情況。培養結束的標準：培養液清澈透明，液中懸浮著大量小菌絲球，并伴隨杏鮑菇特有的香味。

生產上，在轉接二級液體菌種前，要對一級液體菌種進行取樣檢測。首先，以“三看一聞”即看菌液顏色、黏稠度、菌球形態及數量，聞氣味的方法進行初篩，排除感染雜菌的三角袋菌種。其次，同批次的隨機抽樣2～3袋，利用顯微鏡（存放于空氣百級凈化室內）檢測是否存在雜菌菌絲體。

3.2 二級液體菌種制作與菌絲培養

3.2.1 洗罐與煮罐

一是清洗與檢查：新購的或使用過的發酵罐，每次制種前都必須清洗干凈，確保罐體內壁無懸掛物、菌球，排放出來的水清澈、無污染物。二是煮罐：正常生產上不需要煮罐，只有在更換品種、上批污染、啟用新罐時才煮罐。首先，關閉接種閥和進氣閥，從進料口加水至視鏡中線處。然后，關閉排氣閥，打開電源升溫至100℃排冷空氣，并微微打開排氣閥升溫至121℃滅菌30～40 min。最后，待鍋內溫度降至100℃以下時，排除罐內水。在煮罐的同時，按配方煮料、滅濾芯及接種槍。

3.2.2 菌種制作

一是加料：關閉排氣閥和接種閥（出料口），通過進料口加入培養基（添加量為罐容積的70%～80%）和消泡劑（食品級、添加量為培養基重量的0.5%～1%）。加料高度以稍高于視鏡為宜，并關緊進料口閥門。二是滅菌及冷卻：關閉所有閥門，打開電源加熱，升溫至100℃時排冷空氣，為防止料液糊化，直接通入空氣攪拌。升溫至121℃滅菌30 min。滅菌結束后，利用循環冷卻水降溫至25℃～28℃備用。三是接種：準備好棉花火圈、打火機、95%酒精、手套等用品，待鍋內壓力降為0時，將火圈放在進料口上，在火焰保護下打開進料蓋，加入1瓶（三角瓶）一級液體菌種，并迅速關閉進料口。

3.2.3 菌絲培養及取樣觀察

啟動設備，微開排氣閥使罐壓升至0.02～0.04 Mpa，保持20℃～22℃和1.0～1.2 m3/h通氣量條件培養24 h后，隔24 h從接種口取樣1次。每次取樣操作，要在百級空氣凈化室內的超凈工作臺內進行，先排掉1 000 ml菌液，然后取樣100 ml，置于無菌三角袋（250 ml規格）中，并用鋁箔紙封口。通常情況下，培養5～7天即可制成菌種。

3.3 液體菌種質量檢測

發酵罐內液體菌種的檢測方法，主要包括周期較長PDA平板（直徑10 mm規格）劃線培養法和周期較短的顯微鏡檢測法兩種。前者，在超凈工作臺內，用接種鉤蘸取樣品后在平板上畫曲線，然后置于28℃～30℃恒溫培養箱內培養24～72 h，以無雜菌菌落為宜。后者，操作方法同一級液體菌種檢測方法相同，均在顯微鏡下完成。通常情況下，培養5～7天即可制成菌種。

4 配套技術

4.1 培養料攪拌與裝袋

按配方要求，將木屑、玉米芯、甘蔗渣、麩皮等主料加入攪拌機，攪拌20 min，接著加入豆粕粉、玉米粉，繼續攪拌10 min。然后，一邊加入石灰、輕質碳酸鈣等調節酸堿度的輔料，一邊加水再攪拌30 min，即可裝袋。生產上，常用對折口徑（規格17～19 cm×38 cm×0.005 cm）的高壓聚丙烯塑料袋，裝入濕料1.2～1.4 kg/袋，培養料高19～21 cm，料中間預埋塑料打孔棒。

4.2 滅菌與冷卻接種

在工廠化生產時，栽培包在121℃～123℃高壓條件下滅菌2 h即可。待料溫冷卻至25℃以下時，在凈化室超凈單元下、在罐內壓力0.03～0.05 Mpa時用液體接種機接種，接入菌種20 ml/袋。

5 結語

菌種制作是食用菌栽培的第一步。一個優良的菌種和一套與其相對應的高效率的制種工藝，既取決于科學的制種技術，也有賴于合理的制種設備。隨著食用菌產業的發展，食用菌液體菌種在固體菌種制作的基礎上不斷改進和提高，目前技術穩定，利用廣泛，效益顯著。灌南食用菌生產企業在液體菌種制作過程中，已經克服了液體菌種污染率高、不耐儲存等缺點，充分顯示出生產規模化、控制自動化、生產無菌化、發菌高速化的優勢。其具有生產周期短、菌齡整齊、接種方便等諸多優點，適宜工廠化生產，是食用菌產業的發展方向。