磁微粒化學發光法檢測乙型肝炎血清標志物的臨床研究

劉曉倩 王輝 揭勤琴

基金項目：撫州市社會發展指導性科技計劃項目（133）

作者簡介：劉曉倩，女，本科，主管技師。

【摘要】 目的 探討磁微粒化學發光法檢測乙型肝炎血清標志物的臨床價值。方法 選取2021年3月—2022年1月廣昌縣人民醫院收治的100例乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染患者作為觀察組，同期健康體檢者100名作為對照組。所有入選對象均于清晨采集6 mL空腹血，離心處理后將血清標本分成2份，分別采用酶聯免疫吸附法與磁微粒化學發光法檢測血清內乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙型肝炎核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）、乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙型肝炎e抗體（hepatitis B e antibody，HBeAb）及前S1抗原（Pre-S1 antigen，Pre-S1Ag）。比較2種方法檢測HBV陽性檢出率、血清標志物陽性率及診斷效能。結果 磁微粒化學發光法檢測在觀察組中HBV感染陽性檢出率高于酶聯免疫吸附法，差異有統計學意義（χ2=4.348，P=0.037）；2種檢測方法在對照組中陽性檢出率相比，差異無統計學意義（χ2=0.592，P=0.442）；磁微粒化學發光法檢測HBsAb陽性率、HBcAb陽性率高于酶聯免疫吸附法，差異有統計學意義（P＜0.05）；磁微粒化學發光法檢測靈敏度、準確度較酶聯免疫吸附法高，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 2種方法檢測乙型肝炎血清標志物均具有良好價值，但磁微粒化學發光法檢測陽性檢出率、靈敏度、準確度更高，利于提高HBV感染診斷效能，為臨床后續治療工作開展提供參考。

【關鍵詞】 乙型肝炎；磁微粒化學發光法；酶聯免疫吸附法；血清標志物

中圖分類號：R446.6? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：1672-1721（2023）31-0096-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.31.032

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）持續感染所致，早期肝損傷尚不嚴重，無明顯癥狀。隨著乙型肝炎病情進展，可反復出現乏力、食欲減退、頭暈等癥狀，甚至可誘發肝脾腫大、肝掌等體征變化，若不及時救治，進展至肝硬化失代償期可嚴重損害肝功能[1-2]。同時，乙型肝炎具有較強的傳染性，可通過血液、母嬰及性接觸等多種途徑進行傳播，故早期明確診斷并予以規范化治療，對控制疾病進展及防控感染病傳播尤為重要。乙型肝炎的確診主要依賴于血清標志物檢測，包括乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎核心抗體（HBcAb）等，通過檢測上述標志物定量情況，能為乙型肝炎定性診斷提供充足依據。酶聯免疫吸附法為當前檢測常用方法，具有操作簡單、靈敏、快速、載體易于標準化等優勢，可及時明確血清標志物檢出情況，但長期應用發現該方法仍存在一定漏診風險，不利于乙型肝炎精準防治[3-4]。磁微粒化學發光法則為新一代檢測方法，該技術將免疫反應體系、免疫磁珠體系等結合，不僅靈敏度高，還兼顧檢測快、操作簡便等特點，易于自動化操作[5-6]。但磁微粒化學發光法在乙型肝炎中的具體檢測效果尚未明確，仍需深入研究。鑒于此，本研究旨在分析磁微粒化學發光法檢測乙型肝炎血清標志物的臨床價值，報告如下。

1? ?資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年3月—2022年1月廣昌縣人民醫院收治的100例HBV感染患者作為觀察組，同期健康體檢者100名作為對照組。觀察組男性59例，女性41例；年齡28～67歲，平均年齡（43.85±4.39）歲；對照組男性56名，女性44名；年齡29～68歲，平均年齡（44.05±4.46）歲。2組患者一般資料對比，差異無統計學意義（P＞0.05）。研究經醫學倫理委員會批準。

納入標準：經以HBV-DNA確診；精神狀態正常；臨床資料完整；患者及其家屬簽署知情同意書。排除標準：合并其他肝臟疾病者；惡性腫瘤者；妊娠或哺乳期女性。

1.2 方法 儀器采用酶標儀Elx-800（美國BIOTek）、全自動化學發光免疫分析儀Wan200+（廈門優邁科醫學儀器有限公司）、水浴箱420-A（江蘇新康醫療器械有限公司）、洗板機DNX-9620（北京普朗新技術有限公司）、離心機TDZ5-WS（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）。酶聯免疫吸附法試劑由中山生物工程有限公司及武漢康珠生物技術有限公司提供，磁微粒化學發光法試劑由廈門萬泰凱瑞生物技術有限公司提供。

所有入選對象均于清晨采集6 mL空腹血，以

3 000 r/min速度離心10 min，離心半徑10 cm，獲得血清后將其均分為2份，分別以酶聯免疫吸附法與磁微粒化學發光法檢測血清內HBsAg、HBsAb、HBcAb、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗體（HBeAb）及前S1抗原（Pre-S1Ag）水平。

酶聯免疫吸附法：先進行準備工作，將試劑盒取出后室溫下平衡30 min，并將濃縮洗滌液稀釋20倍，之后設置空白對照1孔，陽性、陰性對照各2孔，每組待測標本1份（50 μL）；進行加酶處理，除空白對照外，每孔各加酶標溶液50 μL，混勻后封板，于37 ℃水浴箱內溫育30 min；洗滌處理，將洗滌液注滿各孔，靜置5～10 s，去除洗滌液，重復4次，末次在吸水紙上拍干；行顯色處理，每孔加底物A、B各50 μL，混勻后，置于37 ℃環境下避光15 min，每孔加50 μL終止液輕拍混勻進行終止處理，最后以酶標儀讀數處理，單波長450 nm，空白孔校零后，讀取各孔光密度（optical density，OD）值；結果判斷，以OD值/臨界OD值為參考，OD值/臨界OD值≥1.00，則HBsAb、HBsAg、HBeAg為陽性，OD值/臨界OD值＜1.00，則HBeAb、HBcAb為陽性。

磁微粒化學發光法：先進行儀器準備，將配套的反應杯、洗液、吸頭等置于預定位置，以質量分數為75%酒精棉球將試劑針擦洗干凈，并檢查儀器是否處于良好運行狀態，之后將配套試劑置于儀器試劑倉內，儀器可自動對試劑盒上條碼信息進行讀取；標本準備，吸取800 μL標本于專用樣品杯，以試劑盒內附帶

2瓶定標液校正出廠時反應曲線，測定待測樣本；結果判斷，HBsAg陽性為≥0.05 U/mL，HBsAb陽性為≥

10 mU/mL，HBcAb陽性為≥0.35 U/mL，HBeAg陽性為≥0.1 PEU/mL，HBeAb≥0.15 PEU/mL，Pre-S1陽性為≥1 COI。

1.3 觀察指標 （1）2種方法檢測HBV陽性檢出率。比較磁微粒化學發光法檢測與酶聯免疫吸附法檢測在觀察組、對照組中HBV感染陽性檢出率。（2）2種方法檢測血清標志物陽性檢出率。比較磁微粒化學發光法檢測與酶聯免疫吸附法檢測在觀察組中HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb、Pre-S1Ag陽性檢出情況。（3）2種方法診斷效能。以HBV-DNA診斷為金標準，分析磁微粒化學發光法與酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎的靈敏度、特異度，靈敏度=真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）×100%，特異度=真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）×100%，準確度=（真陽性例數+真陰性例數）/（真陰性例數+真陽性例數+假陰性例數+假陽性例數）×100%。

1.4 統計學方法 采用SPSS 22.0統計學軟件分析數據，計數資料以百分比表示，用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2? ?結果

2.1 2種方法檢測HBV感染陽性檢出率 磁微粒化學發光法檢測在觀察組中HBV感染陽性檢出率高于酶聯免疫吸附法，差異有統計學意義（χ2=4.348，P=0.037）；2種檢測方法在對照組中陽性率相比，差異無統計學意義（χ2=0.592，P=0.442），見表1。

2.2 2種方法檢測血清標志物陽性檢出率 磁微粒化學發光法檢測HBsAb陽性率、HBcAb陽性率等均高于酶聯免疫吸附法，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

2.3 2種方法檢測診斷效能 磁微粒化學發光法檢測靈敏度、準確度較酶聯免疫吸附法高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3、表4。

3? ?討論

HBV屬于嗜肝性病毒，進入人體后可迅速于肝臟部位大量復制，并與機體免疫反應相互作用，促使肝臟發生慢性炎癥反應，造成大量肝細胞損害，引起肝功能障礙[7-8]。HBV持續復制還可引起肝臟組織纖維結締增生，導致大量細胞外基質沉積，最終形成肝纖維化，甚至增加肝癌風險，威脅患者生命。同時，HBV感染后存在較強傳染性，若未能及時治療，還可增加傳播風險，加重社會負擔。目前，臨床對于乙型肝炎多以早確診、早治療為原則，以降低患者體內HBV病毒載量，減輕肝臟損傷，并降低傳播風險。

HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb及Pre-S1為乙型肝炎常見血清標志物，其表達與HBV感染及病情活躍程度存在明顯相關性，故通過檢測上述指標變化，有助于HBV感染的確診，并評估病情嚴重程度。酶聯免疫吸附法為當前血清標志物的常見檢測方法，具有操作簡單、檢測迅速、價格低廉等特點，通過連接酶與待檢測物引起特異性反應，從而檢出陽性標本，便于疾病早期治療[9-10]。但酶聯免疫吸附法試劑受保存方法、制作工藝等方面的影響，穩定性相對較差，加之病原體侵襲機體到出現免疫反應存在一定窗口期，使得酶聯免疫吸附法存在一定漏診、誤診風險，仍需尋找更為精確的檢測方式，提高HBV感染檢出率。本研究結果顯示，磁微粒化學發光法檢測在觀察組中HBV感染陽性檢出率高于酶聯免疫吸附法，磁微粒化學發光法檢測HBsAb陽性率、HBcAb陽性率高于酶聯免疫吸附法，磁微粒化學發光法檢測診斷HBV感染靈敏度、準確度高于酶聯免疫吸附法。提示磁微粒化學發光法在檢測乙型肝炎血清標志物中具有較高應用價值，能提高HBV感染診斷靈敏度、準確度，值得廣泛應用。磁微粒化學發光法是新一代診斷技術基礎平臺，在檢測過程中能將待測抗原、堿性磷酸酶標記抗體等形成復合物，并借助熒光素抗體的磁性微粒分離復合物、未結合物質，清洗沉淀復合物后再加入酶促化學發光底物，在酶的作用下促使底物裂解成激發態中間體，之后回到基態過程內產生發光反應，即可通過儀器檢測發光強度，進而獲得檢測結果[11-12]。相較于酶聯免疫吸附法，該技術下免疫磁珠表面質量比高，可與更多抗體相結合參與免疫反應，且免疫磁珠表面通過共價鍵結合抗體，吸附性更堅固。免疫磁珠粒徑小，在溫育中能于反應液內均勻分散，近似于均相反應，故具有反應迅速、高均一性等特點，檢測結果更為準確。磁微粒化學發光法試劑均為原裝配套試劑，儀器檢測過程中可自動進樣，不僅能降低工作強度，還可減少人為因素所致的誤差，進一步提高診斷準確率。

綜上所述，磁微粒化學發光法檢測血清標志物在乙型肝炎診斷中應用價值高，能提高診斷靈敏度、準確度，利于盡早明確診斷，及時予以針對性治療，為乙型肝炎防治工作開展提供依據。

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