肝細胞癌患者血清FGFR1和VEGFA水平與臨床病理特征及預后的相關性分析*

孟德敏 李 媛 孫 濤 梁志偉 孟 瑜 侯建慧

鄭州大學第一附屬醫院肝膽胰外科三病區 (河南 鄭州, 450000)

肝細胞癌(HCC)主要是由于細胞周期失調、DNA甲基化改變、染色體不穩定等多種分子障礙導致的疾病,HCC發病機制復雜,由乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染引起的慢性肝炎是HCC的主要危險因素[1,2]。HCC占全世界原發性肝癌病例的80%以上,是全球癌癥相關死亡的第四大最常見原因,其發病率和死亡率呈上升的趨勢[3]。早期HCC可通過手術切除、局部消融、肝移植等手段進行治愈性治療,而中晚期HCC的治療難、治愈率低[4],因此,尋找早期診斷HCC的生物標志物,對于HCC的早期發現、臨床治療和預后具有重要意義。目前HCC診斷的有用生物標志物仍然不足,可用的血清生物標志物顯示出低敏感性和異質性[5]。成纖維細胞生長因子受體(FGFR)家族包括FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4,構成受體酪氨酸激酶,在細胞內傳遞不同成纖維細胞生長因子的信號。其中,基因擴增和染色體易位在內的遺傳變異會增加FGFR1的表達,FGFR1表達失調與乳腺癌、肺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、卵巢癌等多種癌癥有關[6,7]。血管內皮生長因子A(VEGFA)是一種大小約45 kDa的同型二聚體糖蛋白,可以促進血管生長和重塑、內皮細胞存活以及有絲分裂,在炎癥和腫瘤發生過程中發揮重要作用[8,9]。目前FGFR1、VEGFA水平在HCC患者血清中的表達,以及與臨床病理特征及預后的關系尚未報道。本研究通過檢測HCC患者血清中FGFR1、VEGFA的表達水平,分析其與患者臨床病理特征和預后的相關性,為HCC的有效診治和預后提供參考依據。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象 選取2018年1月至2019年12月于我院治療的168例HCC患者作為研究對象(HCC組),男91例,女77例,年齡30～75歲,平均為(53.67±6.37)歲;另選取168例同期門診健康體檢者作為對照組,男88例,女80例,年齡32～75歲,平均為(52.91±6.13)歲。比較兩組受試者的年齡和性別,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 納入及排除標準 納入標準:①所有患者均符HCC診斷指南[10]中的相關標準;②入組前無放、化療治療史;③研究對象本人詳知此項研究內容,并自愿簽署同意書。排除標準:①合并其他部位惡性腫瘤;②自身免疫性疾病患者;③精神異常或有溝通障礙;④病例資料或隨訪資料不完整患者。本研究經本院醫學倫理委員會批準,遵循《世界醫學協會赫爾辛基宣言》。

1.3 研究方法

1.3.1 樣本收集 HCC組患者入院次日、對照組體檢當日清晨空腹,靜脈采血3～5 ml于干燥試管進行離心,離心半徑為12 cm,時間為10 min,分離血清后,分裝于無菌EP管中,于-20℃冰箱中保存,待檢。

1.3.2 血清FGFR1、VEGFA水平的檢測 使用SpectraMax iD5-多功能酶標儀,采用FGFR1酶聯免疫試劑盒(上海酶聯生物科技有限公司)和VEGFA酶聯免疫試劑盒(上海酶聯生物科技有限公司),于450 nm處測定血清FGFR1、VEGFA水平。

1.3.3 預后隨訪 主要以電話及門診復查的方式對所有HCC患者進行為期3年的隨訪,患者出現癌因性死亡時則隨訪結束,隨訪截止時間為2022年12月,患者隨訪率為100%,生存時間為出院日期至患者最終隨訪截止時間。

2 結果

2.1 HCC患者血清中FGFR1和VEGFA水平的表達分析 與對照組相比,HCC組血清FGFR1、VEGFA水平顯著升高(P<0.05)。見表1。

表1 對照組與HCC組血清中FGFR1和VEGFA水平比較

2.2 血清FGFR1和VEGFA水平對HCC的預測價值 血清FGFR1預測發生HCC的曲線下面積(AUC)為0.652;血清VEGFA預測發生HCC的AUC為0.740;二者聯合預測發生HCC的AUC為0.774。二者聯合預測優于FGFR1、VEGFA各自單獨預測(Z聯合檢測-FGFR1=4.420、Z聯合檢測-VEGFA=2.293,P<0.001、0.022)。見表2,圖1。

圖1 血清FGFR1、VEGFA水平預測發生HCC的ROC曲線

表2 血清FGFR1、VEGFA水平對發生HCC的預測價值

2.3 不同臨床病理特征的HCC患者血清中FGFR1、VEGFA表達水平比較 HCC患者血清中FGFR1、VEGFA的表達水平均與TNM分期、淋巴結轉移、分化程度顯著相關(P<0.05)。HCC患者中FGFR1、VEGFA表達水平。見表3。

表3 不同臨床病理特征的HCC患者血清FGFR1、VEGFA表達水平比較

2.4 HCC患者血清FGFR1、VEGFA表達水平與預后的關系 根據ROC曲線分析,確定預測發生HCC的血清FGFR1、VEGFA截斷值分別為6.36 μg/L、62.54 ng/mL,分為FGFR1高表達組99例(FGFR1表達水平>6.36 μg/L)和FGFR1低表達組69例(FGFR1表達水平≤6.36 μg/L);VEGFA高表達組103例(VEGFA表達水平>62.54 ng/mL)和VEGFA低表達組65例(VEGFA表達水平≤ 62.54 ng/ml)。

采用Kaplan-Meier法分析HCC患者血清FGFR1、VEGFA表達與患者預后的關系,結果顯示,血清FGFR1高表達組HCC患者3年累積生存率(74/99,74.75%)低于FGFR1低表達組(62/69,89.86%)(Log rank χ2=6.246,P<0.05);血清VEGFA高表達組HCC患者3年累積生存率(77/103,74.76%)低于VEGFA低表達組(59/65,90.77%)(Log rank χ2=7.126,P<0.05)。見圖2、3。

圖2 HCC患者血清FGFR1表達與患者3年累積生存率的關系

圖3 HCC患者血清VEGFA表達與患者3年累積生存率的關系

2.5 多因素Logistic回歸分析HCC患者預后的影響因素 以HCC患者3年內是否死亡為因變量(生存=0,死亡=1),以血清FGFR1(賦值:高表達=1,低表達=0)、VEGFA(賦值:高表達=1,低表達=0)、TNM分期(賦值:Ⅲ+Ⅳ=1,Ⅰ+Ⅱ=0)、淋巴結轉移(賦值:是=1,否=0)、分化程度(賦值:中/高分化=0,低分化=1)為自變量,進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示,血清FGFR1、VEGFA、TNM分期、淋巴結轉移、分化程度為HCC患者預后的影響因素(P<0.05)。見表4。

表4 多因素Logistic回歸分析HCC患者預后的影響因素

3 討論

如果HCC及早發現,臨床可能治愈并具有良好預后,但大多數HCC患者早期多無癥狀,確診時往往已是晚期,預后較差[11,12]。此外,HCC患者的預后存在高度異質性,取決于腫瘤負荷、基線肝功能、患者的體能狀態、治療方式等多種因素[13]。因此,尋找有效的預測HCC發生和評估預后的方法,對HCC患者的診治具有重要意義。

FGFR1編碼一種跨膜細胞因子受體,它包含3個免疫球蛋白樣結構域(D1、D2和D3)的細胞外區域、跨膜螺旋和細胞質酪氨酸激酶結構域,其相關信號通路參與組織的原腸胚形成、器官分化等人類胚胎的早期發育的過程[14]。Wang等[15]發現異位FGFR1信號通路通過促進腫瘤血管生成、重編程癌細胞代謝和增強腫瘤微環境中的炎癥等多種機制促進前列腺癌的發展。Chang等[16]發現FGF9與FGFR1互作并激活下游基因的表達,促進肺癌細胞增殖、上皮間質轉化、M2巨噬細胞浸潤及肝轉移。周昕等[17]發現FGFR1通過激活PI3K/AKT信號通路促進癌細胞增殖并抑制細胞凋亡,在頭頸部鱗狀細胞癌細胞中高表達。本研究結果顯示,HCC患者血清中的FGFR1表達水平顯著高于對照組,進一步分析了168例HCC患者3年隨訪資料,結果顯示FGFR1低表達的患者3年生存率較高,提示血清FGFR1水平可能通過激活HCC癌細胞增殖影響HCC的發生、發展和預后,對于初步判斷發生HCC以及患者預后具有一定的意義。

VEGFA是一種酪氨酸激酶血管活性糖蛋白,已成為生理和病理變化中血管生成過程的關鍵調節劑[18]。Qin等[19]發現缺氧會上調肺腺癌細胞系中VEGFA的蛋白水平,與正常組織相比,VEGFA的表達在肺癌組織中富集,是肺腺癌有價值的預后生物標志物。Stuchi等[20]發現甲狀腺腫和甲狀腺癌組織樣本中的VEGFA轉錄水平以及蛋白水平高于正常組織,其表達失調可導致甲狀腺癌的發展。本研究結果發現HCC患者血清VEGFA表達水平顯著高于對照組,168例HCC患者3年隨訪資料顯示,VEGFA低表達的患者3年生存率較高,提示血清VEGFA水平在HCC細胞惡變和患者預后的過程中可能發揮一定作用,有望成為作為HCC臨床診斷的潛在標志物。

Wu等[21]發現VEGFA在肝纖維化過程中可與FGFR1相互作用。Mao等[22]發現FGFR1、VEGFA都在血管生成中的過程中起著重要作用。ROC曲線顯示FGFR1、VEGFA二者聯合預測發生HCC的效能優于各自單獨預測,提示FGFR1通過與VEGFA互作對發生HCC具有重要指導價值。何曉蓉等[23]發現示肺鱗癌FGFR1的表達與淋巴結轉移、分化程度顯著相關。王燕等[24]發現多形性膠質母細胞瘤VEGFA的表達與組織分化程度、WHO分級密切相關。本研究進一步研究顯示HCC患者血清中FGFR1、VEGFA的表達水平均與TNM分期、淋巴結轉移、分化程度顯著相關。多因素Logistic回歸分析顯示,血清FGFR1、VEGFA、TNM分期、淋巴結轉移、分化程度為HCC患者預后的影響因素。以上結果表明血清FGFR1、VEGFA高表達影響HCC患者臨床病理參數,而且高表達者預后生存情況差,二者可能在HCC發生和預后方面發揮著重要作用。

綜上所述,HCC患者血清FGFR1、VEGFA水平與臨床病理參數及預后密切相關,二者聯合檢測預測發生HCC有較好參考價值。FGFR1、VEGFA參與HCC發生發展的具體機制仍需進一步探究。